柑橘黄龙病防控研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

吴越  周常勇 《中国果树》2013,(4)

柑橘黄龙病菌属于难培养韧皮部杆菌,由其引起的柑橘黄龙病是柑橘产业上的毁灭性病害,但目前针对该病还缺乏有效的防控措施.结合国内外最新研究现状,综述了柑橘黄龙病防控研究进展,并进行了展望.  相似文献   

烟草疫霉拮抗菌株P 72 10的鉴定及其拮抗代谢 产物 初步分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

董国菊  李文英  刘翠平  周常勇  肖崇刚 《植物病理学报》2012,42(3):297-305

 为探讨烟草根际生防细菌的生防机制,从重庆地区连作烟田健康烟株根际土壤中分离筛选到1株对烟草疫霉具有较强拮抗作用和对黑胫病具有良好防效的细菌菌株P-72-10。根据培养性状、形态特征、生理生化特性、基因组DNA的(G+C)mol%含量测定以及16S rDNA基因序列分析确定该菌株的分类地位。该菌株菌落乳白色,能产生水溶性荧光色素,革兰氏染色反应阴性,菌体杆状、大小(8.1~16.2)μm×(1.8~4.8)μm,单端生鞭毛,不形成芽孢。The BIOLOG GN2 结果显示该菌株属于假单胞菌属Pseudomonas。该菌株基因组DNA的(G+C)mol%含量为 60.72 mol%。16S rDNA基因序列分析显示该菌株与假单胞菌属荧光假单胞杆菌多个菌株的序列同源性达到99%,GenBank上的登录号为：HQ888871。结合其形态特征和生理生化特性,将菌株P-72-10鉴定为荧光假单胞杆菌P. fluorescens。平板检测拮抗代谢产物结果表明：该菌株具有分解纤维素、蛋白质和结合Fe ³⁺的能力,但不能分解几丁质。  相似文献   

烟草曲茎病毒/DNAβ病害复合体研究进展   总被引：1，自引：1，他引：0  

青玲  任芳  谭万忠  周常勇 《植物保护学报》2009,36(5):466-472

烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus, TbCSV)是从云南烟草上分离的双生病毒科Geminiviridae菜豆金色花叶病毒属Begomovirus的一个新种,在番茄和烟草上可引起严重的曲叶病。该病毒与伴随卫星DNAβ形成的病害复合体在病毒致病性、DNAβ与辅助病毒的伴随关系及调控症状的作用等方面均与其它双生病毒病害复合体不同,对其进化起源的研究表明,TbCSV在进化中介于需要卫星的双生病毒和真正的单组分双生病毒之间,因而针对TbCSV病害复合体的研究对于解读双生病毒的起源和遗传进化机制具有重要意义。作者从TbCSV病害复合体的发生危害、基因组结构、伴随小分子DNA、各DNA组分互作以及起源进化等方面综述了该病毒病害复合体的研究进展。  相似文献   

应用实时荧光RT-PCR检测柑橘黄化脉明病毒     

陈洪明  周彦  王雪峰  周常勇  杨秀燕  李中安 《园艺学报》2016,43(1):168-174

为更快速准确检测柑橘黄化脉明病毒（Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）,根据病毒外壳蛋白基因的保守序列设计特异性引物,通过体系优化得到最佳反应条件,建立基于SYBR GreenⅠ的CYVCV实时荧光RT-PCR检测方法。该方法可特异性检测CYVCV,而测试的柑橘衰退病毒、碎叶病毒等5种柑橘病毒均不能检测出。灵敏度较普通RT-PCR提高了100倍,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率和相关性系数分别为102%和0.999。对田间样品的检测结果表明,建立的实时荧光RT-PCR适用于检测不同柑橘品种中CYVCV的含量。  相似文献   

应用铜制剂防治柑橘溃疡病的研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

姚廷山  周彦  周常勇 《园艺学报》2016,43(9):1711-1719

对防治柑橘溃疡病的主要药剂--铜制剂的种类、施用方法、作用机理以及其不足之处进行总结,综述了柑橘溃疡病菌（Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc）抗铜性产生及抗铜性的分子机理研究进展,并探讨柑橘溃疡病菌产生铜抗性的防控方法。  相似文献   

柑橘品种对不同基因型柑橘衰退病毒的抑制及变异的影响     

唐萌  金鑫  周常勇  李中安  陶珍珍  周彦 《园艺学报》2016,43(1):55-60

为研究不同柑橘品种对柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）不同基因型的抑制效果,将T36、T30、VT和T3等基因型CTV的毒源分别接种于‘赛蒙斯’甜橙、‘邓肯’葡萄柚、‘墨西哥莱檬’和‘强徳勒柚’,运用RT-qPCR技术检测被接种植株中CTV复制水平的差异。结果表明,‘墨西哥莱檬’最适于CTV各基因型的复制。‘邓肯’葡萄柚中VT、T3和T36基因型的复制水平最低。4种柑橘品种对T36基因型CTV都有明显的抑制作用。通过对CTV的CP基因进行分析发现,VT基因型CTV在‘赛蒙斯’甜橙中发生了较大变异。  相似文献   

病毒诱导的基因沉默（VIGS）研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

宋震  李中安  周常勇 《园艺学报》2014,41(9):1885-1894

病毒诱导的基因沉默（Virus-induced gene silencing,VIGS）是一种RNA 介导的植物抗病毒机制,近年来已被用作研究植物基因功能的反向遗传学手段。与转基因、基因敲除、反义抑制等基因功能研究方法相比,VIGS 技术研究周期短,不需要遗传转化,具有低成本、高通量等优势。因此,VIGS已被广泛应用于植物抗病抗逆、生长发育以及代谢调控等生理途径相关基因的功能鉴定。综述了VIGS 的机制、技术发展、沉默效率的影响因素及其在植物基因功能鉴定中的应用,并对VIGS 在植物性状改良及植物保护方面的应用前景进行了展望。  相似文献   

应用多重PCR技术同步检测柑橘4种重要嫁接传播病原     

刘金香  周常勇  唐科志  李玲娣  刘科宏  田晓  李中安 《植物病理学报》2014,44(3):295-301

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV),柑橘碎叶病毒(Citrus tatter\|leaf virus,CTLV),柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和柑橘黄龙病(Huanglongbing, HLB)亚洲种病原(Candidatus liberobacter asiaticus)是重要的柑橘嫁接传播病原。本文建立了同时检测HLB病菌、CTV、CEVd 和CTLV 4种柑橘嫁接病原的一步法、双温多重PCR检测技术体系,同时在体系中设置内参基因。应用该体系快速评价了4种嫁接传播病原在田间侵染情况,结果表明28个田间样品CTV、CEVd、CTLV和HLB感染率分别为89.3 %、17.9 %、10.7 %和28.6 %,接近半数样品为混合感染。并且将该方法应用于快速评价茎尖嫁接苗病毒的脱除情况。  相似文献   

两种柑橘新病毒双重RT-PCR检测体系的建立及应用     

周彦  陈洪明  王雪峰  唐杰  金鑫  周常勇 《植物保护学报》2017,44(4):699-700

正柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)和柑橘褪绿矮化病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是2种最近在我国发生的柑橘病毒(Chen et al.,2014;Guo et al.,2015),主要通过带病苗木和昆虫传播(陈洪明等,2015),对我国柑橘产业造成了严重损失。目前尚无防治CYVCV和CCDaV的药剂,种植无病毒苗木和加强病害检测是重要的防治途径。当前虽已建立了CYVCV和CCDaV的RT-PCR检测方法(Loconsole et al.,2012;陈洪明等,2015),但鉴于田间可能存在  相似文献   

利用酵母同源重组系统快速构建柑橘叶斑驳病毒的侵染性克隆   总被引：1，自引：1，他引：0  

崔甜甜  晏建红  宾羽  李中安  周常勇  宋震 《中国农业科学》2018,51(9):1695-1705

【目的】构建柑橘叶斑驳病毒（Citrus leaf blotch virus,CLBV）中国分离株的侵染性克隆,为从分子水平解析其致病机理打下基础。【方法】以GeneArt® pYES1L Vector为模板,PYES2117F、PYES2117R为引物扩增含有酵母相关复制起始位点的片段pYES1L-2117,利用限制性内切酶Sac II单酶切双元载体DK1317-2并回收其大片段,利用In-Fusion HD Cloning Kit重组连接双元载体DK1317-2骨架和片段pYES1L-2117,得到可以在酵母-农杆菌-大肠杆菌中复制的三元穿梭载体pCY。以马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)全长cDNA侵染性克隆为模板,pCY-PVX-F、pCY-PVX-R为引物扩增PVX全长,采用限制性内切酶Stu I、Sma I酶切质粒pCY,采用醋酸锂转化法将获得的PVX基因组全长cDNA与线性化的pCY载体共转化酵母菌YPH501,通过同源重组获得PVX基因组全长cDNA克隆。通过农杆菌介导接种本生烟验证所构建克隆的侵染性,从而建立基于酵母同源重组的病毒侵染性克隆快速构建体系。在此基础上,以CLBV中国分离物（CLBV-HBYD）全长cDNA为模板,分段扩增其基因组,得到片段CLBV-1、CLBV-2;利用所建体系对CLBV-1、CLBV-2及pCY载体片段进行同源重组。得到重组质粒pCY-CLBV后,经农杆菌介导接种本生烟和锦橙幼苗,并利用RT-PCR和Northern blot检测其侵染性。【结果】建立了酵母-大肠杆菌-农杆菌的三元穿梭载体PCY,该载体全长10 347 bp,含有酵母、农杆菌、大肠杆菌的复制位点,能在酵母-农杆菌-大肠杆菌稳定复制,可用于在酵母中通过同源重组快速构建病毒基因组全长cDNA克隆,也可用于通过农杆菌介导直接接种植物寄主。利用该体系获得了CLBV中国分离株的基因组全长cDNA克隆16个。随机选取1个克隆进行了序列测定（GenBank登录号：MG572236）,其基因组全长8 747 nt,包含3个开放阅读框(open reading frame,ORF),ORF1为5 889 nt、ORF2为1 089 nt、ORF3为1 092 nt。全基因组序列比对显示,CLBV-HBYD与已登录的9个CLBV分离物的核酸序列一致性为79％-98％,其中与柑橘来源的EU857540一致性最高,为98%,与猕猴桃来源的JN983454、JN983455、JN983456和JN900477的一致性均为79%。在利用MEGA6 软件构建的系统发育树上,CLBV-HBYD与柑橘来源的CLBV分离株聚为一簇,而猕猴桃来源的CLBV分离株聚为另一簇。将所获16个CLBV全长cDNA克隆转化农杆菌,以pCY空载体为阴性对照注射接种本生烟。接种20 d后,抽提RNA进行RT-PCR检测,结果表明11个克隆的接种植株检测出CLBV特异性条带;随机选取5个阳性克隆进一步进行了Northern blot杂交,结果显示pCY-CLBV 1、2、3、14、15接种的本生烟可以检测到CLBV特异性条带,而对照样本未检测到任何条带,表明这些克隆均为侵染性克隆。【结论】构建了基于三元穿梭载体pCY的酵母重组克隆体系,利用该体系获得了中国CLBV分离株的适于农杆菌介导接种的基因组全长cDNA侵染性克隆。  相似文献