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一种基于Ⅱ型鲤疱疹病毒衣壳蛋白72的免疫学检测方法 总被引：4，自引：1，他引：3
Ⅱ型鲤疱疹病毒(cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)是引起养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio)造血器官坏死症的致病病原。在临床筛查中基于病毒核酸的PCR和real time PCR技术已经建立,但是稳定性更强的免疫学诊断技术国内外尚无报道。本研究目的是利用Cy HV-2编码的ORF72基因(Gen Bank登录号:AFJ20502.1)所编码的衣壳蛋白作为捕获抗原,通过识别感染病毒的鱼体中的相应抗体,从而对样本进行临床免疫学检测。首先采用PCR方法从纯化的Cy HV-2基因组中扩增ORF72基因,并把该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-3,并转化到大肠杆菌中诱导表达,诱导表达的产物通过SDS-PAGE进行鉴定,对表达的重组蛋白进行纯化。用已纯化的72重组蛋白对小鼠进行免疫,制得72重组蛋白的抗体。Western blot检测表明所制备的多克隆抗体既能识别原核表达的重组蛋白,也可以识别Cy HV-2病毒粒子上的衣壳蛋白72。在上述基础上建立了基于Western blot技术的Cy HV-2抗体检测技术:用纯化的72重组蛋白作为检测抗原,鲫鱼血清用作一抗,兔抗鲫Ig M多克隆抗体作为二抗,酶标羊抗兔作为三抗鉴定鲫鱼是否存在Cy HV-2特异性抗体。在对急性感染期的临床样本检测中,本方法能在所有样本中检测出ORF72特异性抗体存在,表明72重组蛋白作为相应抗体捕获原可以用于确诊鲫鱼是否感染Cy HV-2。本研究建立的实验室免疫学检测方法为商品化免疫学检测技术的开发奠定了基础,对Cy HV-2的检验检疫具有一定的临床应用价值。 相似文献
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通过转入特定基因能诱导体细胞重编程成为多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs),这项技术为干细胞的研究和应用带来了革命性的变化,对于解决长期困扰干细胞研究领域的伦理困境和免疫排斥等问题具有重大意义。然而,目前iPSCs技术本身还不完善,面临致癌性、效率低、以病毒为载体的安全性问题以及移植后存活率低等诸多问题。主要从iPSCs的产生和筛选、应用前景及其存在的问题等3个方面进行了综述,以期为今后关于这方面的研究提供参考。 相似文献
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为研究钢结构仿古建筑双梁柱中节点的抗震性能,对4个全焊双梁柱中节点进行了水平低周反复加载试验。通过观测试件在侧向力作用下的受力过程和破坏形态,分析双梁柱中节点的受力机理。根据梁截面形式的不同,将其分为箱型截面梁与工字型截面梁2类,依据仿古建筑独特的构造特点,将各试件节点核心区划分为上、中、下3个区域。通过量测各区域内的应变大小,分析该类结构节点核心区在侧向力作用下的受理机理及破坏模式,并建立双梁柱节点的斜压杆受力模型。试验结果表明：仿古建筑双梁柱节点的破坏形式主要为沿下核心区对角线的剪切破坏,并通过理论计算分析提出一种考虑轴压比与梁截面形式的双梁柱中节点抗剪承载力修正公式。 相似文献
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以西洋杜鹃Rhododendron hybridum功能叶片为试验材料,采用改良的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取西洋杜鹃基因组DNA,并且运用L16（4^4）正交试验设计,在4个水平上对影响西洋杜鹃相关序列扩增多态性（SRAP）反应的锾离子（Mg^2＋）浓度、Taq酶用量、三磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度、引物浓度等4个因素进行了优化,确立了一套适用于西洋杜鹃的稳定可靠、重复性强的SRAP-PCR反应体系。实验发现,其最佳反应体系（20．0μL）为：Mgn浓度1．750mmol·L^-1,dNTPs浓度0．175mmol．L^-1,砌酶1．500×16．67nkat,引物0．200μmol·L^-1。利用该优化体系对24个西洋杜鹃花品种进行遗传多样性分析。从88对SRAP引物中筛选出10对扩增清晰且多态性高的引物,共扩增出217条带,其中多态性条带212条,多态性比率达97.35％。24个杜鹃品种的遗传相似系数变化范围为0．591～0．708,算术平均数的非加权配对算术平均法（UPGMA）聚类分析结果显示：在相似系数为0．590处将24个供试品种分为2个类群,在相似系数为0．623处又可分为2个亚群,说明该优化体系可应用于西洋杜鹃花品种鉴定及遗传多样性的研究。 相似文献
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PB2蛋白627位点被证实是决定甲型流感病毒宿主范围和致病性的关键因子，为深入探究H9N2禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)及其PB2蛋白627位点突变株对BALB/C小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4基因表达和组织分布的影响，该研究使用H9N2 AIV(VK627E)和该毒株PB2蛋白627位点突变株(rVK627E)感染BALB/C小鼠，分别在攻毒后第1、3、5、6 d采集肺组织，通过qRT-PCR和免疫组织化学技术对RIP3、Slit2和Robo4基因在小鼠肺组织中的特异性表达和分布进行研究。结果显示，攻毒组小鼠肺脏RIP3的表达量与对照组相比显著上升，同时VK627E组RIP3的表达量显著高于rVK627E组；Slit2和Robo4的表达量在攻毒后第1 d明显低于对照组，之后r VK627E组的表达量与对照组和VK627E组相比显著上升。免疫组织化学检测结果显示，RIP3蛋白主要分布在小鼠肺泡壁上皮细胞以及肺动脉血管内皮细胞，呈弱阳性... 相似文献
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成品油一次物流优化与协调方法研究对提高运输效率、降低运营成本具有重要意义。基于中国成品油物流体系特征，从物流优化与协调两大视角对国内外研究现状、方法进行了分析与总结。在成品油一次物流优化研究方面，就战略层与战术层而言，现有研究仍无法有效解决资源分布不匹配、供需结构不匹配的矛盾；优化方法仍以数学规划法为主，少量研究引入启发式方法或机器学习算法以应对规模庞大的难题；利用线性加权法、ε-约束法等解决多目标规划问题，有效实现了多个主体的协同优化；采取随机规划、鲁棒优化改进模型，可解决不确定性优化问题。在成品油一次物流协调研究方面，中国仍停留在定性分析阶段。为适应复杂的物流系统结构，协调方法的研究从单一契约向组合契约发展，并扩充至企业内、企业间两方面。研究成果可为成品油一次物流优化与协调方法的进一步探索提供参考，对促进理论模型与实际业务融合、多主体集中决策模型开发、收益共享协调机制建立有积极作用。（图2，表1，参68） 相似文献
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为研究饲料中添加大豆异黄酮对凡纳滨对虾生长、体组成及抗氧化能力的影响，以鱼粉、豆粕和花生饼为蛋白源，液体磷脂和鱼油为脂肪源，配制粗蛋白44%、粗脂肪8%的基础饲料，并在基础饲料中分别添加0 mg/kg(V1)、200 mg/kg(V2)和400 mg/kg(V3)的大豆异黄酮。3种实验饲料分别投喂初始体重0.78±0.01g的凡纳滨对虾8周。结果显示大豆异黄酮对凡纳滨对虾成活率和生长性能均未造成显著影响（P>0.05）。400 mg/kg大豆异黄酮组（V3）体组织灰分含量显著低于对照组（P<0.05）。凡纳滨对虾血清过氧化氢酶（CAT）活性随饲料大豆异黄酮的添加而升高，且V3组显著高于V1和V2组（P<0.05）。对虾肝胰腺超氧化物歧化酶（SOD）活性先升高后降低，V2组测得最高的肝胰脏SOD水平（P<0.05）。随大豆异黄酮添加，对虾肝胰腺丙二醛（MDA）含量逐渐降低，V2和V3组均显著低于对照组（P<0.05）。本实验结果表明，饲料中添加一定含量的大豆异黄酮具有改善凡纳滨对虾抗氧化能力的作用。 相似文献
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