蛋白质组学样品处理方法研究进展     

卢国栋  张克山  刘永杰  尚佑军  郭建宏  郑海学  田宏  刘湘涛 《中国动物检疫》2011,28(6):78-81

蛋白质组学研究已经成为后基因组时代的研究热点,是生命科学研究领域又一个新的突破口。以双向凝胶电泳为主的蛋白质分离技术以及基于生物质谱的蛋白质鉴定技术是目前该领域主要研究技术手段。在双向凝胶电泳蛋白分离和蛋白质谱鉴定中,样品处理影响甚至决定着蛋白分离效果和鉴定结果。因此有效的样品处理技术是获得真实、可靠实验数据的关键,在比较蛋白质组学研究中样品处理尤为重要。本文针对双向电泳前的蛋白质样品处理及质谱鉴定前的样品处理技术的研究进展作以综述。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒N蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用   总被引：1，自引：1，他引：0  

万颖  周改静  麻园  石正旺  肖书奇  罗俊聪  宋锐  曹丽艳  杨波  王丽娟  田宏  郑海学 《畜牧兽医学报》2022,53(4):1173-1181

旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法.本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验.对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测...  相似文献   

病毒载体研究进展     

田宏  刘湘涛  张彦明  林彤  吴锦艳  郑海学  龚真莉  谢庆阁 《动物医学进展》2005,26(9):4-7

外源基因进入细胞通常需要“运载工具”。在漫长的自然进化过程中,病毒是以寄生形式存活下来的最小、最简单的生命体,病毒分子生物学的发展为生物工程领域研究拓展了思路,提供了有效的方法和工具。重组病毒栽体又是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达栽体主要有取代型的重组病毒栽体和重组的病毒一质粒栽体。文章对应用较广泛的病毒栽体做一综述。  相似文献   

关于当前我国肉羊产业疫病防控现状的调研     

张克山  尚佑军  丛国正  郭建宏  郑海学  靳野  刘湘涛 《黑龙江畜牧兽医》2010,(2):20-21

<正>随着我国草原禁牧政策的实施力度加大,我国肉羊养殖方式发生很大的改变,由过去的单纯放牧转变为现在的舍饲、围栏放牧、轮牧。肉羊饲养方式改变后疫病防控形势如何,存在哪些问题,今后如何解决?笔者带着这些问题对甘肃、宁夏、云南、山西等地区的养殖场(户)进行了走访调查,现将有关的调查结果报道如下。  相似文献   

羊传染性脓疱病毒湖北株的鉴定及分子特征分析     

张克山  何继军  尚佑军  郑海学  靳野  刘永杰  刘湘涛 《中国草食动物》2010,(Z1)

羊传染性脓疱严重威胁肉羊产业的健康发展和人民群众的身体健康.选取湖北某羊场疑似传染性脓疱病料,经电镜观察、病理切片染色、特异性目的基因扩增和序列测定鉴定为羊传染性脓疱病毒.序列遗传进化分析表明研究鉴定的传染性脓疱病毒与2007年分离于中国台湾毒株(DQ904351)同源性达100%,与印度2004到2005年分离于绵羊(DQ263306、DQ263305)、山羊(DQ263304、DQ263303)的传染性脓疱病毒同属于1个进化分支.提交并公布于GenBank的B2L基因序列为分子流行病学研究积累了资料.  相似文献   

仔猪口蹄疫母源抗体衰减规律研究     

卢炳州  刘华南  赵俊皓  王国庆  郑海学  刘湘涛  郭建宏  何继军  张克山 《畜牧与兽医》2019,(6):100-103

为了明确仔猪体内A型口蹄疫母源抗体衰减规律,为仔猪口蹄疫疫苗首免时间的确定提供理论依据,选取预产期相同、口蹄疫抗体水平(A型)有差异的5头母猪,每头母猪随机选取5头仔猪并分16个时间点采集外周血,利用液相阻断ELISA对仔猪体内A型口蹄疫抗体进行检测,评估其消减规律。结果显示:脐带血不传播母源抗体,仔猪获得母源抗体保护的唯一途径是吃母乳;仔猪采食初乳后体内A型口蹄疫母源抗体可在吃初乳后当天达到峰值,而后随时间增加而降低;当母猪分娩时抗体水平为1∶1024时,仔猪63日龄左右体内抗体水平降低至1∶45;当母猪分娩时抗体水平为1∶720时,仔猪56日龄左右体内抗体水平降低至1∶45;当母猪分娩时抗体水平为1∶360时,仔猪28日龄左右体内抗体水平降低至1∶45。仔猪体内A型口蹄疫抗体衰减时间和分娩时母猪抗体水平呈正相关性。本文研究结果为制定科学合理的仔猪口蹄疫疫苗免疫程序提供数据支撑。  相似文献   

慢病毒介导多短发卡RNA串联载体构建与体内外抗口蹄疫效果评估     

张晓溪  李兰玉  刘庆友  郑海学  李湘萍  崔奎青  石德顺 《华南农业大学学报》2014,35(4):1-6

【目的】探讨应用多短发卡RNA(shRNA)串联沉默口蹄疫病毒RNA复制的可行性.【方法】针对口蹄疫病毒(Foot and mouth disease,FMDV)非结构蛋白基因3B和3D保守区域设计合成3个shRNA的串联片段,并分别用3个不同序列的启动子引导,成功构建了3shRNA串联的慢病毒RNAi载体.利用慢病毒3质粒包装系统共转于293T细胞包装成慢病毒颗粒.利用包装的慢病毒处理细胞及乳鼠,并接种FMDV,观察FMDV抑制情况.【结果和结论】结果显示,慢病毒处理BHK-21获得的转基因细胞中检测shRNA表达;通过O型FMDV接种发现转基因细胞对口蹄疫病毒的复制有明显的抑制,其中在接种后24 h病毒拷贝量仅为普通细胞的1/3;O型FMDV毒株接种于抗口蹄疫慢病毒载体预处理过的3~5日龄乳鼠,在5 LD50滴度下全部乳鼠均存活,在20 LD50滴度下存活率也提高50%.构建的慢病毒介导多shRNA串联表达抗口蹄疫载体能提高BHK-21细胞和乳鼠对口蹄疫病毒的抵抗力,有效地避免了5 LD50滴度内乳鼠的死亡现象,具有抵抗口蹄疫病毒毒性的良好性能.  相似文献   

猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定     

常艳燕  郑海学  靳野  王光祥  尚佑军  刘湘涛 《畜牧兽医学报》2009,40(2)

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmB Ⅰ/Xma Ⅰ、Xma Ⅰ/BamH Ⅰ、BamH Ⅰ/Not Ⅰ、Hpa Ⅰ/Kpn Ⅰ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠ cDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pP1-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定.结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾.其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段.将pPⅠ FMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应.利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒.  相似文献   

抗非洲猪瘟病毒单链抗体的构建、表达及活性鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

王丽娟  石正旺  杨波  麻园  罗俊聪  万颖  宋锐  田宏  郑海学 《畜牧兽医学报》2021,52(5):1328-1336

制备抗非洲猪瘟病毒（ASFV）猪源单链抗体（ScFv）,并对其生物学活性进行鉴定,筛选出具有ASFV反应活性的猪源单链抗体（ScFv）,为ASFV的诊断提供新的材料。采集ASFV感染康复猪的外周血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,以此为模板通过PCR扩增得到猪源IgG重链可变区与轻链可变区基因,利用SOE-PCR技术扩增拼接得到猪源ScFv基因;构建pET-30a-ScFv表达载体,进行蛋白的表达与纯化,用ELISA和IFA鉴定ScFv抗体的反应活性。结果显示,成功扩增出猪源ScFv（VH-VLκ、VH-VLλ）基因,鉴定到1株与ASFV存在反应活性的ScFv（VH-VLλ₁₁）抗体。结果表明,成功筛选到1株与ASFV存在反应活性的ScFv（VH-VLλ₁₁）抗体,为ASFV诊断和防控提供了新型原材料。  相似文献   

逆转录病毒载体介导的T7RNA聚合酶在猪源细胞PK15及SK6中的稳定表达     

吴锦艳  田宏  郑海学  陈妍  靳野  尚佑军  刘湘涛 《畜牧兽医学报》2011,42(4)

本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7。将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获重组病毒并用该病毒在Polybrene的介导下分别感染PK15和SK6细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。对此阳性细胞进行传代,并对不同代次细胞中的T7RNA聚合酶基因进行扩增,确定其遗传稳定性。用直接荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞中T7RNA聚合酶基因的表达及其活性。结果表明T7RNA聚合酶能够被稳定地整合进靶细胞基因组内,细胞系内的T7RNA聚合酶具有较好的转录活性,其活性传代不减弱。免疫荧光检测发现所表达的T7RNAP蛋白具有良好的反应原性。本研究表明T7RNA聚合酶基因稳定整合进猪源细胞,该基因的稳定整合为建立高效体内病毒拯救系统提供了良好的工具。  相似文献