豆状带绦虫TPO18基因的原核表达及保护性分析     

韩进欢  苟惠天  尚清炎  孙晓林 《中国农业科学》2014,47(15):3077-3084

【目的】明确重组蛋白 pGEX-TPO18 的免疫保护效果。【方法】提取豆状带绦虫六钩蚴 RNA,根据带科其他种属绦虫 18 kD 基因的保守区设计引物,5′端分别引入EcoR I、Xho I限制性酶切位点,RT-PCR 扩增,产物克隆于 pMD18-T中进行序列测定,并对序列进行生物信息学分析。将纯化后的 PCR 产物和质粒 pGEX-4T-1 分别用 EcoRⅠ＋XhoⅠ双酶切,回收目的片段,连接后转化至 E.coli BL21感受态细胞,挑斑摇菌,通过 PCR 方法和重组质粒测序技术进行鉴定,将鉴定正确的重组表达质粒命名为 pGEX-TPO18。用 IPTG 诱导表达重组质粒,收集菌体进行 SDS-PAGE 分析,用 GST 琼脂糖树脂纯化 TPO18 蛋白,进行 Western blottting 检测。将纯化后的重组蛋白分别乳化弗氏佐剂、206 佐剂、氢氧化铝佐剂后免疫家兔,每次 50 μg/只,共免疫 3 次,末次免疫后 34 d 每只家兔感染 1 500 个虫卵,感染 58 d 后扑杀并计算各免疫组减囊率。免疫前后每隔 7 d 采血分离血清,ELISA 法检测血清抗体水平,以 40 µg•mL-1重组蛋白包被酶标板,血清 1﹕200 稀释,检测血清样品的 OD492nm 值。【结果】TPO18 基因的 RT-PCR 扩增产物为 339 bp, 与预期大小相符;测序结果表明无碱基突变,重组质粒pGEX-TPO18构建成功。pGEX-TPO18 在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为 38.6 kD 的可溶性蛋白,Western blotting分析结果显示兔抗豆状囊尾蚴阳性血清与重组蛋白在38.6 kD处有一条明显的反应条带,表明该重组蛋白具有反应原性。经ELISA检测,免疫后7 d 免疫组家兔抗体水平开始升高,第43 天达到峰值。经口感染虫卵后,免疫组抗体水平开始降低,但仍保持一定水平。家兔免疫保护试验表明弗氏佐剂、206 佐剂和氢氧化铝佐剂免疫组减囊率分别为 79.13%、65.66% 和 50.43%。【结论】研究表明弗氏佐剂免疫效果较好,有望研制出抗豆状囊尾蚴病的高效疫苗。  相似文献   

刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3的克隆与原核表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

苟惠天  王艳华  李文卉  李航  付宝权  张德林 《甘肃农业大学学报》2008,43(5)

根据Genbank中编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术对刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3进行克隆、表达及鉴定.结果表明:克隆的MIC3基因的开放阅读框与Genbank收录的MIC3基因在核菌酸和氨基酸水平上高度一致,说明弓形虫MIC3蛋白的高度保守性;构建的原核细胞表达质粒PET-MIC3表达产物分子量为46 ku,且经Western-blot显示可被猪抗弓形虫免疫血清识别.  相似文献   

塔里木河上游河岸胡杨径向生长对温度的敏感性   总被引：1，自引：1，他引：0  

苟晓霞  叶茂  汪亮亮  苟晓红 《干旱区研究》2018,(4)

基于塔里木河上游近64 a的气象数据和上游河岸胡杨年轮资料,分析塔里木河上游河岸胡杨径向生长特征及其与气候因子的关系,并采用敏感度分析方法研究胡杨径向生长的敏感温度。结果表明:(1)近170 a来,胡杨年轮生长出现了两个峰值和一个低值,两个峰值出现在1857年和1879年。在1879年以后年轮生长呈现明显下降趋势,1955年达到最低值。此后年轮生长又开始出现增加趋势,1989年以后年轮生长略微降低。(2)树轮年轮指数与6—9月的平均温度呈现显著负相关,说明温度是限制塔里木河上游河岸胡杨径向生长的主要因子。随着温度的上升,胡杨径向生长呈现逐渐减小的趋势。(3)河岸胡杨径向生长对温度变化响应敏感度不同。随着温度上升,胡杨径向生长灵敏度降低幅度呈现先增强后减弱的趋势,灵敏度最大值所对应的温度为18.6℃。因此,该采样区域的胡杨径向生长的最佳温度是18.6℃。  相似文献   

青贮玉米和粮饲兼用玉米新品种在天水市引种初报          下载免费PDF全文

张永明  苟红玉 《寒旱农业科学》2018,(7):35-39

在天水市干旱区全膜覆盖栽培条件下,对引进的8个青贮玉米及10个粮饲兼用玉米新品种在不同生态区域进行了观察。结果表明,郑青贮1号和豫青贮23生物产量较高,生物产量分别平均为112 543.2、109 341.0 kg/hm2,且田间长势强、生长整齐,抗病性较好,可作为青贮玉米品种应用。甘玉23和陇单4号生物产量分别是120 557.7、114 372.8 kg/hm2;在不同区域干籽粒产量也位居前列,均在13 815.0 kg/hm2以上,高产稳产,综合性状较好,可作为粮饲兼用玉米主栽品种。  相似文献   

16个苹果品种非浓缩还原汁的理化特征分析   总被引：3，自引：2，他引：1  

苟小菊  田由  郭玉蓉  杨曦  侯燕杰 《中国农业科学》2018,51(4):800-810

【目的】通过研究16种苹果非浓缩还原汁（not from concentrate,NFC）果汁的8项理化指标,利用相关性分析明确指标间的关系,以简化NFC果汁品质的评价指标。此外,利用多元数据处理对不同品种苹果NFC果汁进行归类,以找到NFC果汁生产中制汁和智能复配的替代品种,为NFC果汁产业发展提供理论参考。【方法】以16个苹果品种为试材,经榨汁、灭酶、巴杀、热灌装等单元操作制备NFC果汁。通过测定16种果汁的可溶性固形物含量、pH、可滴定酸含量、固酸比、表观黏度、浊度、总酚含量及色泽品质（L^*、a^*、b^*、C^*、h°）指标,采用单因素方差分析与相关性分析对测定结果进行显著性和相关性分析。此外,利用主成分分析（PCA）、线性判别分析（LDA）、聚类分析（CA）多元数据处理方法,对16种果汁的理化指标数据矩阵进行分析,获得16个苹果品种的综合品质分类。【结果】16种苹果汁的各项理化指标均存在显著差异,其中,‘新世界’的可溶性固形物含量和浊度最高,分别为15.7 °Brix和3 720 NTU;‘澳洲青苹’的pH最低,为2.74;‘红玉’的可滴定酸含量最高,为9.6 g·L^-1（苹果酸当量）;‘秦艳’的固酸比最高,为39.24;‘元帅’‘恩派’‘桔苹’都表现出最高的表观黏度,均为3.75 mPa·s;‘富士’的总酚含量最高,为775.94 mg·L^-1（没食子酸当量）。果汁pH与固酸比（R²=0.844）、浊度与L^*值（R²=0.967）均呈极显著正相关关系（P<0.01）,pH与可滴定酸含量（R²=-0.896）、固酸比与可滴定酸含量（R²=-0.918）均呈极显著负相关关系（P<0.01）。PCA、LDA和CA的分类结果完全一致,16个品种的NFC苹果汁可分为3大类,同一大类中各品种之间不同理化指标差异较小,品质、色泽十分接近,可作为NFC果汁生产和智能复配的可替代品种。【结论】可溶性固形物含量、可滴定酸含量、色值、表观黏度、总酚含量5项理化指标,可全面反映NFC果汁的品质。在果汁品质分类中,‘玉华早富’和‘乔纳金’归为一类,‘新世界’和‘秦冠’归为一类,‘新红星’‘富士’‘桔苹’‘自由’‘秦艳’‘澳洲青苹’、‘秋香’‘粉红女士’‘元帅’‘恩派’‘凉香’‘红玉’归为一类,同一类别中NFC果汁品质接近,可作为制汁和智能复配的替代品种。  相似文献   

黄壤甘蓝—烤烟模式下氮钾利用对氮钾配施的响应     

魏全全  赵欢  张萌  周开芳  左明玉  苟世新  郑明强  邵代兴  肖厚军 《江苏农业科学》2019,(17)

探讨周年内氮钾的分配,明确适合贵州黄壤甘蓝—烤烟模式的氮钾配施模式,为烤烟和甘蓝节肥减施、高产高效栽培提供理论依据。于2016—2017年在贵州省绥阳县开展氮钾不同配施大田试验,以甘蓝和烤烟为试验材料,在一个种植周期内,控制氮磷钾总量一致,设置4个氮钾配施处理,即T1处理(甘蓝季高氮中钾、烤烟季低氮中钾)、T2处理(甘蓝季低氮中钾、烤烟季高氮中钾)、T3处理(甘蓝季中氮低钾、烤烟季中氮高钾)和T4处理(甘蓝季中氮高钾、烤烟季中氮低钾),研究不同氮钾配施对甘蓝和烤烟产量、养分吸收、化学成分以及土壤养分的影响。结果表明,T1处理甘蓝产量最高,达73 290 kg/hm~2,显著高于其他处理;T3处理烤烟产量最高,为1 605 kg/hm~2,显著高于T1和T4处理。周年经济效益以T1处理最高,为106 847.0元/hm~2,高于其他处理3 091.0～5 409.0元/hm~2。甘蓝氮素吸收量以T1处理最大,达135.6 kg/hm~2,显著高于T2、T3、T4处理19.8、32.8、9.5 kg/hm~2,烤烟氮素吸收量以T3处理最大,为77.7 kg/hm~2,显著高于其他处理5.7～8.6 kg/hm~2;甘蓝钾素吸收量以T4处理最大,达104.1 kg/hm~2,显著高于T1、T2、T3处理3.0、15.1、39.6 kg/hm~2,烤烟钾素吸收量以T3处理为最大,为101.7 kg/hm~2,显著高于其他处理16.4～31.3 kg/hm~2,从周年轮作养分吸收看,T1处理氮素和钾素养分吸收量分别为204.7、184.6 kg/hm~2,高于其他处理。不同氮钾配施影响烤烟化学成分,总体化学成分含量合理,内在协调。与甘蓝种植前相比,烤烟收获后土壤pH值、碱解氮、有效磷和速效钾均具有不同程度升高。综上所述,在黄壤区甘蓝—烤烟周年种植体系中,甘蓝季应重视氮肥施用,烤烟季应重视钾肥施用,综合周年效益和土壤养分来看,应选取甘蓝季高氮中钾、烤烟季低氮中钾的养分分配方式。  相似文献   

贡嘎山地区公路路域植被生态恢复研究     

李静  苟天雄  帅伟  姜欣华  刘韩  马志良 《西部林业科学》2019,(2)

在贡嘎山地区折多山的4个海拔(3 300m、3 450m、3 600m和3 750m)公路路域,开展3种乔木树种、7种灌木树种和4种草本植物的野外栽植试验,以筛选适宜该区域路域的植被景观生态恢复物种,并开展其恢复初期苗木养护技术研究。结果表明,海拔是影响乔木和灌木苗木成活率和保存率的主要因素,各苗木的保存率和成活率均随着海拔的降低而升高。乔木树种中云杉在4个海拔处的适应性最强,其成活率和保存率最高;随着海拔的降低,光核桃的适应性明显增强,在海拔较低处,乔木层中可以考虑加入光核桃。灌木树种中紫叶小檗和铺地柏在各海拔处均能很好地适应;随海拔降低,变叶海棠、山杏和金露梅的适应性明显提高。燕麦、小花碱茅、老芒麦和披碱草4种草本植物在各海拔的适应性均较高,草本层恢复可以考虑这4个物种。植被恢复初期,乔木和灌木树种采用"保水剂+客土栽植+插枝庇荫+地膜覆盖"养护技术可以显著提高苗木成活率。  相似文献   

高层次科技人才队伍建设中的针对性原则分析     

苟迎迎 《农家参谋》2019,(2)

当今世界的核心竞争力,就是人才的竞争。在改革开放中迅速发展的中国,同样面对着高层次人才相对短缺的现状。在国家的大力倡导之下,各地加强了对高层次科技人才的引进,以期促进、带动当地经济、科技等方面的发展。但是,各地的高层次科技人才引进都存在着问题,导致人才队伍并未充分发挥其应有的效用。究其原因,笔者认为是针对性这一原则的重要性未引起足够重视及彻底落实。  相似文献   

4种干燥方法对马茵菜品质的影响     

康三江  张海燕  苟丽娜  袁晶  宋娟 《甘肃农业科技》2019,(10):4-12

采用热风干燥、太阳能干燥、真空冷冻干燥和真空干燥4种干燥方法对野生马茵菜进行干制,测定色差、叶绿素含量、营养成分、矿质元素、复水性等指标,比较不同干燥方法下马茵菜营养成分和品质的差异。结果表明,真空冷冻干燥处理的马茵菜L*值最大,a*值最小,b*值最大,即色泽较为鲜亮,与新鲜马茵菜最为接近,叶绿素含量最高;热风干燥处理与真空干燥处理次之;而经太阳能干燥处理的L*值最小,a*值最大,b*值最小,叶绿素含量最低。在营养成分方面,太阳能干燥后的马茵菜总糖含量最高,热风干燥与真空干燥后总糖含量差异不明显,但显著高于真空冷冻干燥。在蛋白质含量和Vc含量方面,真空冷冻干燥的蛋白质含量和Vc含量最高,且显著高于其余处理;其次是真空干燥处理和热风干燥处理;太阳能干燥处理后的蛋白质含量和Vc含量最低。干燥方法对灰分影响差异不大,为110.0～117.0 g/kg。不同干燥方法所干燥的马茵菜矿物质含量均很高。真空冷冻干燥的马茵菜复水性能优于热风干燥、太阳能干燥和真空干燥,复水的前5～15 min内复水比迅速增大,达到一个较高值之后随着时间增加缓慢变化。用沸水进行复水需要时间短,复水比大于冷水复水比。综合考虑,采用真空冷冻干燥方法保持野生马茵菜的营养成分及产品品质的效果较好。  相似文献   

单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展     

史文静  委慧玲  齐玉梅  孙亚楠  薛慧文  苟惠天 《动物医学进展》2022,43(3):95-98

单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)是一种世界范围内的食源性病原菌,食用被该菌污染的食物会引起李斯特菌病,致死率高达20％～30％.单增李斯特菌广泛存在于环境、食品、人和动物宿主中,可以在极端条件下生存并引起食物污染,已成为人们关注的重要公共卫生问题.论文主要综述了近年来国内外几种关于单增李斯特菌的快速检测方法,包...  相似文献