双抗夹心ELISA方法检测转cry8Ca基因烟草的杀虫蛋白     

王容燕  董建臻  王金耀  郎志宏  曹伟平  宋福平  杜立新  宋健  冯书亮 《勤云标准版测试》2009,29(5)

为了检测抗金龟子幼虫的转cry8Ca基因烟草杀虫蛋白的含量,对双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测体系中的反应条件进行了优化.采用方阵法对血清抗体的反应浓度进行筛选,对提取液、包被液、封闭液和底物作用时间进行比较和优选,结果确定多克隆抗体浓度为1:3200.酶标结合物浓度为1:400,pH 9.6碳酸缓冲液提取,pH7.4磷酸缓冲液包被,0.5%明胶.PBST封闭,TMB底物作用15 min为最佳双抗夹心ELISA检测条件.通过这一检测体系,对转cry8Ca基因烟草植株进行检测,S12株系的Cry8C蛋白含量最高,每克鲜重含有12.683～14.461 Pg,占总蛋白量的0.052%-0.062%.  相似文献   

对苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株增效剂的初步筛选   总被引：2，自引：0，他引：2  

宋健  冯书亮  王容燕  王金耀  曹伟平  杜立新 《华北农学报》2008,23(Z1)

测定了19种化合物包括无机盐、有机物等,在添加浓度为0.1%,0.2%,0.5%和0.8%的剂量下对HBF-1晶体粉剂的增效作用。采用浸饲料饲喂法的方法进行试验,初筛结果表明:无机类:MgSO4(0.5%,0.8%),CaCl2(0.5%,0.8%),MgCl2(0.5%,0.8%)等三种物质有显著的增效作用;有机类:柠檬酸(0.2%,0.5%,0.8%)对HBF-1菌株有明显增效作用。  相似文献   

河北苏云金杆菌的分布与不同土壤类型及不同植被种类的关系   总被引：1，自引：0，他引：1  

范秀华  冯书亮 《中国生物防治》1996,12(2):69-71

从河北省６个生态区１４８个县（市）采集土样４６３７份，分离到苏云金杆菌２４１株。结果表明苏云金杆菌在不同土壤类型及不同植被条件下的分布有很大差异。草甸褐土中分出率最高，为１４％；而粟钙土、湿潮土等分出率较低，仅为２％左右；在风沙土和盐土中未分离到苏云金杆菌。  相似文献   

苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株对铜绿丽金龟和 黄褐丽金龟幼虫生长发育及取食的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

宋健  王金耀  王容燕  冯书亮  曹伟平  杜立新  张海剑  张杰  宋福平 《农药学学报》2006,8(2):134-138

研究了苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis HBF-1菌株对10日龄铜绿丽金龟Anomala corpulenta和黄褐丽金龟A.exoleta幼虫存活率、拒食、抑制生长及取食选择性的影响。结果表明,随着感染剂量的增大和感染时间的延长,两种金龟子幼虫的存活率均下降,对铜绿丽金龟幼虫的拒食作用和生长抑制作用增强,使该幼虫对饲料的选择性增强。感染7 d时,对黄褐丽金龟幼虫的LC50值为64.16 μg/g,14 d时下降到13.98 μg/g,对铜绿丽金龟幼虫的LC50值则由79.69下降到19.14 μg/g。当菌剂浓度为10 μg/g、感染7 d时,HBF-1菌株对铜绿丽金龟幼虫的拒食率和生长抑制率分别为4.74%和9.84%,14 d时分别为30.75%和73.87%;当菌剂浓度达到160 μg/g、感染7 d时,对铜绿丽金龟幼虫的拒食率和生长抑制率分别为39.01%和83.61%,14 d时分别为86.10%和97.75%。可见高浓度菌剂对铜绿丽金龟幼虫有一定的拒食作用。  相似文献   

苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株防治金龟科幼虫的效果评价     

冯书亮  王容燕  王金耀  杜立新  黄大昉 《植物保护学报》2006,33(4):417-422

以我国筛选出的对金龟科幼虫具有杀虫活性的HBF-1菌株为供试菌株，采用菌悬液与含有土豆丝的土壤混合饲喂幼虫的方法，测定了HBF-1菌株孢晶粉剂对华北地区主要金龟子幼虫的毒力，其敏感性依次为四纹丽金龟Popillia quadriguttata、黄褐丽金龟Anomala exoleta、蒙古丽全龟A．mongolica、铜绿丽金龟A．corpulenta和苹毛丽金龟Proagopertha lucidula，LC50为3．104、18．987、30．924、34．713和55．995μg／s土。HBF-1菌株悬浮剂防治花生田金龟子幼虫的田间小区试验结果表明，50倍液的虫口减退率为71．4％～75．4％，保果效果为58．7％～72．9％。在花生产量比较试验中，HBF-1菌株悬浮剂50倍液处理区比空白对照区的产量增加363．0—903．0kg／hm^2。HBF-1菌株悬浮剂施入草坪后可免受阳光中紫外线的照射，杀虫活性保持较长时间；经调查，HBF-1制剂在土壤中经过120天后仍保持杀虫活性。  相似文献   

几株高效苏云金杆菌菌株对玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎的毒力测定   总被引：6，自引：2，他引：6  

冯书亮  付韵琴  范秀华  王容燕  邢建民  胡明峻 《中国生物防治》1995,(1)

本文以玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎为供试昆虫，对筛选出的７株高效苏云金杆菌菌株的孢晶制剂进行了毒力测定。以ＬＣ５０为衡量各菌株的毒效指标，属血清型Ｈ６的“Ｇ０２”菌株对上述４种供试昆虫的毒力最高，属血清型Ｈ３ａ３ｂ的“８０－１”菌株对棉铃虫和粘虫的毒力也高于“ＨＤ－１”菌株。这一研究结果为今后生产高效的苏云金杆菌制剂及生产菌株的轮换提供了后备菌株  相似文献   

大茂山地区苏云金芽孢杆菌分布与多样性研究     

宋健杜立新  王容燕魏利民  曹伟平宋健王金耀  冯书亮 《中国农学通报》2011,27(1):166-169

为了对大茂山地区苏云金芽孢杆菌的分布与多样性进行研究,本试验利用温度-抗生素筛选法从大茂山不同海拔地区采集的784份土壤样品中分离得到76株苏云金芽孢杆菌,发现在海拔900~1200 m之间为土壤最佳采集区域。对这76株菌株进行光学显微观察,发现其伴孢晶体呈现球形、菱形、方形、不规则形等多种形态;PCR-RFLP对分离获得的76株菌株基因鉴定发现,主要包含cry1、cry2等7种基因类型,其中有28株未鉴定出基因型;其SDS-PAGE晶体蛋白分析发现,这些菌株主要表达130 kDa、97 kDa、66 kDa和45 kDa蛋白。对铜绿丽金龟进行生物活性测定,17株具有高毒力的菌株中的16株含有cry8Ca基因,另一株未鉴定出已有基因型。从晶体形态、基因类型、SDS-PAGE检测以及生物活性方面均说明苏云金芽孢杆菌在河北省大茂山地区的分布具有良好的多样性。  相似文献   

苏云金芽孢杆菌的研究发展史与"十一五"立项思考   总被引：1，自引：0，他引：1  

冯书亮 《河北农业科学》2005,9(4):80-85

论述了苏云金杆菌研究发展史以及主要研究领域和今后的研究热点,并对“十一五”立项进行了探讨。  相似文献   

球孢白僵菌HFW-05几丁质酶基因的克隆与序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

甄伟  杜立新  曹伟平  王容燕  宋健  王金耀  冯书亮 《华北农学报》2010,25(1)

通过对粉虱、小菜蛾高效的球孢白僵菌HFW-05几丁质酶基因的克隆及序列分析,旨在从分子水平上了解HFW-05菌株的几丁质酶特性。根据已发表的几丁质酶基因序列(EU828354)设计几丁质酶基因全长引物,扩增HF-WBbchit1全长基因,与大肠杆菌(Escherichia coli)克隆载体pMD19-T连接获得含有HFWBbchit1全长基因的重组质粒pMDchit1并测序。该基因的编码区包括1 047 bp,编码了348个氨基酸,分子量约为36.795 kDa,进行同源性比较分析结果表明:其基因序列与球孢白僵菌菌株NCIM1216几丁质酶基因(EU828354)和球孢白僵菌菌株Bb0062几丁质酶基因(AY145440)的核苷酸同源性最高,同源性达到98%。氨基酸序列与球孢白僵菌菌株Bb0062几丁质酶(AAN41259)同源性达到99%。  相似文献   

苏云金杆菌毒力指示昆虫玉米暝与棉铃虫,粘虫,黄地老虎的毒力相关性…     

冯书亮  付韵琴 《华北农学报》1995,10(2):91-94

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