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以重组克隆载体pGEM—T—hsbp1为模板,PCR扩增hsbp1,用限制性内切酶双酶切、T4连接酶连接、转化BL -21的方法构建pGEX-2TK-hsbp1原核表达载体,实现了hsbp1在BL21中的表达,SDS—PAGE检测表达的融合蛋白主要以可溶形式存在,并利用亲和层析得到融合蛋白。 相似文献
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利用PCR扩增CPV-2bVP2蛋白的主要抗原表位区基因,并将该基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,通过诱导表达条件的摸索,实现了VP2蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中的高效表达,sDs—PAGE检测表达的融合蛋白主要以可溶形式存在,并利用亲和层析得到融合蛋白。 相似文献
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【目的】建立可同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的多重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank数据库中PRV、PPV和PCV2的核苷酸序列,设计3对特异性引物和探针,以10倍系列稀释的阳性质粒为模板,优化反应条件,建立检测PRV、PPV和PCV2的多重Real-time PCR方法,并对其敏感性、重复性和特异性进行检验;分别采用单项和多重Real-time PCR方法,对临床收集的42份疑似病料进行检测,比较2种方法的符合率。【结果】特异性和灵敏度试验表明,建立的多重Real-time PCR检测方法具有高度特异性,与其他病原无明显交叉反应;检测灵敏度高,可检出1.0×101拷贝/μL的阳性质粒或1TCID50/mL的病毒样品。用多重Real-time PCR对42份临床疑似病料进行检测,其检测结果与单重Real-time PCR结果完全一致,表明多重Real-time PCR方法是可行的。【结论】建立了可同时检测PRV、PPV和PCV2的多重Real-time PCR方法,该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。 相似文献
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参考GenBank发表的传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组序列,设计并合成了1对特异扩增IBDVVP2基因高变区的引物。应用RT-PCR法,对分离于新乡地区典型发病鸡群的IBDV(XX株)进行了VP2基因高变区的克隆与序列分析,并和相关毒株进行了比较。结果表明,XX株与超强毒株UK661,OKYM高度相似,核苷酸同源性分别为98.73%,99.15%,氨基酸同源性都为100%,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。 相似文献
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应用 RT-PCR 技术从鸡法氏囊 B 细胞总 RNA 中克隆出 SIgM λ 轻链基因,并将其进一步克隆于 pET-28a 载体 T7 启动子的下游,构建了 pET-SIgM λ 原核表达载体。转化宿主菌 BL21(DE3),经 IPTG 诱导,成功表达了25.5 kDa 的鸡 SIgM λ 轻链蛋白。经 SDS-PAGE 和 Western-blotting 分析, 表达产物以包涵体形式存在,且能与 His-Taq 单抗特异性反应,为进一步研究 SIgM 的免疫学功能及其他生物学功能奠定基础。 相似文献
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谈多媒体技术在分子生物学教学中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
多媒体教学主要指利用计算机系统处理和控制声音、动画、文字、图像和录像等各种媒体,从而使教学达到直观、生动、灵活,以便学生更好地了解和掌握教学内容的目的。分子生物学是生物技术专业的一门重要课程,且分子生物学技术是本专业的一门关键 相似文献
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应用RT-PCR技术从鸡法氏囊B细胞总RNA中克隆出SIgMλ轻链基因,并将其进一步克隆于pET-28a载体T7启动子的下游,构建了pET-SIgMλ原核表达载体.转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导,成功表达了25.5kD的鸡SIgMλ轻链蛋白.经SDS-PAGE和Western blotting分析,表达产物以包涵体形式存在,且能与His-Taq单抗特异性反应,为进一步研究SIgM的免疫学功能及其他生物学功能奠定基础. 相似文献
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【目的】研究河南3个驴种（河南小毛驴、长垣驴、泌阳驴）的遗传多样性及其系统发育关系。【方法】采用PCR和测序技术,测定15头长垣驴、20头泌阳驴和14头河南小毛驴共49个个体的mtDNA D-loop区部分序列,采用DNAsp 4.90进行多态性分析,并利用MEGA4.1的邻接（NJ）法构建系统发育树。【结果】长垣驴、泌阳驴和河南小毛驴3个驴种共49个样本的PCR扩增产物长度均为444 bp,mtDNA D-loop区的核苷酸多样度分别为2.295%,2.163%和2.799%;单倍型多样度结果分别为0.879,0.629和0.956,表明3个驴品种mtDNA D-loop区均具有较高的多态性,其中河南小毛驴最高,长垣驴和泌阳驴次之;构建的NJ系统发育树表明,河南省3个驴种属于混合起源,泌阳驴与长垣驴亲缘关系较远,而与河南小毛驴的亲缘关系较近。【结论】河南省3个驴种具有较丰富的遗传多样性,河南省家驴属于混合母系起源。 相似文献
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畜牧业是一个承工启农的"中轴产业",既可促进种植业,又能带动加工业和服务业,形成农业内部产业和三次产业间的良性循环,促进农产品的转化增值.近年来,我国畜牧业呈现出加快发展势头,截至2009年,畜牧业产值已占农业总产值的34%,畜牧业发展快的地区,畜牧业收入已占到农民收入的40%以上,畜牧业已由传统的家庭副业发展成为农村经济的主导产业和农民增收的重要渠道,但动物传染性疾病诊断、食物添加剂、药物残留等方面存在的问题制约着畜牧业向更深层次发展.酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是免疫学诊断中的一项新技术,由于其具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点[1]. 相似文献
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基因操作技术是一门实践性很强的学科,是生物类专业的一门必修课.21世纪是生物经济时代,高等职业教育肩负着培养高素质应用型人才的重任.自2000年来,我校生物技术及应用专业开设了这门课程.其基础理论涉及面较广,但是从应用角度来说,它仍是一种方法和技术课程,其主要应用于医学及农业两大生命科学领域,而且目前主要用于疾病的诊断和基因工程药物或疫苗的制备等方面. 相似文献