气肿疽梭菌CctA基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立     

李新苹  陈晓洁  赵兵  刘强德  丁占强  张飞  唐慧芬  曹剑  侯凤  刘洋  王钢 《中国畜牧兽医》2021,48(5):1876-1882

研究旨在原核表达气肿疽梭菌细胞毒素A （CctA）基因,用纯化的重组蛋白建立其间接ELISA检测方法,a。利用大肠杆菌密码子的偏爱性优化CctA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a （+）,双酶切鉴定原核表达质粒pET28a-CctA并测序。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导得到高表达的重组CctA包涵体蛋白。包涵体蛋白变性后经镍（Ni）柱纯化,SDS-PAGE检测其纯化效果。以豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清为一抗,用Western blotting方法检测重组CctA蛋白的反应原性。用棋盘滴定法建立间接ELISA检测方法,以复性后的重组CctA蛋白作为检测抗原,摸索抗原包被浓度、封闭液的种类及浓度、抗体的最适稀释度和反应条件等。选用3批气肿疽灭活疫苗免疫豚鼠后采集血清,同时用攻毒和间接ELISA两种方法验证疫苗的免疫效力。质粒双酶切结果显示,得到大小约853 bp的条带,与预期相符,且测序结果正确。SDS-PAGE结果表明,成功表达并纯化大小为35 ku的重组CctA蛋白。Western blotting结果显示,豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清与重组CctA蛋白具有良好的反应原性。建立的间接ELISA法的最适条件为：抗原的包被浓度为0.5 μg/mL,于4 ℃包被过夜;封闭液选择10%胎牛血清,37 ℃孵育2 h;二抗的稀释度为1：8 000;室温避光显色10 min后终止反应,测定D_{450 nm}值。当P/N>4.6时,间接ELISA法检测结果与豚鼠攻毒试验结果拟合度较好。本研究成功表达CctA基因并纯化了重组CctA蛋白,建立的以重组CctA蛋白为检测抗原的间接ELISA检测方法,有望成为气肿疽灭活疫苗免疫效果验证的替代方法。  相似文献   

荷斯坦奶牛休息时间的群体特征及影响因素分析     

马龙刚  安涛  张海亮  竹磊  王磊  宁景扬  王炎  郭刚  黄锡霞  王雅春 《中国畜牧兽医》2021,48(9):3323-3331

为探究北京地区荷斯坦奶牛休息时间的群体规律及影响因素,本研究收集了北京地区某规模化牧场2018年4月至2020年4月共838头荷斯坦奶牛的休息时间及对应的奶牛生产性能测定记录及环境温湿度数据,利用SAS 9.2软件的GLM过程分析了年份、季节、场区、胎次和泌乳月等因素对荷斯坦奶牛休息时间的影响,并分析了休息时间对荷斯坦奶牛生产性能的影响。结果显示,荷斯坦奶牛平均休息时间为397.39 min/d,范围为87.74~707.03 min/d,变异系数为26%;休息时间随季节呈先降低后升高的趋势,夏季最低,冬季最高;随环境温湿度的升高而逐渐降低;产犊和发病对休息时间均有较大影响,产犊和发病当天奶牛休息时间均存在一个峰值,之后逐渐降低至正常水平;测定年份、季节、场区、胎次和泌乳月份对休息时间均有极显著影响（P<0.01）;荷斯坦奶牛产奶量随休息时间的升高而降低。本研究为利用自动化记录设备探究奶牛的行为规律及利用连续测定的休息时间数据提高牛群的精准管理水平提供了理论依据。  相似文献   

基于线粒体DNA Cyt b研究城市化对上海金线侧褶蛙遗传结构的影响     

张伟  谢汉宾  杨刚  王军馥  李必成  王天厚  王小明 《野生动物学报》2021,(2):470-478

城市化在全球范围内快速扩张,已经成为影响物种进化的重要力量。两栖动物的迁移能力较弱,城市化导致两栖类被完全或部分的隔离,丢失更多的遗传多样性。本研究对上海市的金线侧褶蛙(Pelophylax plancyi)的mtDNA Cyt b部分序列进行分析,共扩增出235条序列,获得61个单倍型。研究表明城市区域遗传多样性较低,上海市的金线侧褶蛙分化程度处于中低的水平(Max F_ST=0.296;Min F_ST=0.004),各种群之间遗传分化有限。黄浦江及其支流可能作为水上扩散通道,有助于基因交流,各城市公园之间的遗传分化差异并不显著;而长江阻碍了种群之间的交流,城市公园和郊区,以及岛屿种群之间的遗传分化显著。此外,单倍型网络和系统发育分析表明,上海的金线侧褶蛙并没有对应城市化程度形成相应的单系。  相似文献   

通用型联合收割机独立割台液压传动系统设计   总被引：1，自引：0，他引：1  

王刚  吴崇友  伍德林 《中国农机化学报》2015,(3):34-38

对比国内传统的单一型联合收割机及国外通用型互换割台式联合收割机,分析了通用型联合收割机独立割台液压传动系统及搅龙、割刀与拨禾轮的作业过程参数。以星光联合收割机为例,对独立割台液压传动系统的配置方案、液压元件的选型、液压系统主要参数的确定、液压系统的性能验算等方面进行了研究,为我国通用型联合收割机独立割台液压传动系统的设计和配置提供重要的参考价值。  相似文献   

食品加工工艺的安全防火措施     

曲刚 《湖南农机》2015,(2):114-115

随着我国食品加工行业的迅猛发展,食品加工工艺的机械化程度大大提高,用火用电危险品日益增多,容易发生火灾,存在一定的安全隐患,食品加工负责人必须加强火灾防范意识,防止和减少因火灾造成的经济损失和人身安全事故的发生。  相似文献   

6种灌木不同器官生物量及其碳、氮含量的分配特征   总被引：1，自引：0，他引：1  

张智袁  赵祥  李刚 《草原与草坪》2016,(3)

通过研究晋北地区草地黄刺玫、沙棘、荆条、酸枣、绣线菊和柠条等6种常见灌木的叶片、新生枝、老龄枝生物量及其碳、氮含量的分配特征,旨在为草地准确估算草地植物碳、氮循环提供依据。结果表明:黄刺玫的地上生物量最大,是酸枣的7倍。沙棘叶片生物量占地上生物量的比例最大;黄刺玫新生枝生物量占地上生物量的比例最大;柠条老龄枝生物量占地上生物量的比例最大。黄刺玫、沙棘和荆条的地上部分各器官生物量分配特征相似,由高到低表现为叶片、老龄枝、新生枝;绣线菊、酸枣和柠条的地上部分各器官生物量分配特征相似,由高到低表现为老龄枝、叶片、新生枝。6种灌木地上部分各器官碳含量差异不显著,氮含量分布由高到低为叶片、新生枝、老龄枝。  相似文献   

三种基因型羽衣甘蓝筛选适合叶绿体转化材料     

平璐  顾德峰  韦正乙  仲晓芳  林春晶  邢少辰  王云鹏 《北方园艺》2016,(2):92-99

以3种不同基因型的羽衣甘蓝品种"皱叶红心"、"白鸥"和"红鸥"为试材,以MS培养基为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA、NAA、IBA激素,筛选不同品种真叶叶片不定芽的诱导频率,同时确定不同材料对除草剂双丙氨膦和抗生素壮观霉素的致死临界质量浓度,为羽衣甘蓝的叶绿体转化研究筛选受体材料。结果表明:影响羽衣甘蓝叶片诱导不定芽因素中,激素质量浓度的影响比品种的影响更大;当诱导培养基中的6-BA质量浓度为1.0mg/L、NAA质量浓度为0.1mg/L时,诱导效果最佳,是3个品种的最适培养基;按照由高到低的顺序排列,3个品种的不定芽诱导率依次为"红鸥"、"白鸥"和"皱叶红心",因此择优利用品种"红鸥"作为后续转基因研究的受体材料;分别利用双丙氨膦和壮观霉素的不同质量浓度梯度进行筛选,研究二者对"红鸥"品种叶片分化的影响,发现双丙氨膦和壮观霉素的最低抑制质量浓度分别为4mg/L和50mg/L。该研究结果对今后利用叶绿体遗传转化技术改良羽衣甘蓝品种提供了技术支持。  相似文献   

亚美马褂木不同生根类型硬枝扦插苗生长研究     

李彦强  杨爱红  孙小艳  钟永达  高柱  余发新 《北方园艺》2016,(15):72-74

以珍珠岩基质中亚美马褂木硬枝扦插苗为研究对象,研究了扦插苗生根类型、不定根数、不定根长、苗高、基径、鲜样质量和根芽距等生长指标,为选择高生长和高生根率无性系提供参考。结果表明:亚美马褂木扦插苗不定根形成有3种生根类型即皮部生根类型、中间生根类型和愈伤生根类型,其中愈伤生根类型扦插苗成活数量多,中间生根类型扦插苗生长最好,愈伤生根类型扦插苗生长较好。扦插苗鲜样质量与不定根数、不定根长、苗高和基径等相关系数达极显著正相关,苗高与不定根数和基径、不定根数与基径等相关系数达极显著正相关,不定根数与生根类型相关系数达极显著负相关。  相似文献   

不同处理方法对小松菜冻藏期保鲜品质的影响     

朱东兴  刘天鹤  仲伟  韩曜平  黄友如  陈义勇 《北方园艺》2016,(10):131-134

以新鲜小松菜为试材,采用小苏打复合液、乙酸锌复合液2种不同保绿途径对其冻藏前进行烫漂处理,并对小松菜钙、钠、锌元素含量进行测定,比较了2种不同前处理消解方法精确性,研究了不同处理方法对冻藏期小松菜相关品质指标的影响。结果表明:2种保绿途径均显著延缓了小松菜总叶绿素含量的损失(P0.05),不同程度增加了样品中钙、钠、锌离子含量,其中金属离子保绿途径的乙酸锌复合液处理样品的锌离子残留量超标,相比而言,碱保绿途径的小苏打复合液处理对冻藏期小松菜相关元素残留安全性及护绿效果较好,处理时应避免长时间、高温烫漂对产品硬脆度的破坏而抵消复合液中钙离子的保脆效应。  相似文献   

珍稀濒危植物膝柄木种子催芽研究     

钟国贵  谢绍添  苏付保  冯立新  黎健杏 《北方园艺》2016,(5):83-85

以采自越南广宁省海河县的膝柄木种子为试材,研究了不同药剂和浓度对种子发芽率和芽苗主根生长的影响。结果表明:与水浸相比,艾比蒂生根剂1号和双吉尔氨基酸肥料6号0.5~15.0mg/L浸种1h,对膝柄木种子发芽均没有促进作用,可见水浸即可有效促进膝柄木种子发芽;艾比蒂生根剂1号0.5mg/L和双吉尔氨基酸肥料6号0.5~10.0mg/L对膝柄木芽苗主根生长有很好的促进作用。  相似文献