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利用抑制性消减杂交技术分离草莓抗炭疽病相关基因 总被引：1，自引：1，他引：0
利用抑制性消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）,比较接种炭疽病菌与未接菌草莓之间的基因表达差异,筛选抗草莓炭疽病菌的差异表达基因片段,为草莓抗炭疽病遗传育种提供理论依据。分别提取接种草莓与未接种草莓叶片的总RNA,分离mRNA,逆转录成cDNA,利用Rsa I进行酶切,然后以接种叶片酶切cDNA为试验方（tester）,以未接菌草莓叶片酶切cDNA为驱动方（driver）,构建了草莓抗炭疽病基因消减文库。菌落PCR结果表明,插入片段大部分在100~1000 bp之间,文库质量好。对文库中1500个阳性克隆进行测序,共得到了1377个有效的ESTs序列。利用NCBI数据库进行Blast同源性比较发现,这些ESTs可能与胁迫反应、信号转导、蛋白合成、蛋白相互作用、物质代谢、跨膜通道、转录因子、金属转运及未知或假定蛋白等有关,ESTs序列的获得为后续草莓抗炭疽病相关基因的克隆、表达和转基因研究提供了参考。 相似文献
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为了建立一种特异、灵敏、快速检测草莓镶脉病毒（Strawberry vein banding virus,SVBV）的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,根据已有的检测SVBV的引物信息,合成引物,对不同草莓品种进行PCR扩增。经过克隆、测序及序列比对得到了感染SVBV的阳性植株,利用此植株PCR扩增产物构建重组质粒作为标准品,优化了PCR反应体系,标准曲线的循环阈值（Ct值）与模板浓度有良好的线性关系（R2=0.999 1）;进行了灵敏度和重复性试验,敏感性可达到101拷贝·μL-1,约为普通PCR的1 000倍,重复性好;并与常规PCR方法进行了比较,成功建立了检测SVBV的实时荧光定量PCR法。用该方法检测了部分草莓品种的DNA样品,结果表明,大部分植株都带有SVBV。该方法具有很高的灵敏性和重复性,可用来快速检测草莓植株是否感染SVBV。 相似文献
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为明确氟酰羟·咯菌腈对草莓灰霉病的防治效果,以啶菌噁唑、嘧环·咯菌腈、唑醚·氟酰胺为对照药剂,开展田间试验。灰霉病始发期,4种杀菌剂各按一定浓度喷施,隔7 d二次防治。结果表明,400 g·L-1氟酰羟·咯菌腈悬浮剂对草莓灰霉病防治效果佳,随浓度降低,防治效果下降,差异显著,建议田间施用浓度为750倍～1 000倍;25%啶菌噁唑悬浮剂750倍防治效果与400 g·L-1氟酰羟·咯菌腈悬浮剂1 000倍相近,差异不显著;62%嘧环·咯菌腈悬浮剂与42.4%唑醚·氟酰胺悬浮剂防治效果较差。因此,可用400 g·L-1氟酰羟·咯菌腈悬浮剂,与25%啶菌噁唑悬浮剂轮换防治草莓灰霉病,以延缓抗药性的产生。 相似文献
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为了明确蔓枯病对厚皮甜瓜植株早衰的影响, 以抗性水平不同的厚皮甜瓜‘玉菇’和‘夏蜜’为试材, 利用蔓枯病菌孢子悬浮液对甜瓜进行接种, 在接种后测定了不同节位叶片内SOD、CAT和POD的活性变化以及Chl和Pr的含量。试验结果表明, 蔓枯病加速了厚皮甜瓜植株的早衰, 当植株在受到蔓枯病菌侵染后, 叶片中的SOD和CAT活性均迅速上升, 而后逐渐下降, POD活性一直呈上升趋势,‘夏蜜’的SOD和CAT活性均高于‘玉菇’,而‘玉菇’的POD活性高于‘夏蜜’。‘夏蜜’的Chl和Pr的含量均高于‘玉菇’, 在接种后都呈下降趋势, 但‘夏蜜’比‘玉菇’下降的慢。不同节位叶片在受到病菌侵染后, 早衰程度也有所差异, 节位低的叶片受蔓枯病菌的影响较大, 衰老也快。 相似文献