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鸡传染性支气管炎病毒HN99株核蛋白(N)基因PCR产物经BamHⅠ、HindⅢ双酶切,克隆入大肠杆菌原核表达载体pMAL-p2X,构建重组表达质粒pMAL-p2X-N,转化大肠杆菌TB1并进行诱导表达。通过pMALTM融合蛋白纯化系统对表达产物进行非变性纯化,将纯化的N蛋白按常规方法免疫新西兰大白兔,制备兔抗鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的多克隆抗体,并用ELISA法检测其生物活性。结果表明,表达的重组核蛋门纯化后出现2条带,相对分子质量分别约为92和82 ku,与Western blot出现的2条蛋白带一致;纯化的重组蛋白经裂解因子作用后,出现2条蛋白带,相对分子质量分别为45和35 ku,与预期结果相符合;制备的多克隆抗体可与不同鸡传染性支气管炎病毒株发生反应,与亲本毒株的反应性略高于与其他毒株的反应性。以上结果表明,原核表达的可溶性N蛋白具有高度的生物活性,有望作为新的基因工程抗原用于鸡传染性支气管炎病毒的群特异性诊断。 相似文献
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贺秀媛 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》1999,27(1):60-63
对加入０．５ｇ／Ｌ左旋咪唑的ＮＤ灭活油乳剂苗试验组,和未加左旋咪唑的对照组分别以０．１,０．２和０．４ｍＬ／羽的剂量接种４日龄雏鸡,同时设置Ⅱ系活苗免疫组,于接种后３,６,９,１６,２３ｄ测定各组鸡血清中抗ＮＤＶＨＩ抗体,于免疫后２５ｄ,用ＮＤＶ强毒攻击,观察各组的保护情况。结果表明,无论接种剂量为０．１,０．２或０．４ｍＬ／羽的灭活苗试验组,还是与Ⅱ系活苗同时使用的免疫组,加有左旋咪唑的灭活苗产生的ＨＩ抗体比未加左旋咪唑的灭活苗有显著差异（Ｐ＜０．０１）,强毒攻击保护率为１００％． 相似文献
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从陕西省周至县某肉鸡场发生疑似腺胃型传染性支气管炎的鸡群中采集病料,经鸡胚接种分离到1株病毒。电镜观察病毒粒子呈圆形或椭圆形,大小80nm~130nm,具有囊膜和纤突,呈典型冠状病毒形态;该病毒无直接血凝性,经10g/L胰酶处理后血凝价平均高达8log2以上;新城疫病毒干扰试验表明,分离毒能抑制NDV在鸡胚中增殖;人工感染3个品种的1日龄雏鸡35只,其中尼克红鸡很快出现临床症状并死亡,死亡率90%。结合流行病学调查、临床症状及病理变化初步鉴定该分离毒为腺胃型传染性支气管炎病毒。 相似文献