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通过基因合成构建了脱水反应元件(dehydration-responsive element,DRE)酵母表达载体,通过同源重组,利用SD-His-Ura平皿筛选获得了含有pHis-1-DRE和pLacZi-DRE双重报告子的酵母即得DRE报告子。建立小叶杨(Populus simonii)干旱模型,提取RNA,构建小叶杨cDNA AD融合表达文库,通过酵母单杂交的方法,用DRE报告子对小叶杨cDNAAD融合表达文库进行了筛选,得到了2个阳性克隆。结果表明,所构建的DER报告子被激活,可用于小叶杨DER转录因子的克隆。 相似文献
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板栗是河北省迁西县重要传统出口商品，为提高山区“围山转”工程栽植板栗成活率，今年我们苗圃容器有板栗苗10万株，收到较好效果，现将技术过程简述如下。1种子精选与催芽对板栗果实进行精细检选，剔除风干、破损、霉烂、虫蛀的板栗，选择色泽鲜艳、饱满的果实为种子。3月初用1份种子与3份湿沙混均，放置温床中催芽，温床设在高操向阳处，挖东西方向的沟，沟深30cm、宽1m，长视种子数量而定，使沟沿呈北高南低倾斜，以利采集阳光，提高床温，床内铺25cm左右厚的混入湿沙的种子，上面再盖纯湿沙3cm左右，然后登上塑料膜，四周用上压严，3～… 相似文献
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运用qRT-PCR技术,检测日本落叶松种子萌发过程中的5个阶段——干种子 (萌发培养0 d)、吸胀(1 d)、萌动(5 d)、胚根外露(9 d)和子叶展开(28 d),miR156、miR159和miR160等18个miRNAs在其种胚内的表达模式,并对其目标基因进行生物信息学分析,探讨miRNA在针叶林木种子萌发过程中的基因表达模式。结果表明:(1)从整个萌发过程分析,18个miRNAs的表达水平皆以干种子阶段最高,吸胀和萌动阶段迅速下降;干种子阶段的表达水平分别是吸胀、萌动、胚根外露和子叶展开阶段的4.8 43.5、17.2 1 000.0、45.5 1 000.0、62.5 1 862.2倍。(2)从各个阶段分析,miR894的表达水平在5个阶段均最高,miR408均最低;其余16个miRNAs在5个阶段内的表达水平各有变化,综合排序结果从高到低依次为:miR951、miR950、miR156、miR159、miR396、miR398、miR390、miR160、miR947、miR165、miR319、miR162、miR171、miR397、miR395和miR172。(3)miRNA目标基因预测结果显示:目标基因主要是ATP/DNA结合蛋白、ARF等转录因子、质膜和核糖体等细胞组分及MAP等激酶活性蛋白等蛋白编码基因。(4)miR160对其目标基因JR160237 具有切割作用,切割位点发生在miR160与目标基因互补结合位点第10与11位碱基之间。JR160237在种子吸胀阶段表达水平迅速升高,在萌动、胚根外露和成苗阶段有所回落。 相似文献
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[目的]研究并了解中间锦鸡儿CiDR1基因功能及其对干旱胁迫的响应,为抗性育种提供候选基因。[方法]通过RACE技术从中间锦鸡儿中克隆CiDR1基因的c DNA全长,利用生物信息学分析软件对其基因结构及功能进行分析和预测。再通过qRT-PCR技术对干旱胁迫后的幼苗中的CiDR1表达模式进行研究。[结果]从中间锦鸡儿中克隆到CiDR1基因的c DNA全长共计4 297 bp,Gen Bank登录号为KP277100。生物信息学分析表明,预测的CiDR1蛋白序列中含有1 243个氨基酸残基,具有抗病基因特征结构域TIR、NB-ARC、LRR等,其等电点为6.35,不稳定指数为42.91,不具备信号肽,为非分泌蛋白,定位于细胞质中。定量PCR检测发现,CiDR1基因在幼年期的茎中表达量较低,在成年期的叶片中表达量较高;在干旱胁迫处理后的幼苗中,CiDR1表达水平有明显下降,表明该基因的表达受干旱抑制,可能与中间锦鸡儿适应干旱相关。[结论]中间锦鸡儿在干旱胁迫后其根、茎和叶中CiDR1的表达均明显下降,表明CiDR1的表达受干旱抑制,可能与中间锦鸡儿适应干旱相关,进一步研究发现CiDR1在根、茎、叶中的表达水平可能受发育阶段调控。 相似文献
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红皮云杉花粉母细胞减数分裂和花粉发育的研究 总被引：2，自引：1，他引：1
本研究采用压片法,观察研究了红皮云杉花粉母细胞（PMC）减数分裂和花粉发育的完整过程。证实红皮云杉PMC减数分裂始于每年春季,持续时间较长,约2～3个月。减数分裂中期二价体构型以两臂至少发生两次交换的环形二价体居多,很少观察到棒状二价体。减数分裂粗线期结束之后,经历明显的弥散双线期阶段。胞质分裂发生在第两次减数分裂结束之后,属于同时型分裂方式,形成的四分体主要是四面体形的。四分体的构型还受到第二次减数分裂中期纺锤体定向的影响,其中纺锤体垂直排列形成的四分体是四面体形的,而纺锤体平行排列形成的四分体是四角形的。四分体在胼胝酶的作用下,释放出单核小孢子。红皮云杉从单核小孢子发育为成熟花粉,经过3次有丝分裂,形成4细胞的成熟花粉,包括2个原叶细胞,1个生殖细胞和1个管细胞。云杉属花粉的发育与松属基本相同,成熟花粉均由4个细胞组成。 相似文献
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本研究针对日本落叶松(Larix kaempferi (Lamb.) Carr.)体细胞胚胎发育过程中原胚团时期到胚胎成熟时期、种子萌发过程、植株幼年生长阶段和成年生长阶段等生长发育过程中的31份材料,应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术,分析了12个持家基因(ACT 4、APm、Chc、Gapc、RPL1、RPL2、EF1、EF2、eIF、E3UL、UBQ和UPL2) 在这31份材料中的表达情况。经geNorm和NormFinder两种分析软件对这12个持家基因进行表达稳定性分析,结果表明:APm在不同器官、体细胞胚胎发育和种子萌发过程中表达均最为稳定;EF1 在不同生长年龄植株的顶梢中表达最为稳定;eIF在不同年龄植株的针叶中表达最为稳定。分析结果表明,针对不同的研究材料和发育阶段应选择适合的持家基因做内参基因使用。进行基因表达细微差异研究时,可根据需要使用2个或2个以上内参组合。 相似文献
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