新城疫活苗和油苗免疫雏鸡血清特异性IgG动态变化的研究     

张永久  董秀华  陈洪岩 《黑龙江畜牧兽医》2000,(5):6

实验应用间接ELISA方法对新城疫LaSota疫苗和克隆-30油苗免疫鸡血清特异性IgG抗体的动态变化进行了观察.结果表明,二者抗体产生的时间不同,LaSota疫苗免疫鸡血清中特异性IgG抗体的产生早于油苗,但二者抗体滴度的最高值(OD490 nm)无显著差异.实验还表明ELISA法检测新城疫抗体的变化具有灵敏,稳定和重复性好等优点.  相似文献   

鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定   总被引：7，自引：0，他引：7  

刘胜旺  陈洪岩  孔宪刚  张宝山  马云燕  童光志  卢景良 《中国兽医学报》2000,20(3):228-230

应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡 型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡 γ-干扰素基因  相似文献   

接种La Sota疫苗雏鸡外周器官中CD4+T细胞的来源及其作用     

刘胜旺  陈洪岩  李一经  陈立君  孔宪刚  卢景良 《中国兽医学报》1999,19(3):212-214

切除胸腺的２日龄雏鸡,接种抗鸡Ｔ细胞表面分子ＣＤ４的单克隆抗体,于１２日龄时以ＬａＳｏｔａ疫苗免疫。然后,在不同的日龄分别用ＦＡＣＳ,ＭＴＴ及间接ＥＬＩＳＡ测定脾脏和外周血中ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋Ｔ淋巴细胞亚类数量,脾Ｔ淋巴细胞转化功能及病毒特异的血清ＩｇＧ抗体的动态变化。  相似文献   

兔多杀性巴氏杆菌和兔出血症病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用     

王豪杰  陈见兴  王梦杰  林欢  夏长友  刘家森  陈洪岩  朱良全  张贺  王玉娥 《中国预防兽医学报》2023,(2):150-155

为建立兔多杀性巴氏杆菌(Pm)和兔出血症病毒(RHDV)的双重PCR检测方法，本研究根据Pm kmt1基因和RHDV VP60基因保守区域，设计2对特异性引物，经PCR分别扩增Pm kmt1基因和RHDV VP60基因保守区域，构建重组质粒p MD-Pm和p MD-RHDV，并经菌液PCR和测序鉴定后作为重组质粒标准品。经各反应条件优化后初步建立了检测Pm和RHDV的双重PCR方法。反应条件优化结果显示，该方法的最适退火温度为59℃，扩增kmt1和VP60基因的最优引物浓度均为0.5μL (10μmol/L)。对Pm和RHDV及其他病原包括兔源支气管败血波氏杆菌、产气荚膜梭菌等20种相关病原的特异性试验结果显示，除Pm和RHDV有特异性扩增条带外，其余相关病原均无扩增条带，特异性较强。将两种重组质粒标准品分别10倍倍比稀释并等体积混合后作为模板，经该双重PCR方法扩增。结果显示，该方法对p MD-Pm的检测限为17.9拷贝/μL，对p MD-RHDV的检测限为1 260拷贝/μL，敏感性较高；对两种病原的DNA和cDNA混合物的批内和批间重复性试验结果均一致，重复性较好。对100份临床...  相似文献   

猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究     

史鑫琪  季朝阳  陈晓彤  张子博  张鑫  郭慧娟  田璐  王洪峰  陈洪岩  王靖飞  冯力  夏长友  孟庆文 《中国预防兽医学报》2023,(1):1-8

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N (pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响，本研究检索并分析p APN与TGEV的结合位点，结果显示，敲除p APN aa668～aa963对其酶活性无影响。因此，利用CRISPR/Cas9技术构建p APN与TGEV结合位点敲除细胞系，经PCR和western blot鉴定结果显示，正确构建一株敲除p APN aa668～aa963的ST细胞系，即敲除p APN 15-21外显子，命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性，结果显示，敲除p APN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-q PCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达，结果显示，敲除p APN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-q PCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化，结果显示，TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3 (NOD-...  相似文献