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【目的】制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体,建立检测SVA抗体的间接ELISA方法,以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。【方法】利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-VP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,表达产物经纯化后皮下多点注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和中和试验鉴定多克隆抗体的特异性、反应性和中和活性。以VP2为抗原包被酶标板,通过矩阵优化、临界值确定、特异性鉴定及敏感性和重复性分析建立检测SVA抗体的间接ELISA方法。采集50份临床血清样品,分别用间接ELISA与IFA方法进行检测,分析间接ELISA方法的符合率。【结果】重组VP2蛋白以包涵体形式表达,大小为40 ku。制备的多克隆抗体能与重组VP2蛋白和SVA特异性结合,与其他病毒无交叉反应,且具有较高的中和活性。经对间接ELISA条件的优化,确定VP2包被浓度为4μg/mL,阳性血清稀释浓度为1∶250,封闭液为5%脱脂... 相似文献
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H5亚型禽流感病毒（AIV）在全球范围内的广泛传播，对禽类养殖业健康发展与公共卫生安全都造成了巨大威胁。本文阐明了以H5N1、H5N6、H5N8亚型为代表的H5亚型AIV引发的国内外多起家禽和野鸟疫情，使家禽养殖业蒙受严重损失，且H5亚型AIV易变异和重组的特点，增加了疫情防控难度，同时也极易引发跨越物种屏障向人传播事件，危害公共卫生安全等问题；系统阐述了灭活疫苗等不同种类AIV疫苗的研发进展，强调了当前灭活疫苗应用最为广泛，但亚单位疫苗、DNA疫苗、多肽疫苗等新型疫苗正日益获得关注。本文以期为禽流感疫情暴发预警，“同一健康”理念宣贯，以及疫苗研发提供理论支持。 相似文献