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旨在获得兔促性腺激素抑制素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)基因，检测其在不同组织和不同发育阶段下丘脑中的表达水平，研究其对幼龄公兔生殖激素分泌的影响。本研究以90日龄健康闽西南黑兔公兔为研究对象，采用RACE技术(rapid-amplification of cDNA ends)从下丘脑组织中克隆出GnIH基因，并对序列进行生物信息学分析；采用实时荧光定量PCR方法(real-time quantitative PCR,qPCR)检测GnIH基因mRNA在90日龄公兔不同组织表达水平(n=5)及11、30、60、90、120、150日龄公兔下丘脑中的表达水平(n=6);连续10 d向80日龄公兔分别注射0、0.5、5和50μg鹌鹑GnIH相关肽(n=10)。第11天早上采集耳静脉血液后，屠宰公兔，采集睾丸组织，分别检测血清中生殖激素浓度(GnRH、FSH、LH、INHB和T)和睾丸组织中睾酮合成相关酶基因(StarR、3β-HSD和p450scc)mRNA的表达水平。结果表明，兔GnIH基因cDNA全长904 bp,包含5′UTR 41 bp... 相似文献
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为建立特异性强且敏感性高的兔源F型多杀性巴氏杆菌(Pm)快速检测方法，本实验根据F型Pm fcbD基因的保守序列设计特异性引物和探针，经反应条件优化，建立了检测兔源F型Pm的荧光定量PCR方法。利用该方法检测兔源F型Pm、兔源A和D型Pm、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、魏氏梭菌和金黄色葡萄球菌等临床常见兔源病原菌，结果显示，该方法仅对兔源F型Pm检测为阳性，其余病原菌均为阴性，特异性强。利用该方法分别检测10倍倍比稀释(1×108拷贝/μL～1×100拷贝/μL)的兔源F型Pm基因组DNA，进行敏感性试验，结果显示该方法的检测限为10拷贝/μL，敏感性分别是已报导的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的100倍和10倍，敏感性高。利用该方法对不同稀释度的质粒标准品进行批内和批间重复性试验，结果显示，批内和批间变异系数均小于3%，重复性好。利用该方法检测64份已知结果的临床样品，结果显示该方法的检测结果与已报导的双重PCR方法和环介导等温扩增方法检测结果的符合率均为100%，准确性高。本研究首次以fcbD为靶基因建立兔源F型Pm的荧... 相似文献