抗菌肽Thanatin转基因小鼠建立的初步研究     

张鑫  尹逊河  苗向阳  曲朝杰  张秋婷  马艳芳 《中国兽医学报》2010,30(3)

人工合成抗菌肽Thanatin基因的3条片段,利用重叠延伸PCR扩增技术得到完整的Thanatin基因,通过分子克隆方法构建出pIRES2-EGFP-Thanatin重组表达载体。然后与脂质体混合,采用睾丸打点注射将新构建的抗菌肽基因注入小鼠睾丸内,共注射公鼠5只。6周后与雌鼠交配,对新生仔鼠进行断尾,提取尾尖基因组DNA,利用PCR和Southern印迹方法对其进行检测。结果显示,得到的52只新生仔鼠中PCR检测阳性率为38.46%,Southern印迹检测阳性率为30.77%;在活体荧光成像系统下转基因小鼠呈现绿色荧光表达。通过睾丸注射法使Thanatin基因在小鼠的基因组中得到整合,为进一步研究抗菌肽的作用机理、培育抗病动物品种以及通过建立转基因动物生物反应器进行抗菌肽的大量生产奠定了基础。  相似文献   

RNA干扰技术及其应用     

李建霞  苗向阳  任惠英  丁兆忠  于忠娜 《中国农学通报》2006,22(12):5-5

RNA干扰(RNA interference, RNAi) 即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默的现象。作为一种简单有效的影响基因表达的工具，RNA干扰已经被广泛应用于许多领域，同时也为基因功能的研究开辟了一条新途径。文章综述了RNA干扰的机制及其应用方面的最新进展。  相似文献   

中国林蛙抗菌肽Temporin-1 CEa基因的真核表达载体构建     

张志崇  王春生  张秋婷  朴善花  苗向阳  安铁洙 《经济动物学报》2012,16(1):26-30

为了建立大量获取中国林蛙抗菌肽的方法,根据GenBank中的中国林蛙皮肤抗菌肽Temporin-1CEa基因的mRNA序列(EU624139)设计一对特异性引物,以提取的中国林蛙皮肤总RNA反转录出的cDNA为模板,将扩增的编码序列与pEASY-T3克隆载体连接获得Tem-T3;利用酶切、连接等分子生物学手段,将GFP基因连入Tem-T3克隆载体,再经酶切获得Tem-GFP片段,并插入真核表达载体pcDNA3.1,最终得到Tem-GFP-pcD-NA3.1重组质粒;利用脂质体转染法将该质粒转入绵羊成纤维细胞,48 h后可在荧光倒置显微镜下观察到GFP的绿色荧光表达;qPCR数据分析显示,与对照组相比,转染Tem-GFP-pcDNA3.1的绵羊成纤维细胞中融合蛋白Tem-GFP的表达量可提高约300倍。本研究为构建Temporin-1CEa基因山羊乳腺特异表达载体提供依据。  相似文献   

猪防御素PBD-1基因的克隆及其表达载体构建     

彭章华  苗向阳  郑鸿培  潘清琴 《中国畜牧兽医》2005,32(11):38-40

将猪防御素基因PBD-1分成5段人工合成,然后再通过PCR方法将这5小段延伸成完整的PBD-1基因序列,并使其两端在合成后分别带上酶切位点和保护碱基.将该基因定向插入带有相同酶切位点的真核表达质粒pcDNA3.1( )的多克隆位点上构建表达质粒.重组质粒经双酶切电泳分析、序列鉴定,表明PBD-1基因表达载体构建成功,为进一步研究PBD-1基因表达产物的抗菌活性及其抗菌机理打下基础.  相似文献   

天然鼠源噬菌体单链抗体库的构建   总被引：3，自引：0，他引：3  

邵建军  苗向阳  朱瑞良  丁淑燕  陈永福 《畜牧兽医学报》2005,36(1):98-99

噬菌体展示技术是一项利用丝状噬菌体体外表达外源基因的新技术。它模拟动物体内抗体的形成过程，将抗体片段呈现在噬菌体表面，建成噬菌体抗体库，用与亲和层析相类似的原理，从抗体库中筛选出特异性噬菌体抗体，为制备人和动物用抗体提供了极为有效的手段。单链抗体是利用基因工程技术，由一个DNA片段(Linker)将抗体重链、  相似文献   

转基因豆粕中内源基因和外源基因检测方法的建立     

于忠娜  苗向阳  单虎  李建霞  丁兆忠 《黑龙江畜牧兽医》2008,(2):50-52

抗草甘膦(Glyphosate)大豆(商品名:Roundup Ready Soybean)是在传统大豆中转入外源基因CaMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS终止子而得到的[1].由大豆加工而成的豆粕经过高温浸提、脱溶等过程,其中的DNA成分遭到破坏,容易发生降解等现象.因而如何从豆粕中有效提取DNA成分,并进行可靠的检测就成为检测部门的重要问题.  相似文献   

豆粕饲料中转基因成分的多重PCR快速检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

于忠娜  苗向阳  单虎  李建霞 《动物医学进展》2007,28(1):53-56

以大豆内源基因、35 S启动子基因、NOS终止子和35S-CTP4为检测对象,研究了对内源基因与外源基因的引物终浓度配比及退火温度对转基因豆粕多重PCR检测的影响.结果表明,建立的多重PCR方法能够准确的同时检测出豆粕中的内源基因和转基因成分.  相似文献   

单精注射法生产转GFP基因猪胚胎的研究   总被引：1，自引：1，他引：1  

苗向阳  方昌阁  邵建军  朱瑞良  任慧英 《中国畜牧兽医》2007,34(6):44-46

卵胞质内单精子注射(ICSI)的出现为治疗人类男性不育提供了新的途径。作为一种家畜胚胎工程新技术，ICSI可以解决猪的多精子受精问题。本研究用冷冻/解冻的猪精子与GFP基因孵育后对猪IVM卵母细胞进行ICSI，通过对猪ICSI卵母细胞发育能力和基因表达效率的分析，初步研究以精子为载体的转基因与卵细胞质内单精注射相结合的技术(SMGT-ICSI)生产转基因猪胚胎的技术路线的可行性。用GFP基因转染的精子注射后化学激活的ICSI卵母细胞基因表达率显著高于电激活处理的ICSI卵母细胞的基因表达率。用精子头部注射的猪卵母细胞和用完整精子注射的猪卵母细胞总基因表达效率无显著差异(P>0.05)。结果表明，用冷冻/解冻后的猪精子或精子头部与外源DNA孵育后通过ICSI方法生产转基因胚胎是可行的。  相似文献   

单精子显微注射技术的研究及其前景展望     

苗向阳 《中国农学通报》2006,22(12):9-9

单精子显微注射（Intracytoplasmic sperm injection,ICSI）技术作为辅助受精的一种手段,将体外受精研究和胚胎的显微操作技术结合起来,比以往对精子质量的要求大大降低,使其无论在畜牧业生产实践还是在哺乳动物的生殖生理基础研究中都有着十分重要的意义。本文针对ICSI技术研究概况、影响因素、应用前景及其存在问题进行简要介绍,为ICSI技术的应用提供参考。  相似文献   

绵羊抑制素shRNA慢病毒干扰载体的构建与鉴定     

张瑞杰  苗向阳 《华北农学报》2011,26(3):21-27

构建并鉴定了针对绵羊抑制素α亚基(INHA)基因的shRNA(Small hairpin RNA,shRNA)慢病毒干扰载体,为进一步制备优质、高产转基因绵羊奠定基础.设计并合成4条针对绵羊INHA基因的shRNA表达序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4)及2条阴性对照序列(NC1、NC2),将...  相似文献