草鱼脂肪酸结合蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

陈立祥  邹增丁  苏建明  章怀云  肖调义 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2008,34(1):45-49

    根据GenBank上已发表的其他物种的脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding protein, FABP)基因序列设计1对引物,从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)cDNA文库中扩增出脂肪酸结合蛋白基因,定向克隆于表达质粒载体pET32A中构建成pET32A-FABP重组体,将重组体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,以终浓度1 mmol·L-1的IPTG对其进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE电泳分析表明,与阴性对照相比,阳性克隆在分子量33 kDa处有1条明显的蛋白带,大小与预期结果一致.经光密度分析可知,目的蛋白约占总可溶性蛋白的49.5%.这为进一步研究脂肪酸结合蛋白生物学特性以及FABP基因对脂肪代谢调控规律奠定了基础.  相似文献   

α-半乳糖苷酶基因Mell在毕赤酵母中的组成型表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

张学文  唐香山  张金谌  章怀云 《农业生物技术学报》2006,14(2):269-272

用PCR方法从酵母（Saccharomyces cerevisiae）AH109中扩增出α-半乳糖苷酶的Mell基因,将其克隆至整合型载体pGAPZαA中构建成组成型分泌表达酶产物的重组质粒pGAPZα-Mell.将线性化的重组质粒pGAPZα-Mell电击转化至毕赤酵母（Pichia pastoris）KM71,在含有100 mg/mL zeocin和预先涂布有X-α-gal的YPDS平板上选择蓝色阳性菌落.发酵培养酵母的上清经SDS-PAGE分析,在53 kD处有特异带;经非变性PAGE凝胶电泳,与显色底物的反应,检测到α-半乳糖苷酶活性带.重组菌pGAPZα-Mell/KM71摇瓶发酵6 d后,培养液α-半乳糖苷酶粗酶活性为12 U/mL.  相似文献   

枯草杆菌β-甘露聚糖酶基因的克隆及表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

毛绍名  章怀云  张学文 《农业生物技术学报》2007,15(2):360-361

以能水解魔芋葡甘聚糖的野生筛选菌种枯草杆菌A33为材料，通过PCR技术从A33基因组中扩增出β-甘露聚糖酶基因编码序列。经过克隆、测序及BLAST比对分析，证实该基因编码β-甘露聚糖酶，属于β-甘露聚糖酶家族中的一员。该基因已注册GenBank（GenBank注册号：DQ269473）。将该基因构建到大肠杆菌表达载体pET-32a并转入大肠杆菌表达系统BL21（DE3），经过诱导获得了此酶的高效表达.  相似文献   

人α-干扰素对中国对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒的作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙志良  符少辉  陈立祥  陈韬  汪冬庚  章怀云 《湖南农业大学学报(自然科学版)》1999,25(2):124-126

测定了不同剂量的人α－干扰素在不同保护时间对中国对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒的作用。结果表明,人α－干扰素对中国对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒有一定作用,其中以１００ｕ／ｇ进入虾体后２４ｈ再感染病毒的保护作用较好,受到保护后,５０％的对虾死亡时间延长,比未使用人α－干扰素的延长２－４ｄ。  相似文献   

基因组步行法扩增Artemin基因上游调控序列     

陈韬  苏建明  章怀云  文祝友  何燕林  戴振炎 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2003,29(3):179-182

为克隆artemin基因上游调控序列,探明该基因表达的调控机理,分别用4种不同的具有平末端的限制性内切酶消化卤虫基因组DNA,然后与DNA接头连接,构建成无载体连接的卤虫Genome Walker DNA文库．利用基因组步行法,经2轮TD—PCR扩增出长度约750bp的artemin基因上游调控序列片段,扩增产物测序后得到2个长度分别为209bp和210bp的序列．序列分析表明：在3’—末端片段中,存在转录起始位点“TTATTT”,TATA框位于-32～-38,CAAT框则位于-75～-78．此外,在这两个片段中还存在一些潜在的TFIIB识别元件,GC盒,AT富含元件,这些元件对于该基因的转录具有一些潜在的调控作用．  相似文献   

转Hu-IFN-α基因草鱼F1代人α-干扰素表达水平的研究     

王红权  章怀云  张学文  肖调义  苏建明  唐湘北 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2006,32(1):60-62

为探明人α-干扰素在转Hu-IFN-α基因草鱼F1代中的表达水平,以转Hu-IFN-α基因草鱼F1群体为材料,随机抽取332尾鱼分离其血清后,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人α-干扰素基因在转基因草鱼F1代中的表达情况.结果表明:转人α-干扰素基因草鱼F1代表达率为52.1%,表达水平偏低,其表达水平受外界因素影响.  相似文献