猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素基因的克隆与表达   总被引：6，自引：1，他引：6  

王方昆  王一成  袁秀芳  徐丽华 《中国兽医学报》2007,27(5):657-660

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）血清2型标准菌株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增ApxⅣ毒素基因特异片段1.5 kb左右,将PCR产物纯化后与pMD18-T连接并测序,结果该片段的碱基序列与GenBank中标准株序列的同源性为98%。随后将该片段亚克隆到原核表达载体pET-28a（＋）的多克隆位点,经鉴定后得到重组质粒pET-ApxⅣ,将此重组质粒转化到受体菌BL21-DL3中,并用诱导剂乳糖进行诱导表达,5 h后表达达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白约为61 000。经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。  相似文献   

肾型传染性支气管炎病毒理化特性的鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

范伟兴袁秀芳  王树迎吴延功王永玲  蒋贻海 《中国兽医杂志》1999

  相似文献   

猪衣原体感染的血清学调查     

范伟兴  袁秀芳  刘万成  李春生 《中国预防兽医学报》1998,(4)

对山东省５个地市２０个猪场的１７０头种猪血清进行鹦鹉热衣原体的间接血凝（ＩＨＡ）抗体的检测结果，除济南地区外，其他４个地市均有阳性猪检出，血清的阳性率为２．５％～２１．４％，平均为１１．８％，猪场的阳性率为９０％。说明山东省猪群中鹦鹉热衣原体的感染较为普遍。  相似文献   

斜纹夜蛾对白三叶草的危害及防治     

王建华  袁秀芳 《河南林业》1999,(3)

白三叶草(Triolium repens),亦称“白车轴草”、“白花苜蓿”。豆科,多年生草本植物。每复叶具三小叶,根节处具强壮的地表葡匐茎,花白色,多数密集成头状。因其适应性强,抗寒、耐晒、易栽培,繁殖力强,四季常绿,观赏效果好,常用作庭院和公园绿化。但此草坪易受斜纹夜蛾的危害,轻者叶片缺损、长势减弱,重则大片死亡,造成草坪斑秃。 斜纹夜蛾(Prodenia litura Fabr)又名斜纹夜盗  相似文献   

2010—2013年浙江省猪流行性腹泻病毒临床检测及PEDV S基因型分析     

杜晓莉  王一成  吴润  徐丽华  袁秀芳  李军星  周晓丽 《浙江农业学报》2014,26(3):0

2010年以来,全国大部分地区暴发新生仔猪严重流行性腹泻,给养猪业造成巨大经济损失。为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)在浙江省的流行和遗传变异情况,对2010—2013年收集的临床腹泻样品,以针对PEDV S基因N端序列的RT PCR检测病原,并测序其中的41份样品的扩增序列,分析PEDV S1基因型变异情况。临床检测结果表明：　PEDV临床检出率由2010年的4286%提高到2013年的70%以上,并且浙江省各地的检出率都在50%以上;一年中7至8月份检出率明显降低。 PEDV S1基因N端序列分析结果表明,临床检测株的S1基因与传统毒株PEDV CV777的S基因序列及中国最早检测到的基因序列亲缘关系较远,可能浙江省PEDV的流行株可能属于一个新的基因型。同时研究结果提示PEDV S基因的变异可能是现有CV777毒株疫苗免疫保护力不佳的原因。  相似文献   

大肠杆菌LTb蛋白单克隆抗体的制备和鉴定     

刘焕  王一成  袁秀芳  徐丽华 《浙江农业科学》2008,1(5):0-620

将大肠杆菌不耐热肠毒素LTb基因去除信号肽后与载体pPIC9K连接,电转化入酵母菌SMD 1168中进行诱导表达.用纯化的LTb表达蛋白免疫8周龄BALB/c鼠3次后,取脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞进行融合后,以间接ELISA和有限稀释法进行筛选,获得4株能稳定分泌抗大肠杆菌LTb单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该株单克隆抗体命名为1F2,2C2,3D6,4H6株.经Western blotting分析,这4株均能与大肠杆菌LTb表达蛋白产生特异性反应.抗体亚型鉴定表明,1F2, 2C2,3D6,4H6株均为IgG2a型.成功获得单克隆抗体为今后LTb蛋白的深入研究以及抗原表位分析提供有益价值.  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆、表达与免疫印迹   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘焕  冉多良  王一成  袁秀芳  徐丽华 《新疆农业大学学报》2008,31(4)

将猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因克隆入原核表达载体pET-28a( )的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-ORF5,将此重组质粒分别转化到受体菌E. coli BL21(DE3)中,并用诱导剂IPTG进行诱导表达,2 h后表达达到高峰.经15%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的蛋白大小约为13.75 kD.经Western Blotting分析,表达蛋白能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应,具有较好的免疫原性,为研究PRRSV亚单位疫苗奠定了基础.  相似文献   

2014—2018年浙江省3种猪支原体流行病学调查     

徐丽华  兰胜芝  李军星  余斌  张鹏超  李宝臣  袁秀芳 《浙江农业科学》2019,60(12):2368-2370

对2014—2018年浙江省内送检的临床疑似病猪进行猪肺炎支原体、猪鼻支原体、猪滑液支原体的流行病学调查,旨在了解浙江省3种支原体的流行状况,为制定有效的防治措施提供科学依据。  相似文献   

大肠杆菌LTB增强PRRSV-GP5蛋白免疫反应的研究     

王朝文  吴润  王一成  袁秀芳  徐丽华  李军星  路斌 《甘肃农业大学学报》2010,45(6)

以猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)主要中和表位所在的糖蛋白GP5为模式抗原,采用肌肉注射、皮下注射和滴鼻免疫方式免疫6～8周龄ICR小鼠,利用间接ELISA检测血清抗体,MTT法检测淋巴细胞增殖.结果表明:三免后GP5弗氏佐剂乳化组小鼠血清抗体的水平最高,LTB+GP5免疫组的抗体水平显著高于单独GP5免疫组,肌肉注射免疫组的抗体水平明显高于皮下注射组,滴鼻免疫组没有检测到特异性血清抗体;各GP5免疫组均能不同程度地诱导脾脏B淋巴细胞增殖,其中GP5弗氏佐剂乳化组、LTB+GP5肌肉注射和LTB+GP5皮下注射组B淋巴细胞增殖显著,除了GP5弗氏佐剂乳化免疫组外,其他各免疫组均无明显的脾脏T淋巴细胞增殖反应.  相似文献   

鸭瘟病毒转移质粒的构建     

张馨月  冉多良  叶伟成  袁秀芳  王一成  刘蔓雯  张存 《动物医学进展》2010,31(3):25-29

为了建立重组鸭瘟病毒技术,构建了鸭瘟病毒转移质粒。在对鸭瘟强毒和弱毒株TK基因进行测序分析后,将鸭瘟病毒TK-UL24DNA片段克隆于pUC18载体中,构建了质粒pTK;将PCR扩增的GFP真核表达盒插入pTK质粒的TK基因内部,获得转移载体质粒pTK-GFP。鸭瘟病毒TK-UL24测序分析表明鸭瘟强、弱毒株TK基因序列完全相同;转移载体携带Pcmv-GFP-SV40pA表达盒,测序验证其序列与源序列一致。pTK-GFP在脂质体介导下,转染鸭胚成纤维细胞和鸭肾细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。质粒转染细胞后,绿色荧光蛋白得到了有效的表达,为进一步开展重组鸭瘟病毒的研究和构建具有遗传标记的鸭瘟疫苗奠定了基础。  相似文献