牛胚胎玻璃化冷冻技术研究进展     

张培培  郝海生  杜卫华  庞云渭  刘岩  赵善江  赵学明  朱化彬 《中国畜牧杂志》2020,(3):19-25

胚胎冷冻保存是保存和繁殖遗传优势动物的主要工具,是胚胎移植产业的重要组成部分。目前广泛使用的冷冻方法主要有慢速冷冻和玻璃化冷冻2种。由于玻璃化冷冻具有成本低、效率高、操作简单等优点,玻璃化冷冻法越来越受到人们的重视。经过多年研究,研究人员已经在玻璃化冷冻方法、冷冻液等方面取得了大量进展,玻璃化冷冻法已经开始进入商业化应用。本文综述了牛胚胎冷冻保存技术的研究进展,旨在为相关从业人员提供一定借鉴和参考。  相似文献   

浅淡家蚕发领种和补催青工作     

陈大志  赵学明  朱元庆 《吉林农业》2009,(6)

蚕种的发领与补催青是养蚕生产的前奏,其技术环节处理的好与坏,直接关系到蚁蚕的孵化齐-与否,关系到蚕体的强健与否,也关系到蚕的好养与否,注重发领种和补催青工作,为养蚕生产打下良好的基础,才能达到好养、优质、高产的养蚕目的.  相似文献   

新鲜、玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化模式初探   总被引：2，自引：1，他引：1  

赵亚涵  郝海生  杜卫华  庞云渭  闫长亮  刘岩  赵善江  赵学明  朱化彬 《畜牧兽医学报》2019,(6):1179-1188

旨在初步分析新鲜及玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化模式。本研究采用单细胞全基因组甲基化测序技术(scWGMS)检测新鲜、玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚全基因组甲基化水平和差异甲基化区域(DMR),探讨两者之间DNA甲基化水平上的差异。结果表明,新鲜卵母细胞体外受精囊胚的整体甲基化水平显著高于玻璃化冷冻卵母细胞体外受精囊胚的整体甲基化水平(P<0.05)。采用基因本体分析(GO)和相关信号通路(KEGG)对143个DMRs分析,发现生物学过程主要显著富集在新陈代谢、生长发育、细胞定位、细胞刺激反应等,通路主要富集在生长发育、核酸结合及组蛋白乙酰化上,并筛选出几个与之相关的候选基因(FARP2、PI4KA、FAM3D、NCOR2、ZNF827等)。本研究初步发现,玻璃化冷冻牛卵母细胞体外受精囊胚的全基因组甲基化水平显著降低,且DMR区域主要集中在ATP结合、生长发育及组蛋白乙酰化,为提高玻璃化冷冻卵母细胞体外受精囊胚质量提供信息参考。  相似文献   

白藜芦醇对奶牛性控冻精品质和体外受精能力的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

李崇阳  赵亚涵  郝海生  杜卫华  刘岩  庞云渭  朱化彬  赵学明 《中国畜牧杂志》2018,(2)

本研究旨在探究不同浓度白藜芦醇处理对奶牛性控冻精品质和体外受精能力的影响。在解冻后的奶牛性控冻精中分别添加0、10~(-3)、10~(-4)、10~(-5) mol/L的白藜芦醇,各组精子在受精液中获能孵育1.5 h后,测定精子质量和体外受精能力。结果表明:添加白藜芦醇均可有效降低性控冻精中活性氧(ROS)含量、提高顶体完整活精子比例(P0.05),其中10~(-3)、10~(-4) mol/L的白藜芦醇处理对降低ROS含量最为显著;10-4 mol/L的白藜芦醇处理可显著降低丙二醛(MDA)含量并提高性控冻精的卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上所述,白藜芦醇作为一种外源性天然抗氧化剂,通过降低性控精液中过量的ROS水平、抑制精子脂质过氧化反应、保护顶体完整性,从而提高性控精子质量和体外受精能力。  相似文献   

表没食子儿茶素没食子酸酯对牛冷冻精液品质及受精能力的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄自强  王玲玲  庞云渭  郝海生  杜卫华  赵学明  刘岩  朱化彬 《畜牧兽医学报》2018,(10)

本试验旨在探究牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对精液品质及受精能力的影响。在牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度(0、5、10和20μmol·L~(-1))EGCG,38.5℃孵育1h后,检测精子动力学参数、结构完整性、精子中相关酶活力和体外受精能力。结果表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理显著提高了精子活力(TM,%)和鞭打频率(BCF,Hz,P0.05);与对照组相比,5、10和20μmol·L~(-1)EGCG处理组精子质膜和顶体完整率显著升高(P0.05);5和10μmol·L~(-1 )EGCG处理组精子线粒体膜完整率显著升高(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理能够显著提高精子中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,10μmol·L~(-1 )EGCG处理降低乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理显著提高了精子受精后早期胚胎卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理牛冷冻-解冻精液能提高精液品质及受精能力。  相似文献   

玻璃化冷冻牛GV卵母细胞全基因组甲基化模式初探     

张培培  王晶晶  郝海生  杜卫华  庞云渭  权国波  赵善江  邹惠影  郝彤  朱化彬  赵学明 《畜牧兽医学报》2020,51(5):1030-1039

旨在研究玻璃化冷冻对牛GV期卵母细胞全基因组甲基化的影响。本研究收集新鲜、玻璃化冷冻的牛GV卵母细胞，采用单细胞全基因组甲基化测序（ScWGBS）技术对新鲜、玻璃化法冷冻牛GV卵母细胞的全基因组甲基化水平进行检测，旨在揭示两者DNA甲基化模式的差异。结果表明，玻璃化冷冻不会对牛GV卵母细胞的全基因甲基化水平造成显著影响。基于基因本体（GO）和信号通路（KEGG）对140个差异甲基化区域（DMRs）进行分析，发现DMRs主要参与细胞发育、细胞骨架组织等功能，主要富集在PI3K-Akt信号通路、GnRH信号通路等，并筛选出与卵母细胞成熟（TSC2）、细胞骨架（NUDC）、细胞活力（MAFK）等相关的基因。上述结果，可为提高GV卵母细胞玻璃化冷冻效率奠定信息基础和研究方向。  相似文献   

影响体外受精生产奶牛性控胚胎的因素     

赵学明  杜卫华  郝海生  任晶晶  王栋  刘岩  秦彤  朱化彬 《农业生物技术学报》2011,19(5)

为了促进性控精液体外受精胚胎的产业化应用,本实验从卵母细胞体外成熟后卵丘细胞脱除程度(不脱除~完全脱除)、种公牛个体(A~C)、性控精液受精滴体积(30~100μL)和性控精子密度(0.3×106~1.0×106个/mL)4个方面,研究影响牛性控精液体外受精效率的因素。结果表明:(1)卵丘细胞部分脱除组的卵裂率(67±4.74)%显著高于不脱除组(41±2.23)%和完全脱除组(37.50±2.88)%(P<0.05);(2)种公牛B的性控精液进行体外受精,卵裂率(61.25±5.78)%和囊胚率(26.53±3.31)%显著高于A(42.5±3.45,17.65±3.65)%和C(30±2.62,16.67±2.36)%(P<0.05);(3)50~100μL受精滴卵裂率(60±3.54)%~(64.17±3.04)%和囊胚率(20.41±4.33)%~(23.38±4.47)%无显著性差异(P>0.05),但显著高于40、30μL的卵裂率[(48.33±2.89)%,(33±2.74)%]和囊胚率[(13.79±2.02)%,(12.12±3.73)%](P<0.05);(4)精子密度0.5×106~1....  相似文献   

pEGFP-loxP-Lox2272载体的构建及牛胎儿转基因阳性细胞筛选程序的优化     

王帅  赵学明  朱化彬  杜卫华  郝海生  王栋  刘岩  秦彤  王宗礼 《农业生物技术学报》2011,19(4)

绿色荧光蛋白(GFP)是一种分选细胞的理想标记,将绿色荧光蛋白基因定点整合到牛的Y染色体上是利用GFP分选X和Y精子的关键.本研究通过特殊的引物设计和高保真酶PCR扩增将loxp位点和Lox2272位点引入pEGFP-N3载体中,构建了重组质粒pEGFP-loxp-Lox2272.采用LipofectamineTM (Lip)2000介导线性化质粒p EGFP-loxp-Lox22 72转染牛胎儿成纤维细胞,结果显示,在质粒用量一定的情况下30μL Lip 2000转染细胞的效果最理想;转染后的牛胎儿成纤维细胞用G418筛选,结果显示,浓度为600μg/mL的G418最适合筛选转基因细胞.本实验的结果为载体改造提供了一种有效的方法并为牛体细胞基因打靶阳性细胞系的筛选提供了重要的技术参考.  相似文献   

卵丘细胞在牛卵母细胞体外受精生产胚胎中的作用   总被引：2，自引：0，他引：2  

赵学明  杜卫华  郝海生  王栋  朱化彬 《农业生物技术学报》2011,19(2)

牛体外胚胎生产是解决胚胎移植产业化胚胎来源的有效技术方法,其包括卵母细胞体成熟、体外受精和受精卵体外胚胎.而体外受精胚胎的质量是影响胚胎移植妊娠率与犊牛成活率的重要因素.体外受精过程中卵丘细胞分泌的一些重要物质(类固醇激素、细胞生长因子等),对牛卵母细胞体外成熟、体外受精以及受精卵体外发育都具有重要的促进作用.本文综合了近年来该领域的研究进展,着重分析了卵丘细胞对卵母细胞体外成熟,以及体外受精过程中卵丘细胞的分泌功能、质量和共培养体系对卵母细胞体外受精效率的影响.  相似文献   

Myostatin基因沉默绵羊成纤维细胞系的建立     

唐大运  朱化彬  吴健敏  杜卫华  王栋  赵学明  陈汉忠  林秀坤 《畜牧兽医学报》2011,42(10)

旨在获得肌肉生长抑制素( Myostatin,MSTN)基因沉默的成纤维细胞系,为进一步探索Myostatin的调控机理,获得Myostatin的基因沉默的转基因羊奠定基础.针对小尾寒羊Myostatin的基因序列,设计4条siRNA干扰序列,构建pSilencer干扰载体,转染成纤维细胞,采用RT-PCR进行筛选;构建慢病毒干扰载体,包装病毒,感染成纤维细胞,采用流式细胞技术分选阳性细胞,阳性细胞予以测序鉴定并检测沉默效果.结果,获得Myostatin基因沉默效率约90％的RNA干扰片段PSL1,包装病毒获得滴度为1×108的病毒颗粒,流式细胞技术分选得到纯度达99％的Myostatin基因沉默成纤维细胞系.采用慢病毒感染接合流式细胞术分选,能较快获得无抗性标记的转基因阳性细胞系,为培育Myostatin基因沉默的转基因羊及探索Myostatin的调控机理奠定基础.  相似文献