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通过PCR技术获得口蹄疫病毒非结构蛋白3B基因,将其克隆至质粒pET-32a（＋）和高效可溶性表达质粒pEM中,经PCR筛选,获得阳性重组子pET-3B和pEM-3B,将它们转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE及Western-blot检测结果证明,表达的3B融合蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应。蛋白可溶性分析表明,EM-3B融合蛋白绝大部分以可溶形式表达。以此可溶性融合蛋白EM-3B为抗原建立了可区分FMD免疫动物和感染动物的EM-3B-DIVA-ELISA方法,经检测,其特异性为95.0%,敏感性为97.5%,与2个国产试剂盒的符合率分别为96.25%和98.75%。 相似文献
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20世纪70年代Tischer ea al.(1974)首次发现猪圆环病毒(PCV2),它所引发的猪圆环病毒病给养猪业造成很大的经济损失. 相似文献
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试验旨在研究鸭β-防御素-2制剂对肉鸭生长性能的影响.将试验雏鸭分为5组,每组4个重复,每重复50只鸭.A组为基础饲粮(不合任何抗生素);B组为基础饲粮+抗生素;C组为基础饲粮+重组鸭β-防御素-2制剂(300 g/t);D组为基础饲粮+重组鸭β-防御素-2制剂(450g/t);E组为基础饲粮+重组鸭β-防御素-2制剂(600g/t).结果表明:50日龄肉鸭末质量,C组比A和B组分别高4.09％和3.10％,均具有显著差异.日均增质量,C组比A和B组分别高4.17％和3.25％,差异均显著.日均采食量,E组比D组高6.49％,差异显著.料重比,C组比A、B和E组分别低3.05％、3.05％和5.71％,差异显著;D组比A、B和E组分别低3.91％、3.91％和6.54％,差异显著.结果表明:重组鸭β-防御素-2制剂对肉鸭生长性能均有正面效果,但添加不同剂量的效果有差异. 相似文献
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鸡β-防御素-1cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达 总被引：8，自引：3，他引：8
从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA，经过反转录PCR（RT-PCR）扩增出鸡β-防御素-1（Gallinacin-1，Gal-1）cDNA，将扩增产物与pGEM—T Easy载体相连，经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为198bp，与报道的Gal—1cDNA编码区碱基序列完全相同。分析核苷酸序列表明Gal-1与火鸡异嗜性白细胞肽-1（Turkey heterophil peptides，THP-1）具有85．4％同源性。氨基酸序列方面Gal-1与THP-1同源性最高，为72．7％。将Gal-1基因成熟肽片段插入到酵母表达载体pPIZα-C，构建重组表达载体pPICZα-C-gal-1，电转入表达宿主菌X-33，Zeocin抗性筛选重组菌株。挑取阳性菌株经甲醇诱导表达，Tricine-SDS-PAGE电泳发现在约4．5ku位置出现预期条带。对其抗菌活性检测发现具有抗大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等细菌的活性。反相高效液相色谱表明阳性菌株表达产物与标准品在层析柱中保留时间一致。 相似文献
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将IBDV超强毒株HK46的结构蛋白vp2基因的cDNA片段插入表达质粒psoc的EcoRI位点,获得重组质粒pSOC-VP2．用pSOC-VP2转化E．coli BL21(DE3),获得表达VP2蛋白的工程菌BL-SOC-VP2．在1μG/mL IFIG诱导之下,BL-SOC-VP2表达了融合蛋白SOC-VP2,其相对分子质量为49000．SDS-PAGE检测表明,融合蛋白SOC-VP2的最大表达量为细菌总量的14．35％．ELISA分析表明,大肠杆菌表达的SOC-VP2能与IBDV阳性血清发生特异性反应． 相似文献
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根据Genbank收录的I型鸭肝炎病毒(DHV-I)的VPI基因保守序列,设计合成特异性引物,建立了检测DHV-I的RT-PCR方法.并确定了该方法的特异性与灵敏性;对DHV-I分离毒株进行RT-PCR检测均得到阳性扩增结果.而作为阴性对照的常见4种鸭病病原如鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、鹅副粘病毒均未成功扩增;对DHV-I临床病料进行RT-PCR检测,检测结果与病毒分离结果一致.结果表明,建立的DHV-I的RT-PCR技术具有快速、特异、灵敏的特点. 相似文献
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用设计的特异性引物,采用RT-PCR方法扩增到广西黄鸡β-防御素基因gallinacin-1(简称Gal-1)-galllnacin-13(简称Gal-13).通过克隆、测序获得这13个基因的cDNA核苷酸序列,并提交到GcnBank(Gal-1-Gal-13基因的注册号为:DQ858297～DQ858310).比较分析广西黄鸡13种β-防御素Gal-1-Gal-13基因分别与GenBank中注册的防御素基因氨基酸序列的相似性,其氨基酸的相似性均在95.5%～100%之间.利用DNAStar软件对所获得的13种广西黄鸡β-防御素基因进行系统发育树分析,结果Gal-1与Gal-5、Gal-12、Gal-2在同一分支上,Gal-6、Gal-7、Gal-9、Gal-8在同一分支上,Gal-10、Gal-11、Gal-4在同一分支,Gal-13独自为一分支.同样用RT-PCR方法分析了广西黄鸡β-防御素Gal-1-Gal-13基因在不同组织中的分布,结果发现:Gal-1、Gal-2、Gal-4、Gal-5、Gal-6、Gal-7、Gal-10的表达分布非常广泛,Gal-3、Gal-8、Gal-9、Gal-11、Gal-12、Gal-13的分布较少. 相似文献
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肌肉生成抑制因子多克隆抗体的制备与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
运用纯化的肌肉生成抑制因子(myostatin,简称MSTN)蛋白为免疫原制备弗氏佐剂疫苗,主动免疫健壮的雄性青年家兔以制备抗血清,运用饱和硫酸胺沉淀法对所制备的抗血清成功地进行粗提．Western-Blot和ELISA检测结果是;当抗原质量浓度为20μg／mL,抗体稀释800倍时,所测的P／N仍大于2,证明抗体的制备是成功的,抗体效价为1：12800,且特异性较高．抗体稀释400倍时,血清抗体D450nm值为0．624,P／N值为5．552． 相似文献
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本文旨在研究鸡β-防御素-1(AvBD1)对鸡IBDVVP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用。通过基因工程技术,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2。14日龄岭南黄肉鸡随机分成5组,分别免疫PBS、空质粒载体pcDNA3.1(+)、重组质粒pcDNA3.1(+)-VP2、重组质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcD-NA3.1(+)-VP2联合免疫、IBD弱毒苗。收集免疫后不同时期的外周血血清样本,用ELISA方法检测血清中IB-DV VP2特异性抗体水平,通过流式细胞仪检测CD3+、CD4+与CD8+T淋巴细胞的含量。结果表明,联合免疫组(即pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2共同免疫)VP2特异性抗体水平显著高于其他组;单独免疫质粒pcDNA3.1(+)-VP2组VP2特异性抗体水平与免疫IBD弱毒苗组相当,显著高于PBS组与空质粒载体pcD-NA3.1(+)组。在二免后第7天,联合免疫组外周血中CD3+、CD4+与CD8+T淋巴细胞的含量也显著高于单独免疫质粒pcDNA3.1(+)-VP2组,其它时间无显著性差异。IBDV攻毒... 相似文献