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31.
利用组成型表达载体pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
为了探明乳酸菌电转化的最适条件,提高电转化效率,本试验以大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,以乳酸乳球菌ML23为受体,利用电转化方法研究了受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电场强度、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响。结果表明:含2%甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖的MRS培养基培养至对数生长中期的细胞,在电场强度11.0 kV/cm、电阻200Ω、电容25μF下电击转化,转化后细胞在SMRS培养基中培养2 h,获得了较高的电转化效率。采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率又提高了15倍以上,达1.05×105CFU/μg DNA。 相似文献
32.
33.
乙烯反应元件结合蛋白属于植物特有的一个转录因子家族,这个家族保守的DNA结合域称为ERF结构域.根据对番茄(Lycopersicon esculenturm)和其它植物物种中EREBP基因家族的同源性比较,在保守区(ERF区域)设计合成一对简并引物,通过RT-PCR扩增得到一个114bp的片段,用此片段作探针筛选番茄cDNA文库(粉红期),得到两个基因LeERFl和LeERF2.通过BLAST工具在GenBank中搜索表明,LeERFl和LeERF2基因属于EREBP家族,LeERFl与EREBP-4和DDTFRl0/A在氨基酸水平上的序列相似性为35%,LeERF2与EREBP-3和pti5在氨基酸水平上的序列相似性为46%,是新的基因.LeERFl和LeERF2的核酸序列在GenBank发表,登录号分别为AY077626和AY275554. 相似文献
34.
本研究针对通过食物链传播的严重急性呼吸综合症(SARS)病毒检测技术展开研究,建立从RNA提取SARS病毒基因的RT-nested PCR检测、质量控制在内的SARS病毒检测技术体系. 相似文献
35.
转基因产品中抗除草剂基因的PCR检测 总被引:1,自引:0,他引:1
抗除草剂作物占全球转基因作物的75%以上,并且这类作物还有不断增加的趋势。首次建立并优化了对4类转基因作物(大豆(Glycine max)、玉米(Zea mays)、棉花(Gossypium hirsutnm)和油菜(Brassica campestris var.oleifera))的5种外源抗除草剂基因(bar、pat、cp4-epspsI、cp4-epsps2和gox)的PCR检测方法,并在实践中应用。结果表明,本方法灵敏特异、结果准确可靠,可对目前批准的所有抗除草剂转基因产品进行定性检测。 相似文献
36.
bar因在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的分离和纯化 总被引:1,自引:1,他引:1
bar基因来源于P3301质粒载体,通过构建PB813测序载体对bar基因进行了测序,与GenBank中bar基因全编码区比较发现:在DNA上有两个碱基不同,但在蛋白质水平上完全相同。用PCR方法从P3301载体上克隆了552碱基的bar基因全长序列插入到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET30a( )中,构建了pET30a-bar融合表达载体并转人大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET30a-bar融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以可溶性蛋白的形式高效表达了膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),并通过金属鏊和层析一步纯化了目的蛋白。用肠激酶切除了融合蛋白的融合部分之后再一次通过金属鏊和层析,经过透析后获得了PAT纯品。 相似文献
37.
38.
反义NR转基因株的分子检测和生理特性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为了研究NR基因的作用,通过番茄反义NR转基因株的southem,northem杂交,从入地成活的139个卡那霉素筛选出的转化株中,鉴定出了2株突变体,并对其相关的生长发育、生理指标进行了测定。研究结果显示:NR基因的表达被抑制后,突变体细胞膜透性、蒸腾作用和气孔导度比野生型植株的高,但呼吸作用低于野生型;果实成熬推迟。各突变体植株的分枝数减少,节间明显伸长,茎增粗;特别是NR2突变体节间最长、且生长健壮、茎粗、叶大、开花多,但不易结实、花粉粒数量减少、花粉萌发率仅2%—3%。总之,乙烯受体蛋白NR基因被抑制后,突变体植株表现出促进生长,推迟发育和成熟,即乙烯的作用被抑制的现象。说明NR基因是乙烯生物合成和信号转导的正调节因子。 相似文献
39.
转基因产品中PAT蛋白的酶联免疫检测 总被引:1,自引:0,他引:1
建立并优化了转基因油菜(Brassica campestris )中的PAT蛋白酶联免疫检测技术。首先通过Western杂交和酶活性分析鉴定了PAT蛋白的纯度和活性。然后以其为抗原免疫新西兰大白兔制备了PAT蛋白的多克隆抗体,并采用硫铵沉淀法和protein A-Sepharose 4B对其进行了纯化。所得抗体对PAT蛋白的检测限为2×10-5 mg/mL,且与植物源的几种结构功能相关蛋白均无交叉反应。然后对植物蛋白进行初步提取,应用酶联免疫检测技术对转基因油菜(MS1/RF1 and MS8/RF3)中的PAT蛋白进行了检测,结果表明ELISA能高效地鉴别转基因和非转基因油菜. 相似文献
40.
番茄果实高质量总RNA的提取富集及RT-PCR检测 总被引:1,自引:0,他引:1
以番茄果实为材料,比较了3种在果实中提取RNA的方法,针对番茄果实多糖的特点,利用无水乙醇和异丙醇联合沉淀的方法除去多糖,改良了Trizol法.为了检验含量比较低的miRNA,利用Licl沉淀的方法进行富集.结果表明:改良Trizol法能够有效地去除多糖,提取到的RNA 28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,A260与A280比值为1.84,A260与A230比值为1.92,RNA产率为350.4 μg/g,说明利用改良Trizol法从番茄果实中提取的RNA质量好、完整性好.由此法所得的RNA可直接用于cDNA文库构建等分子生物学实验. 相似文献