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为鉴定牛支原体(M.bovis)菌体免疫相关蛋白及其免疫原性,本实验以M.bovis湖北株为样品,通过建立M.bovis全菌蛋白的双向电泳体系,获得了分辨率及重复性良好的双向电泳(2-DE)图谱。利用western blot技术进行筛选,鉴定得到多个M.bovis蛋白,其中一个分子量为68 ku,经过质谱分析和氨基酸一级结构比对确定该蛋白为硫锌酰胺脱氢酶(LipDH)。经原核重组表达,LipDH重组蛋白与M.bovis阳性血清的western blot反应为阴性,而Dot blot及以重组表达蛋白作为包被抗原的ELISA鉴定结果均为阳性。本研究为进一步研究LipDH的功能以及采用其重组蛋白用于该蛋白缺失的M.bovis疫苗株的鉴别检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
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奶牛养殖业疫病防制对策 总被引：1，自引：0，他引：1
1 疫病预防对奶牛养殖业健康发展的重要性新中国成立以来 ,特别是改革开放以来 ,中国动物疫病综合防制工作得到长足的发展。但是 ,应当清醒地认识到 ,随着奶牛饲养规模的不断扩大 ,在疫病防制方面尤其是传染病的防制方面的问题越来越严峻。全国每年因传染病造成牛死亡率达 3%～ 5 %,直接经济损失达 90～ 15 0亿元。牛隐性乳房炎发病率为 30 %～ 80 %,患病牛产奶量下降 2 0 %～ 30 %;奶的质量、等级和营养价值也不同程度地下降 ,且病原微生物及毒素在奶中的存留 ,会危害人体健康 ;因乳腺发炎、病变导致奶牛过早淘汰 ,将造成巨大的经济损失。… 相似文献
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近年来，奶业的高速发展使其成为一个极具发展潜力的朝阳产业，已经成为农业产业结构调整的重大战略措施之一。面对奶业高速发展所表现出的各种问题和矛盾，应科学规划，做好奶源基地建设，实现规模化养殖，推进品种改良，加强重大疫病防控；科学引导消费，培育潜在市场，积极做好国家学生奶饮用计划的实施；应用先进的生产技术，如TMR、SCC和DHI检测技术提高生产效益；加快科技进步，提高奶业发展水平，实现我国奶业的协调、健康、可持续发展。 相似文献
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猪肺炎支原体P102基因C末端序列的克隆及原核表达 总被引：3，自引：0，他引：3
应用DNA重组技术，将猪肺炎支原体P102的C末端基因克隆到pET-28a表达载体上，并构建了重组表达载体；将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21，用终浓度为1．0mmol／L的IPTG诱导5h，然后用Bug BusterTM Ni—NTAHis·Bind纯化试剂盒在自然条件下对目的蛋白进行纯化。ELASE检测结果表明：该蛋白具有良好的生物学活性。利用纯化蛋白制备高免血清为检测P102蛋白在真核系统中的表达奠定基础。 相似文献
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猪气喘病是由猪肺炎支原体引起的一种传染病。临床特征以咳嗽、气喘、呼吸困难为主，死亡率虽然低，但感染率很高，感染猪发育迟缓，生产速度减慢，加上药费的增加，给猪场造成严重的经济损失，所以净化该病就成了养猪企业一直关心的问题。本期主题将重点向读者介绍一下猪气喘病的净化措施。[编者按] 相似文献
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牛传染性胸膜肺炎（Contagious bovine pleuroopneumonia CBPP）又名“牛肺疫”是由丝状支原体丝状亚种SC生物型（Mycoplas mamycoides subsp．Mycoides SC MmmSC）引起的一种亚急性或慢性、接触性传染病，其特征为纤维素性肺炎和浆液性纤维素性胸膜炎，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病。该病在20世纪20年代传入我国，流行历史较久，分布甚广，危害严重。 相似文献
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猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,MHP）是猪气喘病的病原。DnaK又称为热休克蛋白Hsp70,具有分子伴侣和免疫的作用。以MHP中国分离株Yin-1为模板,扩增了DnaK基因的全序列,将该序列克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果Yin-1株DnaK基因即Hsp70基因全长1803bp,编码600aa,第631～633位TGA在支原体编码色氨酸而不是作为终止密码子。将该序列与多种致病支原体DnaK基因进行分析比较,发现Yin-1株与232株、J株、7448株等MHP菌株的DNA同源性为99.3％～99．4％,氨基酸同源性为99．2％～99.3％,而与非同种支原体的DNA和氨基酸同源性仅为64．5％～74．4％和59.3％～77％。这表明DnaK基因在种内高度保守,种间差异较大。以pET28a为载体构建重组质粒,原核表达DnaKC末端大小为1kb左右的基因,对表达的蛋白进行纯化后,通过Westernblot检测它的免疫活性。原核表达得到大小为41ku的目的蛋白．经Westernblot证实．纯化蛋白可与MHP阳性猪血清反应,具有免疫活性。 相似文献
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构建猪肺炎支原体P97蛋白的酵母随机展示文库,并利用该文库筛选和鉴定P97蛋白上的特异性B细胞表位。设计特异性引物从Mhp基因组中扩增p97基因,通过PCR方法将基因内部的TGA密码子突变为TGG,用DNaseⅠ将p97突变基因随机消化成长度100~250bp的片段,回收产物经3′端加A处理后与用XcmⅠ酶切的酵母表达载体pCT-XcmⅠ连接,将连接产物转化酿酒酵母EBY100获得P97蛋白酵母随机展示文库。利用流式细胞分选技术筛选出文库中能与Mhp天然感染的猪阳性血清结合的阳性酵母克隆,并进一步鉴定其最小抗原表位。结果:1)克隆计数显示构建的随机文库库容量为2.86×106克隆,所有插入的片段随机分布,覆盖了全长的p97突变基因,文库经诱导后可以利用流式细胞仪检测到与Mhp天然感染的猪阳性血清反应的阳性克隆;2)随后对文库进行流式细胞分选,经鉴定选出184号一个抗原多肽。从短肽C端氨基酸逐个缺失后发现长度为15个氨基酸的184D(DEKTSSQKDPSTLRA)多肽为一个B细胞表位,该表位能与多份Mhp阳性猪血清反应。P97蛋白酵母随机展示文库可以用于抗原表位的筛选鉴定,184D多肽是P97上一个在宿主体内能普遍诱导抗体免疫应答的B细胞表位,本研究对于研发Mhp的表位疫苗和建立特异性诊断方法具有重要意义。 相似文献