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为从动物饲料中快速检测所含牛源组织成分以有效防止疯牛病传入，根据牛线粒体基因核苷酸序列设计1对引物，应用CheleX法分离饲料中牛源组织成分的DNA．对分离的DNA进行PCR扩增、基因克隆及核苷酸序列分析，并建立饲料中牛源组织成分的PCR检测方法．用建立的PCR方法对羊、猪、鸡、兔和鱼组织基因组DNA进行扩增，均无特异条带；将牛组织基因组DNA倍比稀释，分别对各个稀释度的DNA进行PCR扩增，结果表明，该方法对牛组织DNA检测的敏感度可达25．2pg／μL．用该研究建立的方法对含不同量牛肉粉的鱼粉进行检测，其最小检测量达0．05％（质量分数），整个过程约需3h． 相似文献
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从患病鹅群中分离到一株禽副黏病毒，编号为2／GD／05／Go，简写为GPMV-2／05。经纯化后发现该病毒在透射电镜下呈圆形、大小比较均一，表面有纤突，对氯仿和酸敏感，不耐热，在中性和碱性溶液中比较稳定。血清学试验结果表明该病毒具有血凝活性，且能被鸡新城疫病毒（NDV）I系、Ⅳ系抗血清部分抑制，但与禽流感、小鹅瘟等病毒无交叉反应。人工感染结果显示，新分离到的病毒对1、14、28、48日龄的鹅均有很强的致病性，尤以30日龄内最为严重，死亡率高达100％；经口服、点眼滴鼻、肌注、皮下注射等途径均能感染鹅，并且临床症状和死亡率与自然感染病例相似。该病毒对鸡也有很高的致病性和致死率，但用NDV强毒攻毒的鹅并不发病。通过免疫保护试验发现，GPMV-2／05与NDVI系、Ⅳ系及强毒F48E9有部分免疫原性交叉。血清学、电镜观察、理化鉴定、病理组织学观察、免疫保护试验、RT-PCR鉴定以及致病性指数的测定等结果均表明该病毒是一株对鹅具有高致病力的禽副黏病毒。 相似文献
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为了比较4种常用消毒剂对猪流感病毒的杀灭效果,试验采用鸡胚感染试验和Klein-De-fors悬浮灭活试验,研究了不同浓度复合酚、二氯异氰尿酸钠、过氧乙酸、苯扎溴铵与H3N2猪流感病毒作用5,10 min的杀灭率。结果表明:复合酚1∶2 000的稀释液、二氯异氰尿酸钠1∶800的稀释液、过氧乙酸1∶10 000的稀释液、苯扎溴铵1∶300的稀释液能将病毒100%杀灭。说明过氧乙酸的杀灭效果较显著,其他依次是复合酚、二氯异氰尿酸钠、苯扎溴铵。 相似文献
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为了研制布鲁菌bp26-间接ELISA抗体检测试剂盒,将布鲁菌bp26基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,以纯化后的重组蛋白bp26包被酶标板,优化ELISA反应条件,组装试剂盒。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,重组蛋白分子质量约为41 ku,经IPTG诱导后高效表达,且具有良好的免疫原性;优化试验确定重组抗原最佳包被浓度为3.6 μg/mL,血清样本的阳性临界值为0.370;特异性试验结果表明,重组蛋白与牛结核菌、副猪嗜血杆菌、链球菌等多种病原体的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果表明,血清稀释至1:12800时,仍检测为阳性;该试剂盒的批内、批间变异系数均小于10%;用该试剂盒检测241份临床牛血清样本,并与试管凝集试验(SAT)检测结果比较,两者符合率为97.1%。原核表达的布鲁菌bp26具有良好的免疫原性,研制的布鲁菌bp26-间接ELISA抗体检测试剂盒敏感性、特异性和重复性较好,可为布鲁菌基因缺失标记疫苗的应用提供配套的血清学诊断方法。 相似文献
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猪瘟病毒RT-LAMP-LFD检测方法的建立与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】建立一种新型的、能在基层场地进行实时便捷诊断的猪瘟病毒检测方法。【方法】环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)相结合,针对猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)NS5B基因设计一套特异性引物及生物素标记探针,结合异硫氰酸荧光素标记的扩增产物,建立RT-LAMP-LFD检测方法。【结果】所建立的方法能够特异地检测出CSFV的存在,检测PRRSV、JEV、PCV-2等其他病毒均为阴性;所建立的CSFV-RT-LAMP方法对RNA的最低检测限为50 pg;反应快速,整个扩增反应可在1 h内完成;操作简单,不需要PCR仪等复杂的仪器,结果可经肉眼观察。【结论】应用RTLAMP-LFD检测CSFV特异性强、灵敏度高,并且操作安全、简便、快捷,可以满足基层检疫的需要。 相似文献
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siRNA抑制口蹄疫病毒在BHK-21细胞中复制的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
选取口蹄疫病毒(FMDV)的VP1、IRES、2B、3D和L基因保守序列,设计、合成siRNA,并成功构建表达siRNA的穿梭载体,通过脂质体2000在BHK-21细胞上转染6个重组siRNA表达质粒,观察其对FMDV S72毒株复制的抑制效果.结果发现:病毒对照和空载体对照细胞死亡脱落,脂质体2000对照和细胞对照细胞状态良好; 6个siRNA转染孔细胞状态明显优于病毒对照孔,表明6个重组质粒转染后均可以显著抑制FMDV S72毒株的复制,其中靶向IRES1基因的siRNA对FMDV的复制抑制最为明显. 相似文献
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淇河鲫IL-8原核表达系统的构建及多克隆抗体的制备与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为揭示淇河鲫(Carassius auratus var.Qihe)白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)的功能,本研究构建了原核表达系统,并制备了兔抗鲫IL-8多克隆抗体。首先采用RT-PCR法扩增淇河鲫IL-8基因编码序列中不含信号肽的基因片段,克隆到pET-32a(+)载体后转化入Rosetta菌株构建原核表达系统。经IPTG诱导表达出相对分子质量约27.8 kD的目标融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,效价达1︰10~5。经免疫亲和层析纯化的抗体能特异性识别重组和天然的淇河鲫IL-8蛋白。比较不同组织的免疫组化和荧光定量PCR结果,IL-8蛋白量和mRNA的表达量在不同组织间变化趋势一致,在肌肉、脾和头肾均检测到较高的表达量,肠道的表达量较低。本研究为进一步探讨淇河鲫IL-8的生物学功能奠定了基础。 相似文献
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