自身启动子控制的卡那霉素抗性基因在哺乳动物细胞中表达的检测     

翁玉根  吉玉辉  孙怀昌  张鑫宇  朱建国  易明梅  袁耀明 《畜牧与兽医》2012,44(4):9-13

为了研究卡那霉素抗性(KanR)基因能否在哺乳动物细胞中表达以及用含相同抗性基因重组质粒防治奶牛乳腺炎的安全性,用PCR从重组质粒p215C3LYZ中扩增得KanR基因,将其克隆入原核表达载体pQE-31,用含卡那霉素(Kan)琼脂平板筛选得KanR重组菌,经IPTG诱导成功表达了预期大小的Kan抗性融合蛋白;用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了Kan抗性蛋白抗血清,经Western blotting证明免疫血清特异性良好;分别用重组质粒pQE-Kan和p215C3LYZ转染COS-1细胞,在不含抗生素培养液中培养后分别收集细胞上清和细胞裂解物;将转染细胞上清分为添加和不加Kan组,接种Kan敏感菌DH5α大肠杆菌,培养物的OD600检测结果显示,添加组的指示菌生长被抑制,转染细胞上清中无Kan抗性蛋白表达;以Kan抗性蛋白免疫血清进行的Western blotting结果显示,转染细胞内无Kan抗性蛋白表达;将p215C3LYZ注射奶牛乳腺,用脱脂和浓缩奶样进行Western blotting检测,结果显示试验牛乳中也无Kan抗性蛋白表达。这些试验结果提示,来源于原核大肠杆菌的KanR基因启动子在动物细胞中无转录活性,乳腺注射含KanR基因的重组质粒不会表达对奶牛和人体有害的Kan抗性蛋白。  相似文献   

安徽杨树病害种类及其危害特征研究     

束庆龙  陈超燕  张欢  孙倩  张鑫 《安徽农业科学》2005,33(7):1193-1195

通过对安徽杨树病害进行全面调查与病原鉴定,共查出杨树病害23种,其中11种是1980年以后新发现的病害。病原涉及到真菌、细菌、菟丝子、四足螨和生理因素等。这些病害常造成春季新栽幼树枯死;夏季叶片黄化脱落;夏、秋季叶片变色枯萎早落等。同时,介绍了主要病害的发生特征与防治措施。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒NSP8蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定     

董慧  张鑫  陈建飞  时洪艳  石达  常铁城  谷凤丽  徐天  王智琴  刘明春  冯力 《中国畜牧兽医》2015,42(2):358-364

为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏,采用常规杂交瘤细胞融合方法,经3次亚克隆后制备了1株稳定分泌抗NSP8蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。分泌的单克隆抗体亚类鉴定其重链为IgG1型,轻链为κ链;杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶3 200。Western blotting试验结果表明该单克隆抗体能识别原核及真核表达的NSP8重组蛋白。利用截短表达的方法对NSP8蛋白进行抗原表位的鉴定,初步确定了单克隆抗体针对的抗原表位序列为31SPQILKQLTKAFNIAKSDFEREASV55。本研究制备的单克隆抗体及对抗原表位的鉴定,为TGEV NSP8蛋白相关功能的研究奠定了基础。  相似文献   

复种绿肥油菜还田对青贮玉米农艺性状、产量及土壤养分的影响     

张盛南  汪波  张一为  张鑫  辛勍  王鸿英 《天津农业科学》2022,(4):21-24,30

绿肥是作物轮作倒茬和合理用地养地的重要措施,对促进农业可持续发展有着重要的意义.为探究绿肥油菜作为一种养地作物对土壤养分的影响作用,以及"青贮玉米—绿肥油菜"复种技术模式对青贮玉米的影响,对不种绿肥油菜和复种绿肥油菜并翻压还田后的土壤和青贮玉米的农艺性状、产量进行了对比试验研究.结果表明:两个试验点种植绿肥翻压后较对照...  相似文献   

猪流行性腹泻病毒N蛋白核仁定位信号对宿主细胞周期的影响     

刘随新  石达  陈建飞  张鑫  时洪艳  刘孝珍  张莎  王璐  冯力 《中国预防兽医学报》2013,35(3):173-176

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与宿主细胞相互作用,本研究根据前期已经鉴定的PEDV N蛋白核仁定位信号序列,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法扩增出核仁定位信号序列缺失的PEDV N基因(dN),并将其与真核表达载体pAc-GFP-C1连接,构建重组质粒pAc-GFP-dN。将pAc-GFP-dN转染于Vero E6细胞中,利用激光共聚焦显微镜分析重组质粒pAc-GFP-dN表达蛋白的定位情况,并利用流式细胞仪检测转染细胞的周期变化。实验结果表明:与完整的N蛋白相比,缺失核仁定位信号的N蛋白不能定位于细胞核仁,同时丧失了使宿主细胞周期在G2/M期停滞的能力,从而揭示了N蛋白核仁定位信号对宿主细胞具有重要的影响。  相似文献   

一例大熊猫误食野山芋中毒的诊治报告     

吴虹林  李才武  张鑫  胡兰  陈雪梅  汤纯香  李德生 《当代畜牧》2013,(24):18-19

2010年,某动物园饲养的1只雌性成年大熊猫因误咬野山芋后,出现舌头严重肿大、不能进食的症状。经治疗后舌头逐渐消肿,但由于野山芋汁的毒性引起的舌头不适,导致大熊猫不断用牙齿咬、捋舌头,约2.5cm的舌尖部被咬破,经切除坏死部分、缝合后痊愈。  相似文献   

校企共建校内实习实训基地建设研究——以乌兰察布职业学院“现代学徒制”轻工产品创意设计校内实习实训基地为例     

张鑫 《现代农业》2019,(3)

职业教育的根本目标是实现为社会经济发展提供应用技能型人才,而应用技能型人才的培养则必需贴近社会经济发展实际。对于处在社会经济体制转型期,且自身处于探索阶段的我国职业教育,走校企合作教育之路,对高职院校的发展和技能型人才的培养具有重要意义。大力加强校企合作,成为发展我国职业技术教育的重要战略选择。各高职院校通过与校企合作构建校内实习实训基地建设,成为培养应用技能型人才的解决途径之一。本文以乌兰察布职业学院校企共建"现代学徒制"轻工产品创意设计校内实习实训基地建设方案为例,在实际运行中探索适合"现代学徒制"实训基地的的具体操作措施,以及管理、实训的一些实例,具有一定的参考价值。  相似文献   

一个大豆矮秆性状基因的分子标记定位     

袁鹰  王程  韩俊  张鑫  仝潇  冯凡育  谢皓 《北京农学院学报》2019,34(3)

  相似文献   

农村城镇化背景下土地流转问题的研究及对策探析     

张鑫 《农家参谋》2019,(1)

<正>被称为"第三次土地革命"的土地流转已经开始,规模和形式的多样化在不断影响城镇人的生活,在加快城镇化进程的过程中,农村人口也在不断向城镇大规模转移,两者相互作用使得农村土地流转进一步加快。本文着重阐述加强新型城镇化建设和推动农村土地流转之间的密切联系,分析当下农村土地流转的现状和存在的问题,同时提出相应的建议,深入分析了新型城镇化建设与农村土地流转之间的紧密联系,对我国实现城乡  相似文献   

基于稳定同位素和贝叶斯模型的引黄灌区地下水硝酸盐污染源解析   总被引：5，自引：0，他引：5  

张妍  张秋英  李发东  张鑫  毕直磊  张强 《中国生态农业学报》2019,27(3):484-493

地下水硝酸盐（NO₃^-）污染已经成为全球严重的水环境问题之一,由于饮用水中高含量NO₃^-会转化成亚硝酸盐而增加各种疾病和癌症风险,其来源的确定对于NO₃^-污染的预防和控制非常重要。本文以黄河下游第二大灌区——潘庄灌区为例,首次采用NO₃^-的氮氧稳定同位素结合贝叶斯模型追溯地下水NO₃^-的来源并量化各种来源的贡献比例。结果表明,地下水NO₃^-含量分布在0.1~197.0 mg·L^-1,平均值为34.2 mg·L^-1。与《生活饮用水卫生标准》中规定的地下水NO₃^-最大含量[20 mg（N）·L^-1,相当于NO₃^-含量90 mg·L^-1]相比,有10%的样品NO₃^-含量超标。井深<30 m、30~60 m和>60 m的地下水NO₃^-平均含量分别为25.9 mg·L^-1、39.7 mg·L^-1和20.1 mg·L^-1。空间上,宁津县、武城县、平原县和禹城市有大片区域地下水NO₃^-含量较高。地下水NO₃^-的δ¹⁵N组成范围为0.72‰~23.93‰,平均值为11.62‰;δ¹⁸O组成范围为0.49‰~22.50‰,平均值为8.46‰。同位素结果表明粪便和污水、农业化肥是地下水中NO₃^-的主要污染来源。这反映了人类活动是引起地下水NO₃^-污染的主要原因。贝叶斯模型结果显示,粪便和污水对潘庄灌区地下水中NO₃^-平均贡献率高达56.2%,化肥的平均贡献率为19.3%,大气降水和土壤的平均贡献率分别为6.2%和12.3%。由于污水、粪便和化肥是地下水中NO₃^-的主要来源,为保护和改善研究区地下水水质,建议加强污水管道建设,强化畜禽粪便的管理以及提高化肥利用效率。  相似文献