转基因大豆中外源基因g10evo-epsps 的qPCR检测方法的建立和验证     

徐晓丽  纪艺  陈笑芸  王鹏飞  缪青梅  来勇敏  徐俊锋 《中国油料作物学报》2021,43(1):110

耐除草剂基因g10evo-epsps 在我国转基因农作物研发中常常被用作目标性状基因或筛选标记基因，因此 可作为转基因成分检测的重要筛查基因，但目前缺少相应的检测方法。本研究旨在建立g10evo-epsps 基因特异性 的实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法，从而为转基因大豆的监测提供一种稳定可靠的方法体系。本研究基于转基 因大豆中的g10evo-epsps 基因序列设计了qPCR检测引物和探针，并对检测方法的特异性、灵敏度、准确度和精确性 进行了实验室内验证。结果显示，建立的g10evo-epspsqPCR检测方法能够特异性检测转基因大豆ZUTS-33中的 g10evo-epsps 目的基因；标准曲线分析表明，3次重复试验的扩增效率在90%以上，R2 均大于0.99；方法的检测限 （LOD）为不高于8拷贝，定量限（LOQ）推测为16拷贝；对含量为4.5%、2%、0.5%、0.09% 和0.045% 的转基因大豆 ZUTS-33基因组DNA进行准确度分析，发现该方法测定的平均值和预期值之间的偏差为0.00%~11.11%，3次重复 试验的RSDr为2.30%~17.10%。结果表明本研究建立的g10evo-epsps qPCR检测方法能够满足转基因大豆筛查检测 的要求，为转基因大豆监管和标识提供技术支撑。  相似文献   

金属络合剂酸性络蓝K在TNOS-LAMP可视化检测体系中的应用     

汪小福  付振芳  李玥莹  陈笑芸  彭城  徐晓丽  魏巍  徐俊锋 《农业生物技术学报》2016,(9):1374-1383

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种快速、灵敏度高和特异性强的等温核酸扩增技术,已被广泛用于各领域.与此同时,高灵敏度也使得扩增时极易出现交叉污染,而利用闭管检测技术能有效降低其污染机率.本研究引入了一种新型的金属指示剂-酸性络蓝K (acid chrome blueK,ACBK),建立了闭管LAMP扩增和检测结果可视化检测技术.首先,本研究分别在LAMP 扩增的起始体系中,先后分别测试ACBK与缓冲液、dNTPs、引物和Mg2+等组分反应,确定了含有ACBK的LAMP体系中的颜色变化由Mg2+决定,化学方法也进一步验证了这一结论.随后,对LAMP检测体系中的ACBK指示剂的浓度及Mg2+的浓度进行了选择和优化,最终选定25 μL扩增体系中ACBK的检测浓度为:2 μL 0.04％ ACBK,Mg2+浓度为:6 mmol/L.以胭脂碱合成酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene,TNOS)为靶基因,建立了TNOS-ACBK-LAMP检测体系.建立的体系的检测灵敏度针对转基因水稻的检测限为100拷贝,在分别含有50 ng的水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine max)、油菜(Brassica napus)和玉米(Zea mays)基因组中能检测出0.1％的转基因含量.同时,利用不同转化事件及不同作物的转基因材料验证了其检测特异性,结果表明,构建的TNOS-ACBK-LAMP的检测系统具有很强的检测特异性.最终,将该检测体系成功用于对实际玉米样品转基因成分的检测,检测结果既可以裸眼直接判断也可以借助紫外可见光谱分析.该方法的建立为可以加快转基因成分检测的速度,同时也为等温扩增方法的判断提供了新的思路.  相似文献   

豹纹鳃棘鲈致病性哈维氏弧菌的分离鉴定与系统发育分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐晓丽  邵蓬  李灏  任涵玮  张勤 《华中农业大学学报》2014,33(4):112-118

为探明养殖豹纹鳃棘鲈体表溃疡症的病因,从患病豹纹鳃棘鲈血液及内脏、体表溃疡处分离到2株优势菌,其中编号为1031的菌株经人工感染证实能够引起被感染鱼的死亡,为引起该豹纹鳃棘鲈溃疡病的病原菌。采用形态学、生理生化特性鉴定,结果表明菌株1031与弧菌属的基本特征相符,分别基于16SrDNA序列及热激蛋白60基因(hsp60)序列构建的系统发育树将菌株1031与哈维氏弧菌聚为一支,置信度均为97%,以1031为模板特异性扩增哈维氏弧菌toxR基因,也得到了预期382bp的核酸片段。综合以上结果,最终确定此次豹纹鳃棘鲈体表溃疡症的病原为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。药敏结果显示,该菌株仅对氟苯尼考、庆大霉素(120μg)、菌必治敏感,对诺氟沙星、恩诺沙星、阿奇霉素、强力霉素等均不敏感。  相似文献   

红尾皇冠鱼无乳链球菌病LAMP检测方法的建立与应用     

姚学良  徐晓丽  李贺密  包海岩  任涵玮  郑艳坤 《大连海洋大学学报》2014,(6)

以cfb基因保守序列的6个区域设计4条特异性引物,利用链置换DNA聚合酶( BstDNA polymer：ase)在恒温(65℃)下保温40 min,建立了无乳链球菌 Streptococcus agalactiae 的 LAMP 技术。建立的LAMP方法能够特异性地检测无乳链球菌,检测灵敏度为3·7×101~3·7×102 cfu/mL,反应前加入显色剂钙黄绿素避免二次污染。现场应用中采用FTA卡采集红尾皇冠鱼Aequidens rivulatus病鱼肝脏组织病原菌,操作简便、快捷。研究表明,针对无乳链球菌cfb基因建立的LAMP检测方法具有较高的特异性及稳定性,尤其是具有快速、简便、成本低等优点,可用于无乳链球菌的野外现场快速检测。  相似文献   

番茄灰霉病的发生与防治     

张乐森  徐晓丽  孟凡山 《北京农业》2007,(11):12-12

近几年来。随着蔬菜栽培面积的不断扩大，尤其是保护地蔬菜栽培面积不断扩大的同时，蔬菜灰霉病的发生也更为普遍，蔓延速度更为加快，危害更为猖獗。 番茄灰霉病就是蔬菜灰霉病中的一种重要病害，一般可造成番茄减产20％。30％，严重时可高达50％以上，而且在蔬菜产区有发生越来越重的趋势，严重影响番茄的产量和品质。  相似文献   

苹果锈果病韵发生与防治     

张乐森  徐晓丽  孟凡山 《农村实用技术》2007,(11):42-42

苹果锈果病俗称花脸病，山东滨州市各苹果产区均有发生，一般多为零星发生，有的果园病株率高达10％以上，并有扩展蔓延的趋势。[第一段]  相似文献   

淡水鱼中铅含量的测定     

张天婧  韩雪芹  姚丹  曲祖乙  寇叙  徐晓丽  唐峰 《安徽农业科学》2009,(2)

[目的]测定锦州市淡水鱼中铅的含量。[方法]使用石墨炉原子吸收光谱法测定淡水鱼中铅的含量。[结果]结果表明,白鱼、鲫鱼、鲇鱼、花鲢和鲤鱼的含量未超标;黑鱼、白鲢中铅的含量超标。[结论]该研究为食品质量控制提供依据。  相似文献   

绿色农业种植技术推广存在的问题与策略     

徐晓丽 《农民致富之友》2018,(17)

正近年来,我国经济增长速度逐渐加快,农业的良好发展得到有效促进。由于我国居民的生活水平不断提升,人们对食品安全问题给予了越来越多的重视。绿色食品的出现消除了人们对食品安全的担忧,也满足了人们日益增长的安全饮食需求。绿色农业种植是绿色食品产生的重要环节,人们对绿色食品的迫切需求使绿色农业种植技术的推广势在必行。但在实际推广绿色农业种植技术时,常常由于多种原因致使推广过程存在问题,部分不利于绿色农业种植技术  相似文献   

天津地区南美白对虾产业发展调查与分析     

钟文慧  包海岩  姚学良  徐晓丽  郑艳坤  丁子元  杨超敬 《河北渔业》2016,(3)

正多年来,南美白对虾养殖作为天津地区渔业发展的主导产业,从养殖规模占比、渔业经济效益产出、渔民增收途径等方面都占据着十分重要的地位。2014年,天津市南美白对虾主套养面积达2万多hm2,超过全市水产养殖面积的一半,是除大宗淡水鱼以外的养殖优势品种。但由于近些年受到种质退化、养殖病害频发、产出率降低的影响,我市乃至全国对虾产业都遇到了极大的问题和挑战。1南美白对虾养殖总体情况目前,天津市南美白对虾养殖区域涉及除蓟  相似文献   

豹纹鳃棘鲈类结节症病原的分离鉴定     

徐晓丽  尤宏争  姚学良  李灏  李军  包海岩 《水产科学》2019,(2):254-259

为查明养殖豹纹鳃棘鲈类结节症的病因,自患病豹纹鳃棘鲈内脏中分离到1株优势菌株061101,人工感染试验证实,该菌具有强毒力,能够引起被感染鱼内脏出现白色结节并死亡,为引起此次豹纹鳃棘鲈类结节症的病原菌。采用形态学、生化特性测定对菌株061101进行鉴定,同时采用细菌16S rRNA通用引物进行PCR扩增得到该菌的16S rRNA基因序列,测序后比对,构建系统发育树。试验结果表明,菌株061101与发光杆菌属中的美人鱼发光杆菌杀鱼亚种基本特征相符;基于16S rRNA基因序列构建的系统发育树将菌株061101与美人鱼发光杆菌杀鱼亚种聚为一支,置信度达100%。据此确定,此次豹纹鳃棘鲈类结节症的病原为美人鱼发光杆菌杀鱼亚种。药敏结果显示,该菌株仅对链霉素(300μg/片)、庆大霉素(120μg/片)敏感,对多黏菌素B、阿洛西林等中度敏感,对氟苯尼考、恩诺沙星、强力霉素等均耐药。  相似文献