牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

王中光  张守发  曹世诺  贾立军  薛书江  田万年  王暖成 《中国预防兽医学报》2010,32(2)

为建立快捷、灵敏的牛瑟氏泰勒虫(T.sergenti)检测方法,本研究以感染牛T.sergenti的阳性血液为试验材料,建立了牛T.sergenti P33表面蛋白基因环介导等温扩增(LAMP)检测技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显示,扩增产物经显色、电泳、酶切鉴定后,LAMP方法扩增牛T.sergenti产物检测管显色后呈阳性反应,最低检测量为2.3fg/μL模板DNA,比普通PCR高10倍,牛T.sergenti LAMP产物电泳后呈特征性梯状条带,而弓形虫等对照组均无扩增条带。说明本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛T.sergenti的检测。  相似文献   

羊泰勒虫病半套式PCR诊断方法的建立及初步应用     

田万年  丁德  贾立军  薛书江  张守发 《黑龙江畜牧兽医》2008,(10)

试验根据羊泰勒虫 18S rRNA基因序列设计了3条引物,建立了羊泰勒虫病半套式PCR诊断方法.该方法是基于一次PCR的一种提高PCR敏感性的方法,同时也保证了产物的特异性,并对吉林省珲春地区的65份羊抗凝血进行检测,旨在为今后羊泰勒虫病的诊断和流行病学调查奠定基础.  相似文献   

ASB12基因SNPs位点多态性与延边黄牛生长性状关联分析     

冯贺  赵英哲  孙学钊  田万年 《畜牧与兽医》2019,(9):11-16

为研究延边黄牛细胞因子信号转导相关(ASB12)基因多态性与延边黄牛体尺性状的相关性,以203头同等饲养条件下延边黄牛阉牛为研究对象,采用PCR-RFLP技术检测ASB12基因的SNPs位点,并将其与延边黄牛体尺性状进行关联分析。结果:ASB12基因存在2个突变位点,分别为T709C突变,导致氨基酸Leu→Pro的错义突变;C1039T突变,导致氨基酸Pro→Leu的错义突变。χ~2检验显示,2个突变位点在所检测延边黄牛群体中处于Hard-Weinberg平衡状态(P0.05)。关联分析显示,延边黄牛ASB12基因2个突变位点的不同基因型与体高、体斜长差异显著(P0.05)。将2个突变位点合并基因型分析结果表明,组合AACG基因型个体在体高和体斜长显著高于组合BBGG型个体(P0.05)。初步认为ASB12基因对延边黄牛生长性状的有显著影响,其中组合AACG可能是影响延边黄牛生长性状的最佳基因型组合。  相似文献   

牛HSL基因的克隆和生物信息学分析     

刘燕  李赞  田万年 《畜牧与饲料科学》2019,40(6):9-12

旨在克隆牛HSL基因的CDS序列,并对该基因进行生物信息学、组织表达谱分析。根据GenBank登录的牛HSL基因序列(NM_001080220)设计1对引物,对牛组织样品中的HSL基因CDS序列进行RT-PCR扩增及序列测定;利用半定量RT-PCR方法检测HSL基因在牛各组织中的表达情况;利用生物信息学软件对其所编码的牛HSL蛋白进行分析。结果显示,获得的牛HSL基因CDS全长为2271bp,编码756个氨基酸,与GenBank登录的牛HSL基因同源性最高,为99.9%。HSL蛋白含有一个HSL-Nsuperfamily保守结构域,无信号肽结构,具有疏水性。半定量RT-PCR显示,HSL基因在检测的心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肝脏、大网膜、皮下脂肪、肌肉8种组织中均有表达,其中在大网膜和皮下脂肪中表达量较高,在肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、肌肉和心脏中度表达。该试验可为研究牛HSL蛋白的结构和功能提供参考。  相似文献   

弓形体RH株在3种传代细胞中增殖情况的比较     

薛书江  田万年  陈媛媛  张守发  胡闯 《畜牧与兽医》2007,39(5):41-42

为建立有效适用的弓形体体外培养方法,本试验利用Vero、PK15、RK13 3种传代细胞和DMEM、MEM、RPM I1640三种培养液分别对RH株弓形体速殖子进行培养,并比较了虫体的增殖和活力情况。结果显示,利用Vero细胞DMEM培养液培养弓形体速殖子,虫体增殖快、活力强,是理想的培养方法。  相似文献   

羊泰勒虫吉林株的鉴定及系统进化分析     

田万年  徐雪雪  张佳娟 《畜牧与饲料科学》2020,41(1):116-120

为了解吉林省延边地区流行的羊泰勒虫种类,采用血涂片镜检和PCR方法对羊泰勒虫进行鉴定和遗传学分析。血涂片镜检观察发现,血涂片红细胞中存在圆形虫体。对羊泰勒虫MPSP基因生物信息学分析显示,MPSP编码的蛋白包含3个N-糖基化位点,14个潜在抗原表位,含有信号肽结构。建立系统进化树显示,分离到的3个虫株与Theileria luwenshunli(GQ281044)同源性为100%,亲缘关系较近,分离的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫。由该试验结果可以得出,吉林省延边地区流行的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫。  相似文献   

牛ACTA1基因的生物信息学分析     

张馨月  田万年 《畜牧与饲料科学》2018,39(3):17-17

应用RT-PCR方法克隆牛ACTA1基因,利用生物信息软件对该基因进行生物信息学分析。结果表明:牛ACTA1基因CDS为1134bp,编码377个氨基酸;拓扑预测表明,ACTA1编码的蛋白质可能存在4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,8个豆蔻酰化位点,含有1个ACTIN保守的结构域。研究结果为进一步了解牛ACTA1基因调控肉质性状的分子机理提供了有益参考。  相似文献   

羊泰勒虫与嗜吞噬细胞无浆体双重PCR检测方法的建立     

宁宇春  王圆赫  郭祥杰  朱宏阳  田万年 《中国动物传染病学报》2024,(1):110-114

为建立一种能快速对羊泰勒虫（ovine and caprine theileria）和嗜吞噬细胞无浆体（A. phagocytoph-ilum）同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的羊泰勒虫MPSP基因和羊嗜吞噬细胞无浆体16S rRNA基因设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了双重PCR检测方法。双重PCR可特异扩增出羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体目的条带,片段大小分别为875bp和394bp。该方法具有较好的特异性,对羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的最低检出浓度为16fg/μL和1fg/μL。对采集的60份血液样本进行双重PCR检测,羊泰勒虫阳性率为46.67%(28/60),嗜吞噬细胞无浆体阳性率为13.33%(8/60),混合感染率为10%(6/60)。结果表明,双重PCR方法可用于羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的快速诊断和流行病学调查。  相似文献   

猪致病性链球菌的分离鉴定     

丁德  田万年  张守发 《吉林畜牧兽医》2006,27(12):45-46

猪链球菌病是危害养猪业的一种常见传染病。猪链球菌病在临床上可分为败血症型、脑膜炎型、关节炎型、淋巴结脓肿型等,发病率和死亡率均较高。我国山东、安徽、湖北、河南、广西等20多个省、市、自治区连续报道的猪链球菌病,其中以急性败血症最为常见,且危害最为严重。链球菌血  相似文献   

牛卵形巴贝斯虫不同靶基因PCR检测方法的比较     

田万年  李荣权  薛书江  贾立军  张守发 《中国兽医杂志》2018,(2)

旨在筛选出检测牛卵形巴贝斯虫特异、敏感的PCR方法。本试验以牛卵形巴贝斯虫18S rRNA、AMA-1和CCTη基因为靶基因进行PCR检测,从敏感性、特异性和临床检出率方面进行比较。结果显示,以18S rRNA基因的PCR方法敏感性最高,最小检出率为16 fg/μL;以CCTη为靶基因的PCR方法敏感性最低,检测量为1.6 pg/μL;而以顶膜抗原(AMA-1)为靶基因的PCR方法的最低检测量为160 fg/μL。三种靶基因均扩增不出牛瑟氏泰勒虫、牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫基因片段。通过60份临床血液样本的检测结果表明,以18S rRNA基因设计引物的检出率最高,为30%(18/60),明显高于以AMA-1基因25%(15/60)和CCTη基因21.67%(13/60)。本试验为卵形巴贝斯虫病的诊断提供了更为敏感、特异的检测技术。  相似文献