猪繁殖与呼吸道综合征病毒RT-PCR检测方法研究     

谢金文  王金良  管宇  肖跃强  南松剑  沈志强 《现代畜牧兽医》2010,(10)

为建立一种能够快速、确切诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的方法,根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核苷酸序列设计并合成了一对能特异性扩增PRRSV基因片段的引物,经过条件优化后,建立了检测PRRSV的RT-PCR方法,扩增病毒核酸片段长432bp.试验证明,该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,简便、快速、高效,为PRRSV的快速准确诊断及进一步的PRRSV的流行病学研究提供了重要的技术手段.  相似文献   

猪瘟病毒RT-PCR检测方法的研究     

谢金文  王金良  管宇  肖跃强  南松剑  沈志强 《养猪》2011,(1):77-79

为建立一种能够快速、确切诊断猪瘟（CSF）的方法,根据GenBank上已发表的猪瘟病毒（CSFV）核酸序列设计并合成了一对能特异性扩增CSFV基因片段的引物,经过条件优化后,建立了检测CSFV的RT-PCR方法,扩增病毒核酸片段长508bp。试验证明,该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,简便、快速、高效,为CSFV的快速准确诊断及进一步的CSF流行病学研究提供了重要的技术手段。  相似文献   

兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及活性鉴定     

杨慧  武玉香  王文秀  孙培姣  于雪  王玉茂  沈志强  肖跃强 《动物医学进展》2019,(8):6-10

为制备兔出血症病毒VP60单克隆抗体,利用HEK293T细胞瞬时表达VP60,免疫Balb/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选获得阳性克隆细胞株-5D11。利用血凝抑制(HI)、间接免疫荧光(IFA)和Westernblot等方法对5D11分泌的单克隆抗体活性进行鉴定,并对其识别区域进行了定位。结果显示,5D11能抑制病毒凝集人“O”型红细胞,与杆状病毒表达的VP60蛋白发生特异性抗原抗体反应,且其识别VP60蛋白线性抗原表位,并定位于494aa-579aa区段。成功制备了抗VP60蛋白单克隆抗体,为开展病原学检测、流行病学研究等奠定了基础。  相似文献   

兔出血症病毒次要衣壳蛋白VP12在大肠杆菌体内高效表达及特性研究          下载免费PDF全文

杨慧  刘吉山  李书光  王艳  于新友  于雪  沈志强  肖跃强 《家畜生态学报》2019,40(8):27-32

试验旨在通过原核高效表达RHDV VP12蛋白,检测同源组织疫苗免疫后该蛋白抗体的产生情况。RT-PCR扩增获得抗原遗传变异株SQ-1株兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)次要衣壳蛋白VP12基因,定向克隆插入pET32a多克隆位点,构建Trx-His tag融合原核表达载体,PCR与序列测定正确后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定分析表达产物活性。测序结果显示,所扩增VP12基因ORF(开放阅读框)为354 bp,编码117个氨基酸,IPTG诱导后目的基因获得表达,融合载体Trx-His tag的重组VP12蛋白分子量为31 ku,与预期一致,且表达蛋白存在可溶性与包涵体两种形式;Western blot结果显示,可溶性表达蛋白与兔瘟肝组织灭活疫苗免疫后攻毒制备的RHDV阳性抗体能发生良好的抗原抗体杂交反应,说明该蛋白具有良好的反应原性。研究结果为开展RHDV VP12蛋白生物学与免疫学特性研究、开发诊断试剂奠定了基础。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒SDZP株与其Marc-145细胞传代株的基因变异分析     

唐娜  张倩  王金良  魏凤  董林  毕妍丽  于新友  谢金文  肖跃强  沈志强 《动物医学进展》2019,40(9)

  相似文献   

兔瘟重组VP60蛋白间接ELISA抗体诊断方法的建立     

祖立闯  王金良  肖跃强  沈志强 《中国草食动物》2013,(4):47-50

为建立一种快速的兔病毒性出血症病毒抗体检测方法,参照已发表的RHDV基因序列,采用RT-PCR扩增了长约510 bp的VP60基因片段,连接PGEX-4T-1表达载体后获得了以包涵体形式表达的重组VP60蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测兔病毒性出血症病毒抗体的VP60-ELISA诊断方法。该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为RHDV的快速诊断、免疫兔群抗体监测和实验兔等级检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。  相似文献   

大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株的构建及其免疫原性     

李书光  管宇  肖跃强  王金良  沈志强 《中国兽医学报》2009,29(5)

为了有效预防肠毒素性大肠杆菌引起的犊牛和羔羊腹泻,利用基因工程技术构建了融合基因K99-ST1及其原核表达载体,并时融合蛋白进行了初步免疫原性分析.结果显示,将PCR获得的K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段借助pUCm-T载体,成功构建重组质粒pUCm-K99-ST1,从而获得融合基因K99-ST1;使用EcoRⅠ+SalⅠ双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET30a中,成功构建表达载体pET-K99-ST1;将该表达载体转入表达菌株BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到大小约31 000的蛋白;Western blotting显示,融合蛋白可以特异的与K99阳性血清反应;将BL21(DE3,pET-K99-ST1)诱导表达后免疫兔,ELISA检测K99抗体水平较高,乳鼠灌胃试验显示该菌株免疫后产生ST1抗体.这表明本试验已成功构建大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株BL21(DE3,pET-K99-ST1),该菌株具有良好的免疫原性,为大肠杆菌K99-ST1双价基因工程疫苗开发奠定了基础.  相似文献   

PRV、PCV-2、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用   总被引：3，自引：0，他引：3  

曲光刚  沈志强  管宇  王金良  肖跃强  孙园园 《中国动物检疫》2009,26(1):23-25

根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)核苷酸序列,设计并合成能分别特异性扩增PRV、PCV-2、PPV的引物。经条件优化,建立了同时检测PRV、PCV-2、PPV的多重PCR方法,所扩增特异性产物片段大小分别为217bp、394bp、748bp。该方法不仅特异性强、敏感性高,还克服了对上述病原分别进行检测所带来的诸多弊端,为猪伪狂犬病、猪Ⅱ型圆环病、猪细小病的临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段。  相似文献   

ETEC K88菌毛蛋白抗体PPA-ELISA检测方法的建立     

李书光  李峰  苗立中  张娜  肖跃强  陈金龙  孙翠平  沈志强 《动物医学进展》2012,33(6):95-98

以纯化的大肠埃希菌K88菌毛蛋白为包被抗原,建立了检测大肠埃希菌K88IgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件,即最佳抗原包被浓度为1μg/mL,兔抗体稀释倍数为1∶10,猪抗体稀释倍数为1∶100,确定最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉,最佳封闭时间为0.5h,血清反应时间0.5h,二抗反应时间1h,底物室温反应时间为15min,阴阳性临界值兔血清为0.33、猪血清为0.45。证实该间接PPA-ELISA方法特异性强、重复性好、敏感度高,可以作为疫苗效力检验和流行病学调查的参考方法。  相似文献   

伪狂犬病病毒Us3基因编码蛋白的功能研究进展     

郭广君  吕素芳  毕研丽  肖跃强  沈志强  丁壮 《中国预防兽医学报》2012,34(7):587-590

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Us3基因编码丝/苏蛋白激酶(Us3PK)[1]。最近研究表明Us3PK与介导病毒抗宿主细胞凋亡关系密切,Us3PK诱导的宿主细胞形态学变化与病毒在细胞间的传播能力密切相关。近年来还发现Us3PK通过磷酸化细胞内效应蛋白调控病毒自  相似文献