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为研究超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6)基因功能,本实验以延黄牛肝组织总RNA为模板,根据GenBank公布的基因序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增ELOVL6基因,将扩增产物构建到PMD18-T载体进行测序,获得延黄牛ELOVL6完整CDS序列,应用生物信息学软件分析序列及其蛋白结构。以延黄牛心、肝、肺、肾、胃、十二指肠、皮下脂肪和背最长肌总RNA为模板,通过实时定量荧光PCR技术,检测ELOVL6基因在延黄牛各个组织间的表达差异。结果表明:延黄牛ELOVL6基因共编码264个氨基酸,预测其分子量为31.282 ku,理论等电点为9.46,为疏水性蛋白,无典型的信息肽切割位点,含有18个氨基酸磷酸化位点(分值0.5),在延黄牛皮下脂肪组织中的表达量显著高于其他组织(P0.05)。本研究首次成功克隆获得延黄牛ELOVL6基因CDS完整序列,对其结构、蛋白理化特性以及该基因在延黄牛各组织间的表达差异进行详细分析研究,为开展延黄牛ELOVL6基因的功能及肉质基因筛选的工作提供理论基础和科学依据。 相似文献
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为了解血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)对牛睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)体外增殖的影响,以新生牛的睾丸组织(1 d)为研究材料,利用两步酶消化法和差速培养法分离和纯化睾丸SCs,选择标志基因检测的方法对SCs进行鉴定。利用PCR法检测PDGFRA基因在SCs中的表达,构建shRNA干扰载体转染SCs,利用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测该基因的表达量,采用MTS法检测细胞增殖。结果表明:成功分离纯化了SCs,检测到PDGFRA基因在SCs中表达,成功构建了PDGFRA基因的shRNA载体。随PDGFRA基因表达水平降低,细胞增殖减慢。该结果可为更好地了解PDGFRA在雄性动物精子发生和生殖器官发育过程中发挥作用的机制奠定基础。 相似文献
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乙醛脱氢酶(ALDH)超家族参与许多人体代谢反应,而作为超家族中的一员乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)更是在许多代谢反应中发挥着重要的作用。文章就目前已知的ALDH1A1基因的结构、表达情况和生理功能等研究现状作了较为详细的阐述。深层次的研究ALDH1A1基因的功能及其分子机制,将进一步拓展对其在其他领域的认知,如在视黄醛代谢和脂代谢中的影响,为治疗人类肥胖、神经性疾病、代谢性疾病,了解肿瘤的发生和治疗提供有价值的信息,尤其是在动物肉用性能和经济性状的选育方面,可从现代分子生物学角度提供技术支持。 相似文献
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试验旨在研究乙醛脱氢酶1A1(acetaldehyde dehydrogenase 1A1,ALDH1A1)基因内含子4多态性及其对延黄牛肉用性状的影响。选取99头18月龄延黄牛母牛,采用PCR扩增产物Sanger直接测序法测定99头延黄牛ALDH1A1基因内含子4的单核苷酸多态性(SNP),运用SPSS 19.0软件分析ALDH1A1基因内含子4 SNP与延黄牛肉用性状(体高、体斜长、十字部高、胸围、腹围、管围、体重、背膘厚、眼肌面积和肌内脂肪)的关联性。结果显示,延黄牛ALDH1A1基因内含子4存在C/T突变位点,共发现3种基因型:TT、TC和CC,2种等位基因:T和C,其中TC为优势等位基因型,C为优势等位基因。卡方适合性检验结果发现,该SNP在延黄牛群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。群体遗传参数分析发现,该突变位点的杂合度(He)相对较低,表明其在延黄牛群体中的变异较小,该位点属于中度多态(0.250.05)。结果表明,ALDH1A1基因内含子4在延黄牛中存在突变,能否作为延黄牛肉用性状的遗传标记有待于扩大样本数量进一步研究。 相似文献
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研究旨在克隆中国草原红牛肝配蛋白A5(ephrin A5,EFNA5)基因,并对其进行生物信息学分析,检测EFNA5基因在中国草原红牛不同组织中表达的差异。以中国草原红牛为研究对象,根据GenBank公布的牛EFNA5基因序列(登录号:NM_001076432.1)设计引物,PCR扩增获得EFNA5基因的完整编码区(CDS)序列后进行测序验证,利用分析软件进行序列相似性比对并构建系统进化树;分析对应的氨基酸序列蛋白理化特性并预测蛋白亚细胞定位、蛋白亲/疏水性和磷酸化位点;预测蛋白二级结构并构建蛋白三级结构模型;以实时荧光定量PCR法检测EFNA5基因在中国草原红牛各组织中的相对表达量。结果显示:中国草原红牛EFNA5基因与普通牛和美洲野牛相似性最高,分别为100%和99.8%,与羊、人的相似性分别为95.6%、97.2%,与海豚、鸡、马、猕猴、小鼠和猪的相似性较低,分别为83.6%、85.8%、84.5%、84.9%、84.1%、82.8%;EFNA5基因CDS大小为687 bp,编码228个氨基酸,EFNA5基因编码蛋白的分子式为C1183H1791N315O339S13,总原子数为3 641,分子质量为26.266 ku,理论等电点为5.97,不稳定系数为49.66,总平均亲水性为-0.313。磷酸化位点预测分析发现,EFNA5蛋白共有27个磷酸化位点;亚细胞定位结果表明,EFNA5蛋白主要位于细胞质(26.1%)、分泌系统囊泡(27.1%)、细胞核(13.0%)、线粒体(13.0%)、质膜(8.7%)、内质网(4.3%)、高尔基体(4.3%)、细胞骨架(4.3%)及液泡(4.3%)中;二级结构主要由α-螺旋、β-转角、β-折叠和无规则卷曲组成,分别占18.9%、30.2%、26.4%和24.5%,与三级结构预测结果相符;EFNA5基因在中国草原红牛不同组织的相对表达量差异较大,在肾脏和胃组织中表达量较高,在肺脏组织中表达量最少。本研究结果可为进一步筛选草原红牛肉质候选基因提供参考。 相似文献
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