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【目的】利用虾青素较强的抗氧化特性,通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖(LPS)诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响,为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础。【方法】培养液中添加1 μg·mL -1 LPS,培养子宫内膜细胞6 h,检测培养液中炎症因子TNF-α和IL-6含量,建立细胞的体外炎症模型。在此基础上去掉培养液,重新加入含1×10 -6 mol·L -1 虾青素的新鲜培养液,继续培养细胞24 h。对照组为不添加LPS或AST,LPS组为仅添加LPS,AST组为添加LPS和AST。采用ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6炎症因子分泌量以及细胞SOD和CAT酶活性,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、CDH1、TJP1的分布情况,利用荧光定量RT-PCR法和Western Blot法分别检测Claudin、CDH1、TJP1基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平。【结果】利用1 μg·mL -1 LPS培养子宫内膜细胞6 h,检测发现培养液中炎症因子IL-6和TNF-α分泌水平显著高于对照组(P小于0.05),说明LPS诱导子宫内膜细胞产生炎症反应。与对照组相比,细胞内ROS水平显著增加(P小于0.05),SOD和CAT酶活性都显著降低(P小于0.05),说明LPS诱导的子宫内膜细胞炎症造成了氧化损伤。加入1×10 -6 mol·L -1 虾青素培养细胞24 h后,发现培养液中IL-6和TNF-α因子的分泌水平显著低于LPS组(P小于0.05),同时ROS阳性细胞比率显著下降(P小于0.05),SOD和CAT酶活性都显著升高(P小于0.05)。LPS组与对照组相比,细胞膜处Claudin、CDH1、TJP1蛋白的荧光信号减弱,这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著降低(P小于0.05)。加入1×10 -6 mol·L -1虾青素培养24 h后,与LPS组相比,在细胞边缘和细胞核内可以检测到荧光信号很强的Claudin、CDH1、TJP1蛋白,而且这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著升高(P小于0.05)。【结论】虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤,减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤,对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用,为牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论借鉴意义。 相似文献
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将昆明小鼠原核胚分别与不同贴壁程度的山羊原代输卵管上皮细胞(oviductal epithelial cells,OECs)共培养,确定体细胞的贴壁程度对共培养胚胎发育的影响。然后,采用高压液相色谱仪(HPLC)测定培养液中次黄嘌呤(hypoxanthine,HX)浓度,确定不同贴壁程度体细胞降解HX的能力。结果表明:与山羊原代0ECs共培养,能很好地促进小鼠胚胎发育,发育到囊胚的比例约为60%,其中贴满1d组的胚胎发育效果最好。在此基础上,检测培养液中HX浓度,发现贴满1d组培养液中HX浓度显著低于贴满3d和5d组(P〈0.05),表明体细胞降解HX的能力随培养时间的延长而下降。 相似文献
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试验旨在研究不同仓储天数小麦的组成成分变化、瘤胃发酵特性及瘤胃降解规律。在小型砖混结构平房仓内对1 t袋装(每袋40 kg)小麦进行仓储,小麦初始干物质(DM)含量为89.87%,在储存1、180、360、540、720 d时检测小麦的常规营养成分、淀粉、脂肪酸、氨基酸、霉菌毒素含量,采用瘤胃发酵体外模拟和尼龙袋法分析小麦瘤胃发酵参数及干物质(DM)和淀粉的瘤胃降解率和降解参数。结果表明:随着储存时间的延长,小麦DM含量极显著降低,直链淀粉含量显著增加,支链淀粉含量显著降低,其他常规营养成分、脂肪酸和氨基酸含量没有显著变化;小麦在整个储存过程中没有检测出霉菌毒素;经过24 h体外培养后,不同储存天数小麦的产气量、发酵液pH、氨态氮(NH3-N)和挥发性脂肪酸(VFA)浓度等指标差异不显著,DM和淀粉的3、6、12、18、24 h瘤胃降解率和动态降解参数没有显著差异。由此可见,初始含水量小于10.13%的平房仓储袋装小麦2年内不易发生霉变,且平房仓储2年内袋装小麦对牛的可利用价值基本不变。 相似文献
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胚胎早期死亡及流产严重影响母牛的繁殖性能,造成极大的经济损失。本研究利用不同浓度双氧水(H2O2)处理子宫内膜细胞6 h,通过流式细胞仪、酶标仪分别进行细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)比值检测,建立子宫内膜细胞氧化应激模型。在此基础上,利用流式细胞仪检测细胞凋亡和生长周期,利用荧光定量RT-PCR和Western blot检测Fas/FasL信号通路关键基因的mRNA和蛋白表达水平,并利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)抑制子宫内膜细胞中Fas基因表达,进一步验证Fas/FasL凋亡通路是否参与氧化应激诱导的子宫内膜细胞凋亡。所有试验都重复3次以上。结果发现,利用200 μmol·L-1 H2O2处理子宫内膜细胞6 h,细胞内ROS阳性水平急剧增加(P < 0.05),SOD和CAT活性以及GSH与GSSG比值都显著降低(P < 0.05),说明H2O2处理对子宫内膜细胞造成氧化应激损伤。在此处理条件下,生长周期中S期比例显著降低(P < 0.05),凋亡比例显著提高(P < 0.05);Fas/FasL凋亡通路中关键基因Fas、Caspase 8和Caspase 3的mRNA表达水平显著升高(P < 0.05);培养液中FasL浓度以及Fas、Caspase 8和Caspase 3蛋白表达水平显著升高(P < 0.05)。进一步研究发现,抑制Fas基因表达在一定程度上降低了氧化应激诱导的细胞凋亡比例以及Fas/FasL凋亡通路中关键基因的表达水平。总之,本研究结果表明,氧化应激通过激活Fas/FasL信号通路促进奶牛子宫内膜细胞凋亡,这为解释氧化应激对子宫内膜细胞的不利影响提供了新的见解。 相似文献
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不同物种输卵管上皮细胞培养、纯度检测及支持小鼠胚胎发育的能力 总被引:3,自引:0,他引:3
针对不同物种采用不同方法培养小鼠、山羊和鸡输卵管上皮细胞(OECs)并检测上皮细胞纯度,在此基础上比较了它们支持小鼠胚胎发育的能力。结果表明,3种细胞都能很好地生长,培养的细胞几乎全为上皮细胞(Vi-mentin单克隆抗体检测显示,小鼠、山羊和鸡OECs的阳性细胞率分别为2.4±0.3、1.3±0.3和1.8±0.4)。昆明白小鼠原核胚与小鼠、山羊和鸡OECs共培养,发育到囊胚的比例分别为61.7%、57.2%和56.2%,差异不显著(P>0.05)。说明鸡和山羊OECs能很好地支持小鼠胚胎发育。 相似文献
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从美国引进高产奶牛性控雌性胚胎,在农村条件下,选择自然发情的黄牛作受体,移植合格受体牛648头。结果显示,自然发情黄牛924头中,经直肠检查合格受体牛648头,使用合格率为70.13%(648/924);氯前列烯醇同期处理476头,使用合格率为36.13%(172/476),差异极显著(P〈0.01)。80~100d怀孕检查,自然发情移植成功率41.98%(272/648),同期发情移植成功率40.12%(69/172),差异不显著(P〉0.05)。自然发情黄牛不同黄体级别的移植成功率分别为:A级44.09%(41/93),B级42.43%(199/469),C级37.21%(32/86),差异不显著(P〉0.05)。单胚移植580头,移植成功率42.41%(242/580),双胚移植68头,移植成功率44.12%(30/68),差异不显著(P〉0.05)。正常胚胎单枚移植541头,移植成功率42.51%(230/541),裸胚单枚移植39头,移植成功率30.77%(12/39),裸胚比正常胚移植成功率低11.74%。怀孕牛已出生犊牛83头。其中母犊79头.公犊4头,母犊占95.18%,与自然发情的性比例(50%)相比较,差异极显著(P〈0.01)。 相似文献