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EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
研究了在培养液中添加不同浓度的EGF、IGF-1以及EGF联合IGF-1对山羊有腔卵母细胞体外成熟的影响。结果表明: (1)10, 20, 30μg/LEGF对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05)。(2) 10μg/L的IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P>0.05); 20, 30μg/L的IGF-1能显著提高山羊卵母细胞体外成熟率 (P<0.05)。(3)添加 10μg/LEGF+20μg/LIGF-1组卵母细胞体外成熟率显著高于添加 20μg/L的IGF-1组(P<0.05),极显著高于添加 10μg/LEGF组和对照组(P<0.01)。可见,EGF和IGF-1对山羊卵母细胞体外成熟有协同作用。 相似文献
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为了解不同月份生产的奶山羊泌乳期生殖激素与生长激素(GH)变化规律,随机抽取1、3、5和8月份分娩的奶山羊各10只,于分娩后0 d、7 d、1~8个月(每月的第15天)时采集母羊静脉血,分离血清,采用ELISA试剂盒检测母羊外周血中催乳素(PRL)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌激素(E2)、孕酮(P4)和GH水平变化。结果显示:不同月份产羔母羊泌乳期间外周血中同一激素的动态变化趋势一致;在整个泌乳期间,1、3、5、8月份产羔母羊PRL、FSH、LH、P4、E2、GH含量的动态变化范围分别为446.17~221.72 ng·L-1、9.49~3.82 U·L-1、351.17~218.16 pg·mL-1、4086.83~3568.15 pmol·L-1,33.74~22.30 ng·L-1、30.36~11.57μg·L-1;不同月份产羔母羊外周血中GH水平在相同泌乳期均无显著差异(P>0.05),FSH水平在0 d有显著差异(P<0.05),P4水平在8个月时有显著差异(P<0.05),PRL水平在泌乳的0 d和2、3、8个月时有显著差异(P<0.05),LH水平在泌乳的0 d、2个月时有显著差异(P<0.05),E2水平在泌乳0 d、3个月和8个月时有显著差异(P<0.05)。结果表明:奶山羊产羔月份的不同对泌乳期间的激素水平有一定的影响,但动态变化趋势一致。 相似文献
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在生产条件下,研究安哥拉山羊的超数排卵。用FSH进行超排,结果表明,用武汉生物化学制药厂和宁波激素制品厂生产的FSH,同一剂量处理,每只供体平均可用胚数分别为11.88±6.83和12.00±6.77枚(P>0.05);用宁波厂的910616和920509两个批号FSH处理时,平均可用胚数分别为4.14±4.22和5.88±3.52枚(P>0.05);用400、360和340IuFSH处理时,平均可用胚数分别为5.00±3.67、8.72±4.35和10.35±5.09枚;初产和经产羊平均可用胚数分别为5.20±4.09和5.27±3.60枚。用同一方法处理21～52kg体重的供体时,体重每增加1kg,平均可用胚增加0.17枚(Y=0.17x+3.890,P<0.05).结论认为,武汉厂和宁波厂生产的FSH及宁波厂不同批号的FSH超排效果相似,超排适宜剂量为340～360Iu,初产与经产安哥拉山羊超排效果相似,供体羊体重较大的超排效果也较好。 相似文献
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生产条件下，徒手二分割安哥拉山羊晚期桑椹胚和囊胚。用手术方法将裸半胚移植于受体羊子宫角。产羔受体率为２９．４％（１０／３４），共产羔１１只，其中１对为同卵双生，半胚成羔率为２０．Ｏ％（１１／５５）。早期囊胚、囊胚和扩张囊胚的半胚，移植后半胚成羔率分别为２８．６％（２／７）、３３．３％（７／２１）和９．５％（２／２１）。于受体羊黄体侧子宫角移植２枚半胚或两侧各移植１枚半胚时，半胚成羔率分别为３３．３％（８／２４）和１６．７％（３／１８）。 相似文献
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【目的】探讨山羊腺垂体细胞的分离和培养方法,为其体外分泌特性研究奠定基础。【方法】采集山羊腺垂体,分别用胰蛋白酶、胶原酶、胰蛋白酶和胶原酶混合、胰蛋白酶和透明质酸酶混合对其进行消化,所获细胞培养后采用免疫细胞化学法进行鉴定,评价细胞消化结果和腺垂体细胞的生长特性。【结果】山羊腺垂体组织在37℃条件下,以1 g/LⅣ型胶原酶和1 g/L透明质酸酶混合消化2.5～3 h,消化效果较好;所得细胞在培养24 h开始贴壁,72 h后细胞主要呈多角形或梭形,连接成片,培养6 d左右细胞即可铺满培养器皿的细胞生长面。免疫细胞化学鉴定结果显示,FSH阳性细胞胞质呈蓝色,PRL阳性细胞胞质呈蓝褐色;放射免疫分析法测定表明,分离、培养的腺垂体细胞具有激素分泌活性。【结论】采用筛选的消化和分离方法可获得山羊腺垂体细胞,所获腺垂体细胞体外培养体系,可用于体外研究腺垂体细胞的功能和内分泌调控作用。 相似文献
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山、绵羊重复超排和重复手术收集胚胎后生殖系统等易发生粘连,影响供体重复利用率和胚胎移植效率。本研究以波尔山羊作为供体,应用不同的防粘连方案进行供体重复超排采卵后预防粘连效果的比较,以筛选有效的预防粘连方法。采用32%右旋糖酐+肝素(试验组1)和医用几丁糖(试验组2)作为两个试验组,生理盐水冲洗法作为对照组。波尔山羊供体母羊连续超排4次,并重复手术采卵,用不同的防粘连剂进行术后处理比较。结果表明,试验组2使用几丁糖防粘连处理后,供体母羊第4次手术收集胚胎后粘连率只有37.5%,而试验组1和对照组粘连率为100%。使用防粘连剂对于供体母羊的超排效果及可用母羊的胚胎回收率无影响,但是显著提高了供体母羊的超排利用率。应用医用几丁糖防粘连的方法可以有效减少供体母羊的术后粘连率及有效提高供体母羊重复利用率。 相似文献
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用脂质体介导法将hTERT基因转染到山羊胎儿成纤维细胞中,以期获得永生化的山羊胎儿成纤维细胞系。对转染后的阳性细胞进行细胞学和分子学相关检测。结果显示,导入hTERT的阳性细胞形态正常,并已传至第58代;未转染组细胞经长期传代后（30代）,增殖缓慢,部分细胞表现衰老和凋亡的迹象。RT-PCR检测转染组细胞中有hTERT基因表达。生长曲线绘制结果显示转染组（30代和50代）山羊胎儿成纤维细胞生长速度稍快于未转染组（5代）细胞,但差异不显著（P〉0.05）。转染组细胞生长旺盛,细胞接种后第6天,基本覆盖培养孔。而未转染组（30代）细胞一直生长缓慢,差异显著（P〈0.05）。未转染组（30代）山羊胎儿成纤维细胞处于S期细胞和G1期细胞分别为28.9%和60.8%,而转染组（30代）分别为45.2%和45.0%。说明外源性hTERT基因可促进山羊胎儿成纤维细胞由G1期向S期转变,并提高细胞增殖能力。转染组（50代）山羊胎儿成纤维细胞染色体核型正常,未发生变化。未转染组（30代）细胞凋亡率和死亡率分别为39.7%和29.4%,而转染组（30代）分别为11.0%和12.7%,差异极显著（P〈0.01）。hTERT蛋白在转染组（30代）山羊胎儿成纤维细胞中表达,蛋白相对分子质量为127 000。说明外源性hTERT基因可以延长胎儿成纤维细胞在体外培养的寿命,降低细胞凋亡率。 相似文献
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小鼠卵巢颗粒细胞的体外培养 总被引：2，自引：0，他引：2
为了探讨小鼠卵巢颗粒细胞体外生长的特点及增殖的调控因素,分别添加2μg/mL胰岛素、50ng/mL FSH和20 ng/mL EGF的培养液培养小鼠卵巢颗粒细胞,每隔24 h对细胞进行计数,研究其对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。此外,还对培养过程中出现的卵巢颗粒细胞集落进行了AKP染色和C-kit免疫组化染色鉴定。结果显示,在培养的第4天添加EGF组和FSH组与对照组相比均具有显著的促增殖作用(P<0.05),添加胰岛素组促增殖作用不显著(P>0.05);卵巢颗粒细胞集落经AKP染色和C-kit免疫组化染色均呈阳性。提示EGF和FSH对小鼠卵巢颗粒细胞具有促增殖效应,小鼠卵巢颗粒细胞具有干细胞的部分特性。 相似文献
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间接ELISA法检测羊促乳素抗体方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】建立促乳素单克隆抗体制备中筛选阳性分泌细胞的间接ELISA检测方法。【方法】用促乳素纯品与Freund佐剂免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,初次免疫采用抗原与完全Freund佐剂,每2周免疫1次,从第2次开始采用抗原与不完全Freund佐剂,免疫4次后尾静脉采血,收集血清制备阳性对照抗体,以未免疫的BALB/c小鼠血清为阴性对照,筛选间接ELISA法检测促乳素抗体的最佳反应条件,并对单克隆抗体制备中的阳性细胞进行筛选。【结果】间接ELISA法的最佳反应条件:血清稀释倍数为1∶200,抗原包被质量浓度为100 ng/mL,封闭液为1%牛血清白蛋白,酶标抗体的工作浓度为1∶10 000,酶标抗体作用时间为37℃90 min,底物作用时间37℃30min。用该方法检测融合的杂交瘤细胞,最终获得OD450为0.875和0.460的阳性细胞株。【结论】建立了检测促乳素抗体的间接ELISA检测方法,该方法方便易行。 相似文献
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胚胎密闭培养是空间胚胎发育研究的基本条件,在胚胎密闭培养中,培养液适宜的氧含量对早期胚胎发育至关重要.本研究采用两种氧气比例不同的标准气和两个充气时长,对胚胎培养液进行标准气充气,研究标准气的氧气比例和培养液充气时间对密闭培养小鼠(Mus musculus)2-细胞胚胎体外发育的影响.胚胎密闭培养前,使用由5％O2,5％CO2,90％N2或7.5％O2,5％CO2,87.5％N2组成的高纯标准气对胚胎培养液分别充气120或150 min,以不充气密闭培养和常规微滴培养为对照组.在培养开始后24和48 h检测胚胎过氧化物;培养96和72 h时检测胚胎缺氧诱导因子-1 α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α);培养72和96 h时统计囊胚发育率和孵化率,并进行囊胚细胞计数.结果显示,利用氧气比例为7.5％的标准气对胚胎培养液充气120 min组和充气150 min组的胚胎在培养24 h时能够检测出过氧化物累积;5％O2标准气充气120min,5％O2标准气充气150 min和7.5％O2标准气充气120 min组胚胎,在培养96 h时可检测到HIF-1α阳性,而不充气密闭培养组在培养48 h时即可检测到HIF-1α阳性;5％O2标准气充气120或150 min,7.5％O2标准气充气120或150 min时,密闭培养胚胎均能获得较理想的囊胚发育率和孵化率.培养72 h时,5％O2标准气充气120 min组的囊胚发育率(92.63±0.89)％高于其他3个充气密闭培养组,但无统计学差异(P＞0.05),不充气密闭培养组囊胚发育率(57.04±10.04)％显著低于各充气密闭培养组(P＜0.05),微滴培养组囊胚发育率(98.67±1.33)％显著高于7.5％O2的标准气充气120 min组((87.15±2.35)％,P＜o.05).培养96 h时,各充气密闭培养组及微滴培养组囊胚发育率和囊胚孵化率无显著差异(P＞0.05),但均显著高于不充气密闭培养组(P＜0.05).各充气密闭培养组胚胎体外培养72h后,囊胚细胞数差异不显著(P＞0.05).培养96 h时,5％O2标准气充气120 min组密闭培养胚胎的囊胚细胞数(114.12±3.66)显著高于其他充气密闭培养组和不充气密闭培养组(P＜0.05),与微滴组(110.56±5.24)无统计学差异(P＞0.05).研究结果表明,使用由5％O2,5％ CO2和90％N2组成的标准气对胚胎培养液持续充气120～150min时,可较好地支持密闭培养小鼠2-细胞胚胎发育至囊胚阶段,并完成囊胚的孵化.本研究确定了小鼠2-细胞胚胎密闭培养适宜的标准气O2比例和充气时间,完善了胚胎密闭培养体系,为建立适宜于小鼠早期胚胎空间发育研究的密闭培养体系积累基础资料. 相似文献