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信使RNA(messenger RNA,mRNA)的核酸疫苗是近年来兴起的一种新型疫苗技术。新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)的血凝素-神经氨酸酶(HN)是NDV的主要保护性抗原,可诱导机体产生中和抗体,是新城疫(Newcastle disease, ND)新型疫苗研发的重要靶点。本研究将NDV HN基因连接到含有T7启动子的载体中,并在其5′UTR和3′UTR分别引入人-β球蛋白的非编码区域以增强转录的mRNA稳定性,经质粒线性化、体外转录、cap加帽处理、mRNA纯化制备NDV HN-mRNA,将其转染至HEK-293T细胞中验证NDV HN-mRNA的表达效果,Western blot和免疫荧光试验结果表明构建mRNA候选疫苗可在HEK-293T细胞中高效表达抗原蛋白,为ND新型疫苗的研发提供新的思路。 相似文献
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研究旨在通过对采集自辽宁省辽阳某犬专业合作社犬传染性肝炎患犬病料进行分离和鉴定,了解犬腺病毒(CAV)的生物学特性。试验通过分子生物学鉴定、病毒分离、抗性测定、电镜观察、病毒特异性鉴定和动物回归试验等对分离毒株的生物学特性及致病力进行研究。结果显示,通过PCR扩增可得到1 019 bp的特异性的核酸片段,命名为CAV A22株。通过核苷酸序列分析,分离株与GenBank上登录的国内外已发表CAV参考序列的核苷酸序列同源性最高达100%。由遗传进化树可知,分离株与U77082亲缘关系较近,处于同一分支;该分离株可在MDCK细胞上连续传代,病毒含量可达105.5TCID50/0.1 mL以上;电镜观察可见圆形、无囊膜、直径约80 nm的典型病毒粒子。病毒特异性鉴定表明分离株为犬2型腺病毒(CAV-2)。病毒回归试验表明,分离株致病力较弱,加以驯化可成为一株良好的疫苗毒株。 相似文献