Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF6多克隆抗体的制备与鉴定          下载免费PDF全文

南星羽  冯梓钊  费越越  余路  罗扬  许丹 《南方农业学报》2021,52(9):2562-2571

【目的】制备Ⅱ型鲤疱疹病毒（CyHV-2）ORF6多克隆抗体,为深入探究ORF6在CyHV-2急性感染或潜伏感染过程中的作用机制提供技术支持。【方法】利用MEGA 6.0、Adobe Illustrator CS6及BepiPred-2.0等在线软件分析CyHV-2的ORF6基因序列信息,采用PCR从CyHV-2基因组中扩增ORF6基因片段,将其连接至原核表达载体pET-28a后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导和尿素洗涤纯化获得融合蛋白。以纯化的融合蛋白ORF6免疫健康Babl/c小鼠制备ORF6多克隆抗体,并通过Western blotting和间接免疫荧光技术鉴定ORF6多克隆抗体的特异性。【结果】CyHV-2的ORF6基因全长3003 bp,与CyHV-3和CyHV-1的ORF6氨基酸序列相似性均高于30.00%,其中与CyHV-3的相似性高达39.36%;其抗原表位最可能存在于第1~300位氨基酸序列中。将PCR扩增获得的ORF6基因片段连接至原核表达载体pET-28a可成功构建重组质粒pET-28a-ORF6,转化BL21（DE3）感受态细胞后经IPTG诱导4 h即获得融合蛋白ORF6;原核表达的融合蛋白ORF6主要以包涵体形式进行表达,其分子量为17.13 kD,经6 mol/L尿素洗涤纯化后的浓度为0.1 mg/mL。以纯化融合蛋白ORF6免疫Babl/c小鼠制备获得的ORF6多克隆抗体能特异性识别融合蛋白ORF6及CyHV-2感染的异育银鲫尾鳍细胞（GiCF）;利用制备的ORF6多克隆抗体对CyHV-2感染GiCF细胞进行间接免疫荧光分析,结果在CyHV-2感染GiCF细胞周围能观察到特异性绿色荧光,而在未感染CyHV-2的GiCF细胞周围未观察到特异性绿色荧光,进一步说明ORF6多克隆抗体可特异性识别CyHV-2。【结论】制备获得的ORF6多克隆抗体能与CyHV-2感染GiCF细胞发生特异性免疫反应,即可用于鉴定CyHV-2感染,为探究ORF6蛋白功能是否与CyHV-2潜伏感染相关打下了基础。  相似文献   

水稻粳型亲籼恢复系的配合力比较分析     

文信连  李映照  陈壬生  罗扬浪  韦鸿若 《作物杂志》2006,(4):10-12

用3个不同质源的不育系和4个恢复系组成3×4不完全双列杂交,估算了空间诱变产生的2个恢复系与其对应的2个常用恢复系的株高、穗长等7个性状的配合力。结果表明:2个粳型亲籼恢复系的结实率的一般配合力均为正效应。HSP517除了穗数外,6个性状的一般配合力和特殊配合力具有较大幅度的正效应,因而认为,HSP517具有较大的应用潜力。  相似文献   

澜沧县农民教育培训体系存在的问题与对策     

罗扬 《河南农业》2018,(20)

在云南省澜沧县农业和科学技术局的正确领导下,在省市农广校的具体业务指导下,认真贯彻执行"中央一号文件"和农村工作会议精神,结合澜沧县实际,认真开展了新型职业农民培育工程项目、白玉兰现代远程教育培训、农业科技入户直通车培训等农民教育和培训工作,整体提高了参训农民、周围农民的文化基础专业技术和技能,促进了农民转移就业和增加收入。本文主要分析澜沧县农民教育培训体系存在的问题,然后提出优化建议。  相似文献   

干旱期间森林土壤的水源涵养作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

罗扬  吴鹏  丁访军  潘明亮  潘忠松 《林业科技开发》2010,24(5)

针对西南旱情比较严重的贵州省册亨县,选取了5种不同土地利用类型,对它们的土壤物理特性及其水源涵养功能进行了研究.结果表明:不同土地利用类型的土壤容重均随土层深度的增加而增加,土壤总孔隙度与毛管孔隙度都是随土层深度的增加而减小.有林地(落叶阔叶林地、灌木林地和杉木林地)的土壤物理性状要好于荒山和耕地.有林地在土壤持蓄水能力和蓄渗水能力这两方面均要远远好于荒山和耕地.森林的水源涵养功能要远高于耕地和荒山,具体排序为落叶阔叶林地(726.67 t/hm2)>杉木林地(706.80 t/hm2)>灌木林地(704.03 t/hm2)>耕地(553.17 t/hm2)>荒山(444.25 t/hm2).  相似文献   

基于互联网平台的烟叶生产资金结算中心建设与应用     

罗扬  金惠  许明江  陈雪  宾俊  王丰 《现代农业科技》2019,(2)

借助互联网平台技术,将各资金流聚接汇总于平台,实施资金结算中心管理是烟叶生产过程中一种降低资金风险、提高资金支付效率的新方案。本文在介绍资金结算中心构建及运作的基础上,分析了其2015—2017年在毕节市烟草公司的应用效益,使结算成本降低,结算效率提高,节约人工费用57.77万元,节约结算费用752.92万元。基于互联网平台的资金结算中心的建设和应用,使资金结算业务的发生和发展过程可视可控,能有效实现资金的监督和管理,提高对信息流和资金流的管控力度,确保信息安全和资金安全。  相似文献   

Nisin复合防腐剂在鲜肉中保鲜效果的研究     

李悦潇  张锐  王帅  边宏  金雨  刘美  罗扬 《农业科技与装备》2012,(2):50-52

以猪通脊肉为材料,探讨Nisin复合防腐剂的保鲜方法。试验结果表明,复合试验对照组保质期仅为7d,0.250%壳聚糖+250mg/kg Nisin+1%乳酸+1%乳酸钠效果最好,与对照组相比能明显延长鲜肉的保质期。  相似文献   

月亮山自然保护区生态旅游SWOT分析及发展策略     

赵佳  罗扬 《安徽农业科学》2016,(9):200-202

基于SWOT分析法,对贵州省月亮山自然保护区发展生态旅游的优势、劣势、机遇、挑战进行分析。根据研究结果,对保护区生态旅游发展提出了科学规划,完善管理部门,强调社区参与旅游,发展智慧旅游,创立品牌等策略,以期为月亮山自然保护区生态旅游可持续发展提供理论依据。  相似文献   

异育银鲫内参基因的筛选     

费越越  南星羽  余路  罗扬  高钟元  许丹 《水产科学》2020,39(3):306-315

内参基因在实时荧光定量PCR(qRT-PCR)中具有校准的作用,然而鲤疱疹病毒Ⅱ型感染异育银鲫内参基因目前仍未见研究报道。采用qRT-PCR技术检测不同处理条件下异育银鲫组织和尾鳍细胞GAPDH、EF-1α、18S rRNA和β-actin 4个候选内参基因在组织和尾鳍细胞的转录水平,利用软件geNorm、Norm Finder、Best Keeper和Delta Ct分析了其表达量的稳定性,以筛选出健康异育银鲫不同组织以及鲤疱疹病毒Ⅱ型感染的肾脏、脾脏和异育银鲫尾鳍细胞在不同时间均较稳定的内参基因。geNorm稳定值以及4个内参的表达量Ct值分析显示,健康异育银鲫脑、脾脏、肾脏、肌肉、鳃、肠、肝脏和心脏组织中β-actin和EF-1α都是比较稳定的内参基因;鲤疱疹病毒Ⅱ型感染肾脏和尾鳍细胞不同时间点,内参基因β-actin稳定性最佳;鲤疱疹病毒Ⅱ型感染脾脏不同时间点时,EF-1α稳定性最佳。分别以4个候选内参基因为内参分析PIN1基因在肾脏组织不同感染时间的相对表达量,结果进一步证实,PIN1基因在肾脏组织感染不同时间点以β-actin为内参时,其表达量呈下降趋势,与cDNA文库测序中的表达量分析结果一致,各时间点的表达量差异极显著(P<0.01)。本试验结果有利于研究异育银鲫在不同处理条件下基因的表达分析,可为获得精准的结果奠定理论基础。  相似文献   

抗击疫情,积极应对全力保障湖南省农产品质量安全     

易泽夫  吴景  罗扬  肖献国  黄高柳  郑跃莲  刘畅  杨韶红 《现代农业科技》2020,(20)

自抗击新型冠状病毒疫情工作开展以来,省农业农村厅把确保疫情防控期间农产品质量安全工作作为当前最重要的任务,积极主动响应和采取措施,大力开展质量监测、监管巡查、宣传培训和质量追溯等工作,全力保障疫情期间我省农产品的安全生产和消费安全。  相似文献   

浅谈煤矿自动化的未来发展状况和趋势     

罗扬  姚欣华  郑施琦 《南方农机》2017,(3)

随着我国科技水平的不断提升,自动化成了我国当前发展的目标,各行各业都在努力将工作状态发展成自动化的趋势。这种自动化的发展需要在煤矿开采行业中显得尤为重要,它能够在煤矿的开采和运输等领域发挥出惊人的作用,为煤矿的发展提供很好的促进作用。  相似文献