多能性转录因子mRNA转染山羊胎儿成纤维细胞条件优化     

肖天荣  张蕾  邱峰龙  李伟  左其生  李东  李碧春 《中国农业科学》2015,48(20):4159-4169

【目的】针对转染试剂脂质体2000和转染方法进行研究,用以优化外源多能性转录因子oct4、sox2、klf4、c-myc的mRNA转入山羊胎儿成纤维细胞（goat embryonic fibroblast,GEF）的条件。【方法】采用胰酶消化法,从山羊胎儿腿部肌肉组织中分离并获得了纯化的GEF细胞。根据mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra Kit试剂盒说明书,体外转录步骤主要有：①前期的质粒准备：首先用质粒小提试剂盒对摇菌获得的各体外转录载体质粒进行提取,随后对各体外转录载体目的基因下游进行单酶切,获得线性化质粒,最后用DNA纯化试剂盒对线性化的质粒进行纯化;②mRNA的“加帽”：以线性化DNA为模板,合成带有5′端帽子结构的mRNA,添加TURBO DNase以除去模板DNA;③mRNA的“加尾”：以ATP为原料,利用试剂盒自带的Poly(A)聚合酶,对已经“加帽”的mRNA进行“加尾”,以合成结构完整的mRNA;④完整mRNA的纯化：按照MEGAclear^TM Kit试剂盒对mRNA进行纯化。随后,将体外转录获得各转录因子的mRNA进行浓度和OD值测定。分别比较总mRNA（EGFP和4种多能性转录因子的mRNA的质量分别为0.2μg）和脂质体2000 的比例为1:0.5、1:1.0、1:1.5、1:2.0以及在最佳总mRNA与脂质体2000比例体系下第2、4、6代GEF细胞的mRNA转染效率。对最佳转染体系下转染多能性转录因子mRNA的GEF细胞进行免疫荧光检测,并对转染多能性转录因子mRNA后GEF细胞的形态和数目进行观察。【结果】mRNA和脂质体2000 的比例为1:1.0以及在最佳总mRNA与脂质体2000比例体系下第2代GEF细胞的mRNA转染效率均显著高于其他组（P＜0.05）,且本组细胞在形态和生长方面相对较好;免疫荧光检测表明,4种多能性转录因子的mRNA在GEF细胞中定位于细胞核,并获得稳定表达,在细胞质中不见多能性转录因子oct4、sox2、klf4、c-myc的表达;GEF细胞在转染4种mRNA 24h后,细胞形态由梭状慢慢向圆形靠拢;细胞活力低于对照组（山羊成纤维细胞正常生长组）。【结论】GEF细胞在总mRNA和脂质体2000 的比例为1:1.0以及在最佳总mRNA与脂质体2000比例体系下第2代GEF的条件下更适合mRNA的转染。研究工作为mRNA转染体细胞或干细胞的研究及诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPS）的获得提供参考资料,并对mRNA在成纤维细胞中的去向提供间接证据,有利于更加深入地了解多能性转录因子oct4、sox2、klf4、c-myc的mRNA相关功能。  相似文献   

发财树大树桩生根处理技术研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘慧民  张蕾  闫永庆  王崑 《北方园艺》2004,(2):34-35

发财树真正的中文学名为马拉巴栗,是木棉科中的一种常绿乔木,其自然分布地界极窄,仅生存于热带雨林地区,树体高大,根茎处膨大如瓶状,树形奇特,叶片掌状,四季常青,观赏价值极高.近年来,在南方花卉基地,花工们又将发财树幼树株一组,用编"辫子"的方式将其组编在一盆内,培育成大型盆花出售,用以象征商务活动,招财进宝,多财多源.一时间令发财树遍布我国南北花卉市场,市场行情一路看好.  相似文献   

直投式酸奶发酵剂生产菌株的筛选及特性研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

李伟安  张蕾  何书研  袁勇军  周斌  黄乐丹  漏华芳  杨华 《畜牧与饲料科学》2009,30(9):55-57

从进口酸奶发酵剂中筛选酸奶生产菌株并对其生产特性进行研究。从发酵剂中初筛出4株德氏乳杆菌保加利亚亚种和4株唾液链球菌嗜热亚种,并对其进行产酸风味和组织状态的综合评定。结果表明,德氏乳杆菌保加利亚亚种L9和唾液链球菌嗜热亚种S5是发酵牛乳产酸性较强、组织状态好、香气柔和、口感佳的菌株;对2个菌株的共生情况进行了验证,试验表明,2个菌株共生情况良好,其最佳组合为L9∶S5=2∶1（V/V）。该研究结果可为直投式酸奶发酵剂的研制提供优良的生产菌株。  相似文献   

低液量水平管气液分层流摩阻压降的计算     

肖荣鸽  郭雄昂  张蕾  刘长兰  陈栋刚 《油气储运》2006,25(10):38-41

在大型多相流试验环道上进行了空气-水、空气-HVIW150基础油试验,对水平管低液量气液分层流的流动特性进行了研究.选取了ARS模型作为界面形状模型,同时以动量平衡方程为基础,求解了气液两相流的摩阻压降,并将模型预测值与试验所测的摩阻压降作了比较分析,得出了分层流摩阻压降变化的一些规律,在低液量的分层流动中推荐采用ARS界面模型.  相似文献   

如何科学护理新生羔羊     

张蕾 《科学种养》2009,(3):34-34

1．接产和喂奶：羔羊出生后,要立即抹净其口腔、鼻、眼内的羊水,并将羔羊移到母羊视线内,让母羊舔羔羊,促进胎衣的脱落,也利于加强母子感情,使母羊很快接受羔羊的吮乳。初产母羊如不舔羔羊,可选用干草束、干净的纱布擦干羔羊躯体。对出生后呈假死状态的羔羊,应及时摇动其后腿,动作要快而有力,同时,用手指弹击羔羊心脏部位或给羔羊做人工呼吸,  相似文献   

阎良区甜瓜种植气候条件分析及优质高产技术     

张蕾  冯媛媛  杨特  索文婷  李嘉豪 《种子科技》2024,(2):10-12

结合阎良区甜瓜产业发展现状及甜瓜生物学特性,分析了阎良区温度、降水量和日照时数资料,得出了阎良区气候条件比较适宜甜瓜种植,探讨了气象灾害对甜瓜种植的影响,提出了甜瓜优质高产对策,以供参考。  相似文献   

林下太阳辐射环境对人参生长发育影响的初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张蕾  于海业  周丽娜  张志平  蒋斌 《安徽农业科学》2009,37(24):11553-11554

[目的]探究林下太阳辐射环境对人参生长发育的影响。[方法]选取吉林省梅河口市吉乐林场内10个试验单位,测定其内的太阳直射辐射、散射辐射、光合有效辐射（PAR）及光谱辐射指标,以8年生林下参为试验材料,测定其形态指标及净光合速率（Pn）。[结果]林下散射辐射日累计值在109．45～202．27W／m^2时,人参地上部分的生长与散射辐射呈显著负相关;林下参株高仅取决于PAR的大小,茎高、叶宽和叶面积与散射辐射呈显著负相关,而与PAR相关性不显著;茎粗与散射辐射和PAR均呈显著负相关;当PAR值接近时,红橙光和绿光含量高的试验单位,林下参Pn较大。[结论]林下太阳辐射环境对人参的形态特征及光合生理特性均有较大影响。  相似文献   

浅谈新形势下如何加强农业项目资金的管理   总被引：3，自引：0，他引：3  

张蕾 《江西农业学报》2009,21(10):202-204

阐述了如何正确理解中央与各级支农惠农项目资金的目的意义,分析了当前农业项目资金使用管理中存在的主要问题及原因,提出了加强农业项目资金管理,增强农业投资效益的思路与对策。  相似文献   

大豆窄行密植栽培技术     

张秀敏  张蕾 《农民致富之友》2009,(14)

大豆窄行密植栽培技术,是目前发展速度较快的一项先进的栽培技术,配合适宜的大豆品种配套组合而成的窄行、密植技术是实现大豆高产栽培的一项综合技术.现将大豆窄行密植技术,简述如下: 一、精细整地 1、窄行密植必须创造一个良好的土壤耕层条件,选择不重茬、迎茬地块,实行3年以上轮作.  相似文献   

四川盆地主栽油菜品种菌核病抗性评价及稳定性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

黄小琴  刘勇  张蕾  刘红雨  周西全  余垚颖 《中国油料作物学报》2012,34(5):514-517

摘要：采用人工茎秆菌丝接种法对四川省33个主栽油菜品种进行了连续3年菌核病抗性评价和稳定性研究,以川油21为耐病对照品种,将供试品种分为耐病、感病两个类型,高抗、中抗、低抗、低感、中感和高感六个等级。结果显示：四川省种植的油菜无高抗菌核病品种,仅27.27%的品种抗（耐）菌核病;35.37%品种表现为低感菌核病,高感、低抗、中感的品种分别占22.23%、20.20%和15.13%。品种的菌核病抗性稳定性受油菜花期环境和基因型影响显著,仅科源油9号和蓉油12号表现出稳定的耐菌核病特性;11个品种菌核病抗（耐）性丧失,20个品种菌核病抗（耐）性不稳定。  相似文献