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为建立一种能同时检测大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的多重PCR方法,试验根据大肠杆菌phoA基因、鸭疫里默氏杆菌ompA基因、多杀性巴氏杆菌kmt 1基因、金黄色葡萄球菌FemB基因的保守区域设计4对特异性引物,通过优化退火温度和引物浓度建立多重PCR方法,检验该方法的特异性、敏感性性、重复性,应用该方法检测145份病死水禽临床样品,并与传统细菌分离鉴定方法进行比较。结果表明：优化后的最佳退火温度为52℃,引物浓度为10μmol/L。建立的多重PCR方法能特异性地扩增出靶基因,沙门氏菌、链球菌、产气荚膜梭菌等临床常见菌均未扩增出条带,对大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌4种细菌的检出下限是0.4 pg/mL,单一PCR扩增ompA、kmt 1、phoA和FemB基因的检出下限分别为4×10-3,0.4,4×10-3,4×10-6 pg/mL。多重PCR方法对临床样品的检测结果与传统细菌分离鉴定方法的符合率均在90%以上。说明试验建立的多重PCR方法具有结果稳定、重复性高的特... 相似文献
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为了解贵州猪伪狂犬病(Pseudorabies)的感染情况并为其防控及净化提供依据,采用酶联免疫吸附(ELISA)法,对贵州主要猪场及屠宰场的1078份猪血清样品进行PRVɡE抗体检测。结果表明:1 078份猪血清样品中PRVɡE抗体阳性检出率为8.5%,其中,养殖场的PRVɡE抗体阳性检出率为18.1%,屠宰场为4%;不同地区猪场的PRVɡE阳性检出率以黄平县的最高,为64.4%,镇远县和贵阳市的次之,分别为14.3%和5.4%,瓮安县和贵定县均未检出;不同猪群育肥猪、妊娠母猪、保育猪的PRVɡE抗体阳性率略高于仔猪。 相似文献
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为建立鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以RA贵州分离株RAG06基因组为模板扩增并克隆鸭疫里默氏杆菌OmpA基因,构建pET32a-OmpA重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经诱导、超声、纯化后,通过SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定获得OmpA重组蛋白大小约57 KD;以OmpA重组蛋白为包被抗原初步建立ELISA方法并优化,经多次方阵检测结果显示,OmpA蛋白以2.243 mg/mL的浓度进行包被,血清以1∶100稀释,抗原包被条件为4℃过夜、封闭条件为37℃120 min、血清反应时间为37℃60 min、酶标抗体工作浓度为1∶1000、酶标抗体反应时间为37℃60 min、显色时间为15 min为最佳条件。确定临界值为0.389。特异性试验表明RA阳性血清有较好反应外,其他血清均无明显反应。批内变异系数2.77%～8.00%,批间变异系数为1.10%～7.80%。当阳性血清稀释比例为1∶1600时,仍可判断为阳性,敏感性较高。应用该方法检测贵州... 相似文献
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【目的】根据鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗,为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA(RA-G06株)、血清2型RA(RA-HS01株)地方流行株为菌种,通过涂板法测定菌株生长曲线,利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD50),将2株菌培养至终浓度为1×1010 CFU/mL后等比例混合,以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验;通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率,对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值,活菌数分别为2.1×1011和3.3×1011 CFU/mL,LD50分别为1.44×1010和2.63×108 CFU/mL;制备的疫苗安全性良... 相似文献
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为平坝区鹅养殖户的细菌病防控提供参考，对贵州省平坝区鹅养殖场细菌感染情况进行调查，从发病鹅场采集76份鹅组织样品进行细菌的分离鉴定。结果表明：61份样品中分离出细菌94株，15份样品未分离出细菌，分离率80.3%。分离大肠杆菌41株，分离率最高，为43.6%；鸭疫里氏杆菌30株，分离率次之，为31.9%；沙门氏菌16株，分离率17.0%；金黄色葡萄球菌7株，分离率7.4%；未分离到巴氏杆菌。有33份样品为单一细菌感染，有28份样品同时检出2种以上细菌。提示大肠杆菌和鸭疫里氏杆菌是引起该地区鹅场发病的主要原因。同时混合感染占比36.8%，应加强对细菌病混合感染的监测与防控。 相似文献