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本研究克隆了广西沼泽型水牛γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因,并构建了水牛IFN-γ原核表达质粒。从健康沼泽型水牛静脉无菌采血,分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用刀豆素A(Concanavalin A,ConA)诱导培养13 h后,提取细胞总RNA,用水牛IFN-γ基因特异性引物通过RT-PCR扩增水牛IFN-γ成熟肽编码区cDNA序列,将其克隆到pMD18-T载体中。RT-PCR产物电泳可见约457 bp大小目的片段。经过限制性酶切分析,测序证实克隆得到的基因序列正确。将IFN-γ成熟肽编码区基因片段切下亚克隆到表达载体pET-32a 中,构建成重组表达质粒pET-mIFN-γ。PCR、双酶切电泳和序列测定结果均证实已插入约457 bp的IFN-γ基因片段。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,水牛IFN-γ基因在大肠杆菌中获得了高效的表达,融合蛋白的分子量为35 ku,表达量占菌体总蛋白的43.6%。 相似文献
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应用LD-PCR法构建大片吸虫成虫cDNA表达文库 总被引：3，自引：1，他引：2
为构建大片吸虫成虫cDNA表达文库,用Trizol试剂提取大片吸虫成虫总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用LD-PCR扩增方法,合成双链cDNA。用SfiⅠ内切酶修饰此双链cDNA,使形成两端分别带有SfiⅠA和SfiⅠB的黏性末端。经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集400 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有SfiⅠA和SfiⅠB末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA表达文库。经测定,库容量为1.08×106PFU/mL,重组率为96.6%。扩增后的文库滴度为2.41×109PFU/mL,插入片段平均大小约为1 000 bp。这些结果表明已成功构建大片吸虫成虫cDNA表达文库,适合进一步筛选大片吸虫新基因。 相似文献
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口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的在偶蹄动物间传播的烈性传染病,大多数发展中国家采取免疫接种来控制该病或建立无疫区,如何区分自然感染动物和免疫动物一直是控制和消灭该病的重要问题。大量的比较研究一致认为,以FMDV非结构蛋白(non-structural protein,NSP)为抗原,检测动物体内的NSP抗体是一种很好的区分感染动物和疫苗免疫动物的诊断方法。但因疫苗中残留的NSP或非特异性应激因素亦可引起假阳性反应,许多国家特别是泛美地区普遍联合采用3-ABC-ELISA或酶联免疫电转印试验(Enzyme-Linked Immunoelectrotransfer Blot Test,EITB),并得到了OIE的认可,已成功应用于南美国家口蹄疫扑灭计划。 相似文献
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2008年在世界各国发生了规模不等、强度不一的多起马病疫情,如马接触传染性子宫炎(美国)、马流感(印度、埃及、日本、澳大利亚、中国、蒙古)、马鼻疽(巴西)、马梨形虫病(美国)、马传染性贫血(法国、德国)、西尼罗病毒病(意大利、奥地利、法国、阿拉伯联合酋长国)、马病毒性动脉炎(以色列、克罗地亚)、非洲马瘟(埃塞俄比亚)、马鼻肺炎(以色列)。一些国家首次出现马病疫情,如马病毒性动脉炎(以色列、克罗地亚)、西尼罗病毒病(奥地利、阿拉伯联合酋长国)、马流感(澳大利亚)。马流感在亚洲国家广泛流行,西尼罗病毒病在欧洲国家时有发生,应引起我国兽医部门和出入境检验检疫部门的高度重视,严防疫情疫病传入传出,特别是防止新出现的人兽共患病(西尼罗病毒病)传入国境,保护我国畜牧业的健康发展。 相似文献
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施马伦贝格病毒病(Schmallenberg virus,SBV)是一种新发现的动物传染病,因于2011年底在德国施马伦贝格镇首次发现而临时得名,随后蔓延于西欧(包括比利时、法国、德国、荷兰、意大利、卢森堡、西班牙、英国和丹麦),并分别在奥地利、波兰、瑞典和芬兰等国的牛、山羊、绵羊中检测到抗体。遗传分析显示该病毒与布尼亚病毒科(Bunyaviridae)正布尼亚病毒属(Orthobunyavirus)西姆布血清群病毒(Simbu serogroup viruses)的亲缘关系最密切,西姆布血清群病毒是已知的反刍动物病原,可通过节肢动物媒介(蚊、蠓)传播。施马伦贝格病毒病有2种不同的临床症状:成年牛出现短暂轻微/温和的病症(产奶量减少、发热、腹泻)和新生哺乳动物(牛、羊)死产和先天缺陷。因为同群类似的病毒不是人畜共患病病原,也无该病毒致人发病的证据,但现阶段尚不能完全排除。尽管目前没有特效的药物和疫苗,但因已有类似病毒(赤羽病)的疫苗,疫苗接种应是控制该病的可能选项。因施马伦贝格病毒是一种新发现的病毒,许多方面尚不清楚,还有待于进一步研究。 相似文献
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实时定量PCR快速检测对虾白斑综合症病毒 总被引：5，自引：0，他引：5
根据对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物和Taqman探针,建立了WSSV的实时定量PCR检测体系.构建含有WSSV目的扩增片段的质粒为标准品,进行定量PCR扩增,结果表明标准品浓度在1.5×107～1.5×101个拷贝之间有"S"型扩增曲线,检测限为15个拷贝.标准曲线中模板浓度(X)与Ct值的关系为:Ct=-3.77 lgX+43.73,相关系数R2=0.9967.该检测方法特异性强,对传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、斑节对虾杆状病毒(MBV)、肝胰腺细小病毒(HPV)以及对虾基因组DNA没有扩增反应.运用该方法对100尾对虾样品进行检测,14个对虾样品为阳性.而运用巢式PCR检测只有4个对虾样品为阳性.实时定量PCR方法检测WSSV,快速、特异、灵敏,在虾病的临床检测上具有重要意义. 相似文献
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