外来口蹄疫流行毒株跟踪分析与防控     

何继军  靳野  马维民  杨亚民  吕律  郑海学  杨帆  曹伟军  郭建宏  李彦敏  刘在新  刘湘涛 《中国动物检疫》2018,35(11):52-55

2008年以来,外来口蹄疫流行毒株不断侵入,给我国造成巨大危害。分子流行病学研究表明,我国现有的主要流行毒株,如A/Sea-97、O/Mya-98、O/PanAsia和O/Ind-2001等,均系外来毒株。结合全球口蹄疫流行形势和毒株遗传衍化关系推测,这些毒株由东南亚地区传入我国的可能性最大。此外,常年流行于中亚、西亚等国家的O/PanAsia-2、A/Iran-05和Asia1/Sindh-08等毒株,以及在印度等南亚地区流行的A/G VII和Asia1/G VIII等毒株传入我国的风险依旧存在。为及时判定外来口蹄疫威胁,做好诊断、免疫等阻断技术储备,本文就外来口蹄疫毒株流行情况和国家口蹄疫参考实验室有关技术储备工作进行总结,以期为我国外来口蹄疫防控提供参考。  相似文献   

关于当前我国肉羊产业疫病防控现状的调研     

张克山  尚佑军  丛国正  郭建宏  郑海学  靳野  刘湘涛 《黑龙江畜牧兽医》2010,(2):20-21

<正>随着我国草原禁牧政策的实施力度加大,我国肉羊养殖方式发生很大的改变,由过去的单纯放牧转变为现在的舍饲、围栏放牧、轮牧。肉羊饲养方式改变后疫病防控形势如何,存在哪些问题,今后如何解决?笔者带着这些问题对甘肃、宁夏、云南、山西等地区的养殖场(户)进行了走访调查,现将有关的调查结果报道如下。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒兰州分离株ORF3基因的克隆及杆状病毒载体的构建     

赵娜  田宏  祁燕蓉  满自萍  吴锦艳  尚佑军  何生虎  刘湘涛 《西北农业学报》2009,18(3):1-5

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBacHTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBacHTA-ORF3,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBacHTA-ORF3转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF3.成功构建了PRRSV Lanzhou株ORF3基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础.  相似文献   

口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建   总被引：4，自引：4，他引：4  

龚真莉  刘湘涛  刘磊  尚佑军  尹双辉  田宏  郑海学  陈国栋 《甘肃农业大学学报》2006,41(1):8-11

通过RT-PCR方法获得了口蹄疫病毒O型,编号为OF3毒的P1+2A区的目的基因,并将其克隆到克隆载体pMD18-T上,再根据表达载体pQE-Trisystem的特性及酶切位点设计合适的表达引物.由表达引物通过PCR技术从克隆载体上扩增出带有特定酶切位点的目的片段,再对载体和目的片段进行酶切处理,处理后由T4 DNA连接酶将二者连接.通过PCR及酶切鉴定,结果证明口蹄疫病毒目的基因片段已被正确克隆到表达载体pQE-Trisystem上.  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合症GP5蛋白的纯化与免疫活性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

陈妍  田宏  尹双辉  尚佑军  刘湘涛 《安徽农业科学》2009,37(21):9982-9983

[目的]对猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）的GPS蛋白进行纯化与免疫活性分析,为建立相应的血清学诊断方法奠定基础。[方法]用构建好的重组表达质粒pGEX-6P-5转化B121后经IPTG诱导表达。对表达产物进行可溶性分析,再将重组目的蛋白纯化后进行SDS—PAGE鉴定和Western—blot分析,最后用重组抗原进行豚鼠免疫试验。[结果]经层析扫描分析目的蛋白含量占菌体蛋白总量30％左右,纯化后目的蛋白纯度可迭80％。经Western—blot及豚鼠免疫试验对纯化蛋白进行分析后证明,表达的蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。[结论]该研究为深入研究PRRSVORFs基因及其编码蛋白功能提供了材料,同时也为生产猪繁殖与呼吸综合症病毒基因工程产品奠定了良好基础。  相似文献   

羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析     

张克山  何继军  尚佑军  郑海学  靳野  刘永杰  刘湘涛 《中国草食动物》2010,(Z1)

羊传染性脓疱严重威胁肉羊产业的健康发展和人民群众的身体健康.选取湖北某羊场疑似传染性脓疱病料,经电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定鉴定为羊传染性脓疱病毒.序列遗传进化分析表明研究鉴定的传染性脓疱病毒与2007年分离于中国台湾毒株(DQ904351)同源性达100%,与印度2004到2005年分离于绵羊(DQ263306、DQ263305)、山羊(DQ263304、DQ263303)的传染性脓疱病毒同属于1个进化分支.提交并公布于GenBank的B2L基因序列为分子流行病学研究积累了资料.  相似文献   

一起猪繁殖障碍与呼吸综合征和猪瘟混合感染的诊治     

吴锦艳  田宏  吴慧珍  尚佑军  刘湘涛 《甘肃畜牧兽医》2010,40(1):29-29

甘肃某县某猪场2008年3月初从江苏引进一批育肥猪（从几个不同猪场），从第3天开始约100头猪出现精神沉郁、发烧等症状，10d内死亡率高达40％左右。经临床诊断和实验室检测确诊为猪繁殖障碍与呼吸道综合征和猪瘟混合感染。现就此次疫情发生情况介绍如下。  相似文献   

绵羊呼吸道病原菌分离及药敏试验     

张克山  刘永杰  孔汉金  尚佑军  逯忠新  刘湘涛 《中国兽医杂志》2013,49(9)

近年来迫于环境和资源的双重压力,我国肉羊饲养由牧区向农区和南方草山草坡地区扩展转移已成必然之势.由于饲养环境和养殖方式的改变,羊病发生的风险将会大增,呼吸系统疾病上升并已成为制约肉羊规模化饲养进程的主要因素之一[1].随着抗菌药物在集约化羊场的广泛使用,不可避免地导致细菌对药物产生耐药性,这一现实无疑增加了羊场疫病防控的难度.为了解和掌握规模化羊场呼吸道细菌感染情况以及耐药程度,为指导临床用药提供依据,本试验对甘肃某规模化羊场发生的呼吸系统疾病进行了细菌分离培养、药敏试验和临床效果观察.  相似文献   

慢病毒介导多短发卡RNA串联载体构建与体内外抗口蹄疫效果评估     

张晓溪  李兰玉  刘庆友  郑海学  李湘萍  崔奎青  石德顺 《华南农业大学学报》2014,35(4):1-6

【目的】探讨应用多短发卡RNA(shRNA)串联沉默口蹄疫病毒RNA复制的可行性.【方法】针对口蹄疫病毒(Foot and mouth disease,FMDV)非结构蛋白基因3B和3D保守区域设计合成3个shRNA的串联片段,并分别用3个不同序列的启动子引导,成功构建了3shRNA串联的慢病毒RNAi载体.利用慢病毒3质粒包装系统共转于293T细胞包装成慢病毒颗粒.利用包装的慢病毒处理细胞及乳鼠,并接种FMDV,观察FMDV抑制情况.【结果和结论】结果显示,慢病毒处理BHK-21获得的转基因细胞中检测shRNA表达;通过O型FMDV接种发现转基因细胞对口蹄疫病毒的复制有明显的抑制,其中在接种后24 h病毒拷贝量仅为普通细胞的1/3;O型FMDV毒株接种于抗口蹄疫慢病毒载体预处理过的3~5日龄乳鼠,在5 LD50滴度下全部乳鼠均存活,在20 LD50滴度下存活率也提高50%.构建的慢病毒介导多shRNA串联表达抗口蹄疫载体能提高BHK-21细胞和乳鼠对口蹄疫病毒的抵抗力,有效地避免了5 LD50滴度内乳鼠的死亡现象,具有抵抗口蹄疫病毒毒性的良好性能.  相似文献   

猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定     

常艳燕  郑海学  靳野  王光祥  尚佑军  刘湘涛 《畜牧兽医学报》2009,40(2)

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmB Ⅰ/Xma Ⅰ、Xma Ⅰ/BamH Ⅰ、BamH Ⅰ/Not Ⅰ、Hpa Ⅰ/Kpn Ⅰ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠ cDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pP1-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定.结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾.其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段.将pPⅠ FMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应.利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒.  相似文献