应用SYBR Green I的Real-time PCR方法定量检测空肠弯曲杆菌   总被引：2，自引：0，他引：2  

阳成波  蒋原  黄克和  祝长青 《动物医学进展》2003,24(1):74-78

空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)被认为是人类主要食源性病原菌之一。由于空肠弯曲杆菌特殊的生长条件和容易进入不可培养但存活的状态(Viablebutnonculturable,VNC),所以传统的生化鉴定结果不一定可靠,并且是一项费时而繁琐的工作。核酸检测方法的出现为空肠弯曲杆菌的检测带来了方便。本文基于LightCycler为平台,利用SYBRGreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立一种Real-timePCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。用该方法检测时,发现所有空肠弯曲杆菌(11株)都呈阳性,所有其它弯曲菌(3株)和其它菌株(5株)都是阴性。整个检测过程60min内可以完成,检测限度为5CFU,标准曲线的相关系数为1。结果表明基于SYBRGreenI的定量PCR方法既为空肠弯曲杆菌提供了一种特异、敏感、快速和简洁的定量检测方法,又为研究空肠弯曲杆菌致病机理提供了一种重要方法。  相似文献   

狂犬病病毒SRV9克隆株核蛋白基因的克隆、表达与特性分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

袁慧君  扈荣良  张守峰  张茂林  涂长春 《中国预防兽医学报》2003,25(1):5-8

根据已发表的狂犬病病毒核蛋白基因序列，设计并合成了一对引物，从SAD株驯化的SRV9。蚀斑株中提取病毒RNA，通过RT-PCR扩增出核蛋白的全长cDNA序列，测序结果显示，其序列与国外报道的SAD母源株序列一致。将核蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET-28b( )中，转化大肠杆菌BL21（DE3）plyss，于30℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达，大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE分析，在分子量约为56kDa处出现一新的蛋白带。和预期的目的蛋白分子量相符，Western-blotting检测表明，表达产物能与狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应，出现单一反应带，扫描分析显示，表达产物占菌体总蛋白的23%，包涵体分离，纯化后，纯度达89%，上述结果为核蛋白在狂犬病基因免疫和免疫检测中的进一步应用奠定了基础。  相似文献   

猫鼻气管炎病毒、怀状病毒、泛白细胞减少症病毒的分离及其其形态学观察     

李六金  李成  姜焕宏  吴钟灵  胡淑贤  师长宏  张志培  李学忠  刘晓荣 《中国预防兽医学报》2001,23(5):341-345

根据病毒的理化特性，从猫三联活疫苗中分离出猫鼻气管炎、猫西洋太和猫泛白细胞减少症病毒；筛选出每种病毒敏感的细胞，并将该3种病毒分别分别在其中传代与扩增；通过电镜观察此3种病毒的形态学特征及其在宿主细胞内增殖部位、分布情况等，并以此对猫3种病毒进行了初步鉴定。  相似文献   

Genotype evaluation,muscle histopathology and ultrastructure in a Duchenne muscular dystrophy animal model     

LI Zhong  ZHANG Cheng  CHEN Guo-jun  LIU Xiao-rong 《园艺学报》2004,20(3):311-316

AIM: To evaluate the genotype , muscle histopathology and ultrastructure in dko mice. METHODS: Dystrophin/Utrophin-deficient double knockouts (dko) mice were obtained from university of Oxford, UK. Genotype of filial generation of heterozygote was evaluated by PCR-SSP. HE staining and fluorescent immunohistochemistry by SABC-Cy3 were used to detect striated muscle of dko mouse, and the muscle ultrastructure was observed by transmission electron microscope(TEM). RESULTS: In 112 filial generation mice, there were 28 mdx (25.0%), 26 dko (23.2%) and 58 heterozygote (51.8%), which coincided with the law of Mendelian inheritance. HE staining showed that the myocytes were not very uniform, there were phenomenon of round outline, centrally nucleated fibers, widening interspace, inflammatory cell infiltration and connective tissue proliferation in dko mice. There were no any immunofluorescent expression of dystrophin and utrophin in sarcolemma in dko mice. TEM showed sarcolemma breakage, separation and edema, and loose myofibril texture, inflammatory cell infiltration and connective tissue proliferation in dko mice. CONCLUSION: PCR-SSP is a very quick and accurate way for genotype evaluation of filial generation. The pathophysiology of dko mouse was very similar to Duchenne muscular dystrophy (DMD), and dko mouse is an ideal animal model for study of DMD clinical therapy.  相似文献   

两株新分离的APMV-I毒株感染SPF鸡的超微病理变化     

袁莉民  王永坤  朱国强  郁斌 《畜牧兽医学报》2004,35(5):565-569

将APMV-I鹅源分离株YG97鸡源分离株Y98和NDV强毒株F48E8感染SPF鸡，运用透射电镜观察该2株病毒分离株对机体细胞的影响，结果显示3株禽副黏病毒均引起机体肝、胰、脾、肾、心、胃、十二指肠和直肠等实质器官组织细胞的超微病变，如黏膜上皮细胞多处受损，表面微绒毛脱落；实质细胞核固缩、凝聚、凹陷、核多形性，线粒体嵴断裂、空泡样变、膜溶解，粗面内质网扩张、囊泡变，细胞浆的囊泡内及细胞浆内存在有囊膜的成熟病毒粒子等，但YG97和Y98对不同实质器官的组织细胞超微病变程度不一：胃、肝、胰、脾、肾超微病变比心脏的超微病变严重。电镜观察结果还表明：3株禽副黏病毒引起宿主细胞的超微病变有2种形式：坏死性病变和凋亡性病变。  相似文献   

制动防抱死系统在汽车上的应用     

辛海升  袁海清  岳海军 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》2004,25(3):67-70

在文中通过研究汽车制动时的受力情况、路面附着特性、制动防抱死系统的控制方式、组成和工作情况，得出了使车轮滑动率保持在20％的最佳状态可提高汽车的制动效能，缩短制动距离。并使汽车具有较好的转向和抵抗侧向力的作用，提高汽车制动时的方向稳定性的结论。  相似文献   

云南中亚热带禾本科高产饲草引种试验     

袁福锦  吴文荣  艾有林  刘霞  余永华  黄必志 《草业与畜牧》2006,(5):5-7

在云南中亚热带试验点,对8个禾本科饲草栽培种进行引种栽培试验,结果表明墨西哥类玉米、8493墨西哥类玉米、大力士甜高粱、先锋高丹草和M-8IE甜高粱5个栽培种干物质产量高,适应性强,适宜在相似气候条件地区推广种植.  相似文献   

水稻条纹病毒在玉米和水稻上流行差异分析     

程兆榜  陈思宏  朱荣鹏  刘海建  魏邦庆  熊如意  周彤  季英华  周益军  范永坚 《勤云标准版测试》2006,(12)

为了明确水稻条纹病毒(RSV)在水稻和玉米上发生程度差异明显的原因,从一个侧面了解RSV流行本质,2004年在洪泽进行田间试验。采用黄盘诱集、盘扑、盘刮、肉眼计数等方法比较武育粳3号和掖单13上灰飞虱侵入和消长动态,结果表明两者均只有一个成虫侵入高峰,单位面积迁入虫量前者是后者的3.6倍,单株平均虫量相近。Dot-ELISA法测定灰飞虱带毒率为40%,成虫迁移扩散高峰期22d内两者接毒量约为每天百株137头带毒虫。武育粳3号有二代若虫发生,掖单13则无。逐日调查发病进程,结果显示水稻发病率为60%,玉米为0。室内抗性鉴定,掖单13对RSV的抗性比武育粳3号高4个级别。综合以上结果,寄主品种抗性决定了RSV在水稻和玉米上流行状况,二代若虫重复侵染是RSV在水稻上重发的另一主要原因。  相似文献   

宁化县思茅松毛虫发生情况分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

伍澄 《福建林业科技》2006,33(1):235-236

调查了思茅松毛虫的生物学特性,并对大发生原因进行了分析和探讨,同时提出了对该虫的防治措施。  相似文献   

苜蓿褐斑病抗性与几种同工酶的关系   总被引：6，自引：1，他引：5  

袁庆华  桂枝 《草业学报》2003,12(6):58-63

以苜蓿5个品种在褐斑病抗性上存在差异的抗、感单株为材料，研究了接种病菌后苜蓿褐斑病抗性与多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)及其酶活性的关系。研究结果表明，褐斑病侵染后，苜蓿抗病株系和感病株系叶片中PPO、POD和SOD同工酶谱带多少和强弱存在明显的差异，即大部分抗病株系PPO、POD和SOD酶活性高于感病株系，并有新的同工酶带出现。PPO、POD和SOD在苜蓿抗褐斑病上可能起到重要作用，其同工酶谱带和酶活性的差异有可能做为鉴定苜蓿抗褐斑病的一种同工酶标记。  相似文献