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281.
为了同时检测猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒和猪圆环病毒3型（PCV3），基于PRV gE基因和PCV3 Rep基因保守序列各合成了1对引物，在优化反应体系和扩增条件的基础上，建立了检测PRV和PCV3的双重SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。结果显示：PRV和PCV3的Tm值分别为87和81.5 ℃，能特异地检测PRV和PCV3，而对其他5种猪病原均未检测到荧光信号；PRV和PCV3的最低检测值分别为37.0和33.8 copies·μL-1；批内批间变异系数均小于2%；对2017—2019年期间采自河南地区的78份猪临床样品进行检测，PRV和PCV3的阳性率分别为19.23%（15/78）和41.03%（32/78），二者混合感染的阳性率为8.97%（7/78）。表明该方法具有高度的敏感性、特异性和稳定性，可用于监测PRV野毒和PCV3及其流行病学调查。 相似文献
282.
为研制预防高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染的重组伪狂犬病病毒(PRV)活载体疫苗候选毒株，本研究依据HP-PRRSV HuN4毒株GP5基因序列设计并合成1对特异引物，BamHⅠ引入到引物的5′端，从HP-PRRSV毒株的RNA中，用RT-PCR扩增HP-PRRSV GP5基因。将BamHⅠ酶切的PCR产物与同样酶切并去磷酸化的PRV转移载体pG相连接，构建重组质粒pG-GP5/HP-EGFP。采用脂质体转染法将pG-GP5/HP-EGFP质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV-gE-/gI-/TK-的ST细胞中，经病毒空斑纯化，获得携有HP-PRRSV GP5基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记基因的重组伪狂犬病病毒rPRV-GP5/HP-EGFP。将重组病毒rPRV-GP5/HP-EGFP接种CRISPR/Cas9 EGFP敲除质粒转染过的ST细胞，经4轮病毒空斑纯化，最终获得无绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-GP5/HP。经PCR鉴定及测序，证实获得的rPRV-GP5/HP在EGFP基... 相似文献