牛布氏杆菌病热酚法脂多糖抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)的研究     

张喜悦  王志亮  王君玮  吴延功  徐天刚  徐培莲  赵云玲 《中国动物检疫》2003,20(10):18-20

采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的热酚法提取的脂多糖(LPS)作为抗原，建立了牛布氏杆菌病的ELISA方法，对45份血清进行检测，证明本ELISA方法灵敏性较高，经阻断试验和交叉试验，证明特异性较好。同时对建立的ELISA方法进行了改进，使制备的牛布氏杆菌ELISA试验试剂盒能在4℃条件下长期保存，具有良好的稳定性和重复性。  相似文献   

一株基因VII型新城疫病毒的分离与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

孟良玉  王志亮  魏荣  赵建梅  宋翠平  毕道荣  郑东霞  赵云玲  黄素珍 《动物医学进展》2003,24(2):97-99

应用一步法RT-PCR技术成功扩增了一株自然分离NDVF基因的重要功能区片段(约500bp)。最后测序结果表明:该分离株F0裂解位点氨基酸序列为NDV强毒株特征性序列(112-R-R-Q-K-R-F117),且具有NDV基因VII型的特征性氨基酸,即101位的K和121位的V。  相似文献   

4株新出现的Ⅰ类新城疫病毒F基因的变异分析     

魏润宇  罗瑶瑶  吕艳  王静静  郑东霞  赵云玲  刘文博  刘华雷  王志亮 《畜牧兽医学报》2018,(8)

为了分析我国新出现的Ⅰ类新城疫病毒的分布和分子特性,对2016年分离到的4株Ⅰ类新城疫病毒进行F基因序列分析和遗传进化分析。结果显示:4株Ⅰ类新城疫病毒F基因编码长度均为1 662nt,共编码553个氨基酸,分离株之间氨基酸相似性为97.9%~100%。4株分离株F蛋白裂解位点的氨基酸组成均为112 ERQERL117,符合新城疫病毒弱毒株的分子特征。F基因高变区(47—420nt)遗传进化分析结果显示这4株病毒为国内新出现的基因型,利用F基因编码区全长序列构建系统进化树显示4株病毒属于基因1c亚型,与北美分离株高度同源,而与国内基因1c亚型分离株(Duck/Guangxi/1261/2015)相似性仅为95.5%~97%。监测数据表明这种新出现的Ⅰ类新城疫病毒具有在国内进一步流行和扩散的风险。  相似文献   

双重实时荧光PCR快速检测猪链球菌2型方法的建立及应用     

王伟伟  王君玮  李林  赵永刚  赵云玲  邓俊良  王志亮 《中国兽医学报》2009,29(1)

根据GenBank上公布的MRP与CPS2J的开放性阅读框保守序列,运用BEACON Desigener 2.0软件设计和合成了2对引物和其相应的荧光探针,优化各个反应物的浓度和实时荧光PCR循环程序,建立从组织中直接检测2型链球菌主要毒力因子MRP与CPS2J的实时荧光PCR方法.双重实时荧光PCR检测2型猪链球菌方法能够从病料中直接检测2型猪链球菌并可以检测出该菌的主要毒力基因MRP,运用该方法可以最低检测到24CFU/mL 2型猪链球菌,并且与其他血清型链球菌和其他病原菌无交叉反应.特异性良好.通过对8个样品在3个不同时间的检测.结果显示该方法的稳定性和重复性均很好.  相似文献   

酶联免疫吸附试验(ELISA)三种底物的比较试验   总被引：6，自引：0，他引：6  

张喜悦  徐天刚  王志亮  吴延功  王君玮  赵云玲  徐培莲 《中国动物检疫》2003,20(11):23-24

同时应用OPD(邻苯二胺)、TMB(3，3，5，5-四甲基联苯胺)、ABTS(2，2’-连氮-双-(3-乙基苯并塞唑啉磺酸))3种底物，每种底物都分别使用S1(终止液1)、S2(终止液2)和S3(终止液3)3种终止液，做牛布氏杆菌病ELISA试验，对每种底物的作用规律进行摸索。最终确认TMB更适合作ELISA试验底物之用。  相似文献   

猪链球菌2型三种重组表达蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护性评价     

王华王君玮  陈义平张维徐天刚  赵云玲王志亮 《中国兽医科技》2007,37(10):863-866

将150只BALB/c小鼠随机分成5组。用猪链球菌2型pET32a-Sly、pET32a-38ku和pET32a-Sly-38ku表达的重组蛋白制备的疫苗,以及猪链球菌2型全菌灭活疫苗分别免疫A、B、C、D组小鼠,E组为生理盐水对照。首免后第2周加强免疫1次,二免后第2周,用致死量强毒猪链球菌2型四川分离株和江苏分离株以及马链球菌兽疫亚种安徽分离株攻毒,观察攻毒后对小鼠的免疫保护率。结果,A组与C、D组对猪链球菌2型感染的保护率差异显著（P〈0.05）,而C组与D组之间保护率无显著差异;A、B、C、D组之间对马链球菌兽疫亚种安徽分离株感染的保护率差异不显著;各免疫组的保护率极显著高于对照组。结果表明,3种重组疫苗具有良好的免疫原性,能对强毒株猪链球菌2型的攻击感染起到保护作用。  相似文献   

Ⅰ类新城疫病毒分离株NDV08-046的基因组特性     

刘华雷  孙军峰  赵云玲  张维  管峰  刘文华  郑东霞  李金明  王志亮 《中国兽医学报》2011,31(5)

对1株Ⅰ类新城疫病毒分离株NDV08-046进行了全基因组序列测定和遗传进化分析.结果表明,该分离株基因组长度为15 198 nt,符合"六碱基原则".与Ⅱ类新城疫病毒的基因组序列相比,该分离株在基因组P基因的2 381～2 382 nt的位置(根据La Sota株的基因组序列,包含15 186 nt)有12 nt的插入(TGGGAGACGGGG).NDV08-046株F蛋白裂解位点的序列为112-ERQERL-117,具有典型的新城疫弱毒株特征.全基因组的遗传进化分析显示,所有的新城疫毒株能够被分为2个明显不同的分支,即Ⅰ类和Ⅱ类,NDV08-046分离株在分类地位上属于Ⅰ类新城疫病毒基因2型.  相似文献   

I类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定     

陈云霞  管峰  赵云玲  郑东霞  张维  刘华雷  王志亮 《中国动物检疫》2011,28(9):27-31

目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。  相似文献   

核酸疫苗的应用现状和发展前景     

刘文波  柴同杰  赵云玲 《湖南畜牧兽医》2001,(5):5-6,11

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA）与质粒重组后直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。因此，核酸疫苗也称基因疫苗。它包括DNA疫苗和RNA疫苗，其中DNA疫苗由于不需任何化学载体，故又称裸DNA疫苗。同单链RNA相比，双链DNA具结构稳定、操作简单等许多优点，所以DNA疫苗比RNA疫苗更受学者们的青睐。１核酸疫苗在疾病防治方面的应用自１９９０年，Wolff发现DNA能直接诱导机体产生免疫应答以来，通过国内外学者的不断努力，…  相似文献   

新城疫病毒DF-1细胞蚀斑纯化方法的建立     

赵明  戈胜强  王静静  赵云玲  郑东霞  左媛媛  于松梅  王晓真  刘春菊  王英丽  刘华雷  包静月  吴晓东  单虎  王志亮 《中国畜牧兽医》2014,41(6):51-54

本研究对DF-1细胞的培养条件及新城疫病毒（NDV）DF-1细胞的蚀斑纯化方法进行了优化摸索,结果显示相较于DMEM培养基,DF-1细胞更适宜在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中生长,DF-1细胞以3×10⁵/孔的剂量覆盖6孔板能获得最佳的铺板效果,吸附病毒后1.5 h覆盖第1层琼脂,48 h后覆盖第2层琼脂能获得最佳的蚀斑形成效果。通过对蚀斑纯化株F和HN基因测序分析,结果表明蚀斑纯化后无任何变异。通过此方法可在1个星期之内获得稳定的纯化毒株,方法简单、可重复性强、纯化效率高。  相似文献