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41.
选用香猪2-～16-细胞期卵裂球作核供体,上海白猪卵母细胞作核受体.通过显微操作和电融合技术构成重组胚.体外培养时,以融合前1h激活、融合前2h激活及融合前不激活的卵母细胞作核受体的重组胚,发育率分别为65.8%,53.1%,33.3%.以体内、体外成熟卵母细胞作核受体胞质时,其重组胚的发育能力无显著变化(P＞0.05).作为核供体的胚胎对于重组胚的发育能力有显著影响,母体合子转变以后的胚胎作为核供体时,重组胚的发育能力下降;分别以不同细胞期胚胎(2-,4-,8-和16-细胞)的卵裂球作为核供体的NT胚发育率有显著差异(P＜0.05),以2-～4-细胞胚胎卵裂球作核供体最合适. 相似文献
42.
玻璃化冷冻对猪卵母细胞体外发育能力的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
采用猪未成熟(GV期)和体外成熟(MⅡ期)卵母细胞分组进行冷冻保护剂毒性试验,试验组经冷冻液处理,对照组不用冷冻液处理。结果表明,GV期与MⅡ期卵母细胞相比,两者经冷冻保护剂处理后,其存活率、体外受精胚卵裂率均无显著差异(P>0.05);试验组GV期卵母细胞存活率、体外成熟率及体外受精胚卵裂率虽略低于对照组(85.9%,72.4%和50.9%对91.3%,73.9%和53.3%),但差异不显著(P>0.05);试验组MⅡ期卵母细胞存活率虽显著低于对照组,但卵裂率与对照组无显著差异(P>0.05)。表明所用冷冻液及其处理程序,对卵母细胞无明显毒性。分3组对猪卵母细胞进行冷冻保存试验:I组为对照组;II组为GV期卵母细胞冷冻组;III组为MⅡ期卵母细胞冷冻组。结果表明,经开放式拉管(Open pulled straw,OPS)法玻璃化冷冻后,GV期和MⅡ期卵母细胞均获得较高的形态正常率,但GV期卵母细胞冷冻后存活率要显著高于MⅡ期卵母细胞(P<0.05)。经玻璃化冷冻后,GV期卵母细胞的体外成熟率和卵裂率均明显低于新鲜卵母细胞(42.6%和7.79%对73.9%和53.3%,P<0.05),MⅡ期卵母细胞冷冻-解冻后未获得卵裂。在GV期卵母细胞冷冻组,154枚卵母细胞冷冻后经体外成熟、体外受精及体外培养,共有12枚发生卵裂,其中6枚发育至8-细胞,3枚发育至16-细胞,3枚发育至桑椹胚。本研究表明,所用冷冻方案更适合于猪GV期卵母细胞的冷冻保存。 相似文献
43.
为研究猪未成熟期(GV期)和体外成熟期(MⅡ期)卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的GV期和MⅡ期卵母细胞制备电镜标本.GV期和MⅡ卵母细胞分3组进行处理:Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为GV期卵母细胞冷冻组,Ⅲ组为MⅡ期卵母细胞冷冻组.结果表明,所用玻璃化冷冻程序更适用于猪GV期卵母细胞的冷冻保存,GV期冷冻组卵母细胞的二乙酸荧光素(FDA)染色存活率、卵裂率均明显高于MⅡ期卵母细胞冷冻组.透射电镜观察结果发现,猪GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,主要表现为部分卵丘-卵母细胞复合体(COC)发生卵丘细胞脱落,透明带破损,卵丘细胞碎裂,卵丘细胞与卵母细胞间的连接受到破坏,卵母细胞微绒毛断裂、消失、数量减少,卵母细胞内脂滴多呈均质状.而MⅡ期卵母细胞冷冻后,皮质颗粒仍呈单层排列于质膜下,仅可见形态不规则的不均质脂滴,其周围常严重空泡化.试验表明,采用适当的冷冻方案,可以获得少量源于冷冻保存的猪GV期卵母细胞的胚胎.而猪MⅡ期卵母细胞冷冻后,经体外受精未见卵裂,脂滴严重空泡化是其最为明显的变化. 相似文献
44.
山羊超数排卵试验 总被引：4，自引：1，他引：4
芮荣 《四川农业大学学报》1991,9(3):382-386
用四种方法对30头次山羊进行超数排卵。方法1:PMSG(700～1350IU)静注+hCG(750～1000IU)或LH(150IU)静注;方法2:PMSG(1000IU)肌注+LH(100～200IU)静注;方法3:PMSG(1000～1350IU)肌注+hCG(750～1000)静注;方法4:FSH(总剂量为300IU,分六次肌注,每日二次,连用三日)+LH(100～150IU)静注。结果发现方法3得到的平均排卵数最高(7.4个/头),其次为方法4(6.5个/头),再次为方法2(3.4个/头)。方法1平均排卵数为2.4个/头。试验表明应用常规的方法3、方法4对山羊进行超数排卵是较为有效的超排方法,其中以方法3采卵手术率最高,为42.9％(3/7)。 相似文献
45.
采用扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察并比较猪未成熟(GV期)与体外成熟(MⅡ期)卵母细胞的超微结构特征.结果发现:①猪GV期卵母细胞外紧密包被着卵丘细胞,卵丘细胞突起伸入透明带内,透明带呈不规则蜂窝状;卵母细胞微绒毛相对较长、数量较多,并穿入透明带内;卵母细胞呈充满状态,卵周隙不明显;胞质内高尔基复合体发达,线粒体成簇分布于脂滴附近;脂滴表现为均质和不均质两种形式,大多以均质脂滴形式存在,脂滴周围有不连续的滑面内质网.②M Ⅱ期卵母细胞周围,卵丘细胞结构松散、扩展;卵母细胞微绒毛数量减少、变短、变粗,并从透明带内撤回;透明带上峰窝状小孔增多,小梁突起更为明显,卵周隙明显;线粒体仍成簇伴随脂滴分布,脂滴以不均质型为主,呈明显的絮状结构,脂滴外有不连续的滑面内质网;皮质颗粒以单层排列于质膜下.猪卵母细胞成熟前后会出现一些规律性变化,具有不同的超微结构特征. 相似文献
46.
47.
为了提高猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）弱毒活疫苗的耐热性能,用蔗糖、胰蛋白胨、EDTA、乳糖等成分配伍成不同组方,对PRRS病毒进行梯度真空泡沫干燥。37℃ 10 d耐老化试验结果表明,组方T28C-1、T28C-4、T28C-5和T28C-7的病毒损失均＜0.5 Lg;疫苗长期保存期试验结果表明,T28C-4、T28C-5在37℃可保存4个月,25℃及自然条件下可保存5个月以上;将37℃、25℃及4℃下保存3个月的T28C-4干燥疫苗免疫20日龄仔猪,免后2周ELISA抗体水平合格且与商品苗趋势相当。试验结果表明PRRSV泡沫干燥疫苗有很好的耐热效果。 相似文献
48.
49.
[目的]本试验旨在探究Aurora-A抑制对猪卵母细胞成熟和纺锤体组装的影响及潜在机制。[方法]猪GV期卵母细胞分组进行体外成熟培养,在各组中分别添加0、1、3和5μmol·L~(-1)Aurora-A特异性抑制剂MLN8054,观察其对卵母细胞发育与成熟的影响及纺锤体结构的变化;免疫印迹检测磷酸化Aurora-A和TACC3的表达。[结果]Aurora-A抑制导致猪卵母细胞成熟明显受阻(P0.05),且主要阻滞在Pro-MⅠ期及MⅠ期;MⅠ期纺锤体形态明显异常,出现单极或多极纺锤体,异常率显著上升(P0.05)。Aurora-A抑制后,猪卵母细胞磷酸化Aurora-A和酸性卷曲转化相关蛋白3(TACC3)表达水平显著下降(P0.05)。[结论]MLN8054处理后,猪卵母细胞减数分裂进程和纺锤体组装受阻,并抑制了磷酸化Aurora-A和其下游蛋白磷酸化TACC3的表达。 相似文献
50.
采用脂质体法将具有抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的shRNA质粒pEGFP-N1-shRNA导入PK-15细胞中,经G418药物筛选后,分离扩增绿色荧光蛋白阳性细胞,获得抗PRRSV转基因PK细胞系。通过对转染方法和条件的优化,确立最佳的转染及筛选步骤;对得到的阳性转基因细胞进行冷冻-解冻,并作PCR检测。结果表明,G418最佳筛选浓度为600μg/mL,脂质体与质粒的最佳转染比例为7∶2,最佳转染时间为24 h。本研究成功建立抗PRRSV转基因细胞系,为进一步的功能验证及体细胞核移植奠定了基础。 相似文献