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目的:将排泄-分泌抗原用于Dot-ELISA免疫学诊断试验,检测其抗原特异性和敏感性。方法经培养24h、48h、72 h排泄-分泌抗原ES1、ES2、ES3,对38头份猪旋毛虫病阳性猪血清、98头猪旋毛虫阴性血清、26头猪囊虫阳性血清、35头猪蛔虫阳性血清和21头猪细颈囊尾蚴阳性血清进行了Dt-ELISA免疫学方法检测并于粗抗原进行比较。结果排泄-分泌抗原的特异性为ES1(99.44%)、ES2(96.11%)、ES3(92.77%),敏感性ES1(97.36%)、ES2(92.11%)、ES3(84.21%)。结论排泄-分泌抗原ES1(培养24小时)抗原特异性强,敏感性高,重复性好,用于旋毛虫病的免疫诊断有重要作用。 相似文献
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根据雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)保守基因序列,设计合成一对引物并且进行PCR检测,扩增出预期的223 bp条带。该方法能在雏鹅新型病毒性肠炎病毒BC07株中扩增到特异性片段,而鹅细小病毒、鸭瘟病毒、鹅副黏病毒的扩增结果均为阴性;敏感性试验表明该方法最低检出限量为2.5×10~(-1)EID_(50)。表明所建立的PCR方法具有敏感性高、特异性强的特点。可以用来检测雏鹅新型病毒性肠炎。 相似文献
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弓形虫是细胞内寄生的一种原虫,弓形虫病是由弓形虫引起的一种重要人兽共患寄生虫病,弓形虫疫苗作为防控弓形虫病的重要措施是目前研究的热点。弓形虫进入机体后以细胞免疫为主,使得疫苗可以发挥最大功用。疫苗的免疫效果与候选抗原和佐剂的使用密切相关,不同类型的抗原和佐剂用于疫苗中能够产生不同的免疫效果。目前,弓形虫疫苗的候选抗原主要以虫体特异组分蛋白和新型表位基因为主,佐剂也从传统的弗氏佐剂拓展到了霍乱毒素、透明质酸酶和CpG-ODN等。综合考虑各方面因素进行疫苗研制,将成为生产具有理想保护性弓形虫疫苗的研究方向。 相似文献
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为了建立一种特异且敏感的华支睾吸虫囊蚴SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，试验针对华支睾吸虫线粒体细胞色素c氧化酶亚基1(CSCOⅠ)基因设计特异性引物，筛选最佳引物浓度和退火温度，绘制标准曲线，优化扩增体系和程序建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，并评价该方法的敏感性、特异性、重复性及符合性。结果表明：最佳引物浓度为750 nmol/L,最佳退火温度为57℃。标准曲线的斜率为-3.21,截距为35.23,相关系数(R2)为0.982 3。该方法的最低检出限为1×102 copies/μL;批间和批内变异系数分别为1.53%～2.59%和0.36%～0.76%,表现出良好的重复性；仅标准阳性质粒、华支睾吸虫囊蚴及肝片吸虫出现特异性扩增曲线，具有较好的特异性；与传统压片镜检法比较符合率为96%。说明试验建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法敏感、特异、稳定，为后续开展淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴的流行病学调查提供了技术支持。 相似文献
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为了能够获得刚地弓形虫RH株棒状蛋白ROP54的重组蛋白，本研究进行了弓形虫RH株ROP54蛋白编码基因的生物信息分析及原核表达。运用RT-PCR方法扩增刚地弓形虫RH株ROP54蛋白编码基因序列，并连接至pMD-18-T载体，构建出克隆质粒pMD-ROP54后，转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，测序后对基因序列进行生物信息分析。将pMD-ROP54及pET-28a经双酶切及连接，构建出原核表达质粒pET-ROP54,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况，Western blot鉴定重组蛋白的反应原性。结果显示，成功扩增出长度约1 440 bp的ROP54蛋白编码基因序列。生物信息学分析显示，测序结果与刚地弓形虫M49株比对同源性为99%。预测ROP54蛋白氨基酸序列1至26个氨基酸为信号肽，亲/疏水性最小值是-2.978,最大值是2.700。成功构建了原核表达质粒pET-ROP54,IPTG诱导后经，SDS-PAGE结果可见约52.94 kDa大小的蛋白表达，且能够被犬抗弓形虫血清识别，具有良好的反应原性。本研究成功... 相似文献