应用双重实时荧光定量PCR方法检测鸡马立克氏病血清1型病毒   总被引：1，自引：3，他引：1  

张颖  刘长军  秦运安  张艳萍  张晓巍  郝永清 《中国预防兽医学报》2007,29(1):46-51

本研究建立了鸡马立克氏病血清1型病毒（MDV1）绝对定量检测方法。研究中选择MDV1特有的Meq基因的一段保守序列作为检测对象，将其克隆到质粒载体中，作为阳性标准品；同时将管家基因．鸡卵铁转蛋白（Ovo）特异性基因片段克隆到质粒载体上作为内参照的标准品。经荧光定量PCR（FQ-PCR）法扩增获得MDV1的FQ-PCR两条标准曲线，建立了MDV1双重FQ-PCR检测方法。应用该方法绝对定量检测了实验攻毒鸡及吉林省某地发病鸡只的羽髓、淋巴细胞等组织样本中单位细胞病毒拷贝数，并与琼脂扩散（AGP）、常规PCR等检测方法进行比较。结果表明，不论实验攻毒鸡还是自然发病鸡，羽髓中病毒富含量均高于其它组织，每百万宿主细胞内病毒含量为10^7～10^8拷贝；FQ-PCR检测MD发病鸡只的阳性率高于AGP，达100％；该方法的灵敏度比常规PCR检测高10～100倍，在单位细胞内可灵敏地检测到2．78个拷贝的病毒。该方法可以在不同的样品中有效的绝对定量检测MDVl。  相似文献   

水泡性口炎病毒印第安纳株反基因操作系统的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

温志远  葛金英  王永  胡森  郝永清  步志高 《中国预防兽医学报》2006,28(5):489-494

负链RNA病毒作为活病毒载体具有巨大的优势。本研究构建了水泡性口炎病毒印第安纳株（VSV-Ind）基因组全长cDNA克隆，建立了反向遗传操作系统并成功救获病毒。通过免疫荧光、电镜观察、RT-PCR及生长动力学研究，证实救获病毒保持典型的VSV印第安纳株特点，救获VSV的基因组内G蛋白前、后非编码区分别引入两个用于进一步构建重组病毒时外源基因插入的两个限制酶位点。本研究为新型重组活病毒疫苗载体和肿瘤治疗载体的研制及基础病毒学相关研究提供了重要的技术平台。  相似文献   

内蒙古自治区部分地区鸡胚和雏鸡致病性大肠埃希氏菌的药物敏感试验     

郝永清 《内蒙古农牧学院学报》1989,10(1):37-41

  相似文献   

瘤胃内分解纤维素细菌的分离与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

程超  郝永清  张林冲 《饲料工业》2008,29(19)

<正>纤维素是自然界中最丰富的可再生自然资源,它的降解是自然界碳素循环的中心环节。我国的纤维素资源极为丰富,每年农作物秸杆的产量达到5.7×108t,约相当于我国北方草原年打草量的50倍。目前这部  相似文献   

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌FnbpB-D基因的表达及其抗血清活性     

史冬艳  郝永清  张爱荣 《中国预防兽医学报》2010,32(5)

纤维素结合蛋白B(FnbpB)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)最主要的黏附因子之一,它能够介导S.aureus结合于细胞表面的纤维连结素(Fn)和纤维蛋白原(Fg)。FnbpB基因中D区为主要活性部位。本实验利用pET-32a表达载体表达了S.aureus FnbpB-D重组蛋白(34.7ku),并通过动物实验对重组FnbpB-D蛋白的抗血清活性进行了初步研究。采用ELISA对抗血清进行抗粘附性检测,结果显示实验组与对照组差异极显著(p0.01),抗血清具有较强的抑制S.aureus黏附纤维连结素的作用。此外,调理吞噬实验结果显示,免疫兔全血对S.aureus有较强的调理作用。这些实验结果将为制备奶牛乳房炎S.aureus黏附素疫苗的研制提供参考。  相似文献   

牛结核病检疫方法研究进展   总被引：3，自引：2，他引：1  

刘金晔  郝永清 《中国畜牧兽医》2011,38(5):146-151

牛结核病主要是由牛分枝杆菌引起的一种慢性消耗性疾病,在许多国家尤其是发展中国家仍然广泛流行,该病不仅给畜牧业造成巨大的经济损失,而且严重威胁着人类的健康。因此,牛结核病的检疫意义重大。细菌学检测、免疫学检测及分子生物学诊断为牛结核病检疫的研究奠定了基础。然而,目前迫切需要研究快速、灵敏、特异的牛结核病诊断方法。牛结核病血清学诊断技术研究一直是研究热点之一,但至今仍存在许多问题。作者就这些诊断检疫方法进展作一简要介绍。  相似文献   

图书馆编目业务外包的实践与思考     

王秀青 《农业图书情报学刊》2014,(2):185-188

随着图书馆运作方式的不断优化,图书编目业务外包的方法为国内外众多图书馆所引进,其日益盛行也直接促进了图书馆服务质量的提升。介绍了图书馆编目业务外包的概念与由来,对其存在的优势与劣势进行了探讨,深入分析现状与其尚存的问题,并针对国内应用的瓶颈提出切实可行的对策。  相似文献   

牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定     

武春霞  周雅坪  郭婷  崔琦  王宇琛  田广原  思汗  孙衍立  郝永清 《中国畜牧兽医》2021,48(9):3438-3446

本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒（BRSV） G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列，分析其抗原区域，利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物，利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段，将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后，对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收，构建重组质粒pET-32a-G，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTG诱导表达的蛋白，并测定其浓度；通过SDS-PAGE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示，本试验成功克隆出大小约为567 bp的G基因，获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白，优化诱导条件后用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定，在16℃、IPTG浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大；通过Western blotting检测发现，重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应，说明该蛋白具有反应原性。综上，本研究成功表达并纯化了BRSV G蛋白，为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

CecA-Mag及其突变体在Pichia pastoris中的表达及抗菌活性试验     

王秀青  朱明星  张爱君  杨风琴  哈丽娜 《动物医学进展》2011,32(2):56-60

参考相关天蚕素类抗菌肽的作用机制及抗菌肽结构与功能关系的假说,设计了杂合肽CecA-mag的3个突变体并利用重组聚合酶链式反应定点诱变技术,使突变体得以合成,利用琼脂孔扩散法检测CecA-mag和其突变体对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等临床分离菌株的抑菌效价.结果显示,3个突变体的抑菌活性比CecA-mag分别提高了1....  相似文献   

猪渗出性皮炎   总被引：4，自引：0，他引：4  

蔡汝健  郝永清  宋长绪 《动物医学进展》2008,29(8)

猪渗出性皮炎是由猪葡萄球菌引起猪的出现全身油脂样渗出、形成皮痂并脱落,甚至导致脱水和死亡等临床症状的一种急性传染病。论文综述了近年来有关猪渗出性皮炎的病原学、流行病学和致病机理方面的研究结果,并就猪渗出性皮炎的诊断和防治进行了简要介绍。  相似文献