表达抑制山羊痘病毒ORF095 shRNA的山羊成纤维细胞系的建立     

赵志荀  吴国华  颜新敏  许丹  李健  朱海霞  崔力凡  高顺平  孙晓林  马保华  张强 《甘肃农业大学学报》2012,(2):6-11

将已经通过体外验证能够有效抑制山羊痘病毒复制的shRNA转入山羊体细胞,构建其表达细胞系.将已经通过验证能够靶向抑制山羊痘病毒ORF095基因并有效抑制GTPV的pGPU6/GFP-ORF095-siRNA-70转染山羊原代成纤维细胞,经800μg/mL G418抗性筛选7～8d后,用含200μg/mL G418和10～15ng/mL EGF的培养基进一步单克隆化并将单克隆细胞扩大、传代培养,应用RT-PCR检测及测序鉴定所构建的细胞系.结果表明:本试验获得的1株成纤维细胞系基因组含有ORF095-siRNA-70表达框架,为进一步进行体细胞克隆转基因动物的制备和RNAi体内抗山羊痘病毒的研究奠定了基础.  相似文献   

层出镰孢菌GD-5固态发酵培养条件及对藜和密花香薷的除草活性     

朱海霞  马永强  郭青云 《植物保护学报》2018,45(5):1154-1160

为获得层出镰孢菌Fusarium proliferatum菌株GD-5的最适固态发酵培养条件,采用单因素法筛选该菌株最适生长的碳氮源、固体发酵基质,以L_(25)(5~7)正交设计法确定最佳培养条件,并通过离体叶片法、盆栽试验和田间小区试验测定其对藜和密花香薷2种杂草的除草活性。结果表明,该菌株最适生长的固体发酵基质为麦麸,最适碳氮源分别是玉米粉和(NH_4)_2SO_4。优化后的固态培养条件为:N源(NH4)_2SO_443.0 mg/g、C源玉米粉48.4 mg/g、培养基质初始含水量258 mg/g、接种量0.26 mL/g、初始p H 7.6、培养时间120 h、培养温度30.7℃。优化得到的菌株在藜和密花香薷离体叶片、苗期盆栽和田间小区接种试验中均表现出较强的致病性,在盆栽试验中菌株GD-5对藜的致病率和鲜重防效分别为88.20%和69.46%,高于对密花香薷的79.70%和60.84%;在小区试验中对密花香薷的致病率和鲜重防效分别是91.40%和90.69%,高于对藜的64.50%和50.28%。说明该菌株具有进一步开发成为生物除草剂的潜力,有望替代或部分替代化学除草剂,防治农田杂草藜和密花香薷。  相似文献   

蛋白质互作研究技术     

吴健  朱海霞  赵志荀  颜新敏  赵银龙  吴娜  李健  张志东  张强  李影  吴国华 《动物医学进展》2016,(2):109-115

蛋白质在生物体的机制中是必不可少的,担任着生物系统内启动以及执行的任务。生物体的每一个生物过程,从遗传物质复制到细胞衰老与死亡,依赖于几种甚至几百种蛋白质之间的功能协调。蛋白质的功能,结构的改变会破坏这种平衡,导致疾病的发生,通常这种情况是由于蛋白间的相互作用引起的。目前有很多蛋白质的结构功能是未知的,所以蛋白质组学发展的也尤为迅速。论文主要综述了双向电泳、噬菌体展示技术、GST pull-down、酵母双杂交、串联亲和纯化、双分子荧光互补技术、蛋白质芯片、Far Western blot、免疫共沉淀9个蛋白质组学相关研究技术,并简单介绍了近几年这些技术在生物学中的应用。  相似文献   

灌南县林区森林健康状况评价     

朱海霞 《中国园艺文摘》2011,27(5):191-192

介绍健康森林生态系统的特征及健康评价的指标与方法,对灌南县林区采取调查取样方法,进行森林健康状况的评价。结果显示：健康、亚健康、中健康、不健康的生态类型在灌南县生态系统占据的面积比例分别为14.3%、20.8%、28%、36.9%。  相似文献   

85% 2甲4氯钠对春小麦田一年生阔叶杂草的防效   总被引：1，自引：1，他引：0  

朱海霞  郭良芝  翁华 《甘肃农业科技》2013,(2):5-7

在海拔2 230 m的川水区春小麦田试验观察了85% 2甲4氯钠可溶性粉剂不同剂量防除一年生阔叶杂草的效果。结果表明，85% 2甲4氯钠可溶性粉剂2 100 mL/hm2对水300 kg药后40 d株防效达87.39%，鲜重防效达96.24%。在该处理下，春小麦折合产量较喷清水增产335 kg/hm2，增产率12.32%。  相似文献   

山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达     

谢芳  张强  颜新敏  吴国华  李健  朱海霞  郭爱疆  韩若婵  施程洪  鞠厚斌  朱彩珠  岳城  才学鹏 《中国兽医学报》2009,29(8)

从重组克隆栽体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPICgK相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32.重组质粒pPIC9K-P32用SaIⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组.采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达.SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31 000的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别.  相似文献   

山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定   总被引：7，自引：0，他引：7  

鞠厚斌  张强  郑海学  施程洪  韩若婵  谢芳  吴国华  颜新敏  李健  朱海霞  朱彩珠  卫广森 《中国兽药杂志》2007,41(2):1-4,9

转移载体的构建是重组羊痘病毒构建的重要环节，在分析羊痘病毒基因组的基础上，以TK基因为插入靶序列，经PCR、酶切鉴定，获得了带有EcoRI、BamHⅠ酶切位点的TK基因片段。将此片段与经相同酶切的pUC119载体连接，构建转移载体pUC119-TK，并且以此为基础构建表达绿色荧光蛋白山羊痘病毒转移载体pTK-P7．5-GFP。将pTK-P7,5-GFP转染羊痘病毒感染的BHK21细胞，48h后报告基因得到表达，这为羊痘病毒载体系统的进一步开发奠定了基础。  相似文献   

羊痘病毒3个结构蛋白的克隆与抗原性分析     

颜新敏  吴国华  李健  朱海霞  朱彩珠  张强 《中国预防兽医学报》2010,32(11)

为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表达产物经western blot分析,羊痘病毒特异性血清只能识别融合蛋白ORF57和ORF95,不能识别ORF117。本研究为重组诊断抗原的筛选和亚单位疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

基于问题的数学课堂教学评价标准     

朱海霞  朱德全 《西南大学学报》2007,29(8)

提出了基于问题的数学课堂教学评价标准.认为具体指标维度可分为三效(教学效率、教学效果、教学效益)、四维(教材逻辑、教学逻辑、学习逻辑、认知逻辑)、五度(教学的信度、教学的内在效度、教学区分度、教学难度、教学的外在效度).  相似文献   

50g/L唑啉草酯乳油防除青稞田野燕麦应用技术研究及示范     

郭良芝  郭青云  魏有海  翁华  程亮  李玮  朱海霞 《江苏农业科学》2015,43(3):130-133

研究了50 g/L唑啉草酯乳油防除青稞田野燕麦的应用技术与示范效果。试验表明,50 g/L唑啉草酯乳油1 200 m L/hm2在225~675 L/hm2兑水范围施药防除野燕麦效果均较好,于青稞4叶1心期施药最佳,土壤墒情好有利于药剂的发挥。在青海省不同生态区于青稞3~5叶期施药,50 g/L唑啉草酯乳油1 200 m L/hm2单用处理区和与10%苯磺隆WP 150 m L/hm2混用处理区防除野燕麦效果均达95%以上;单用处理区青稞叶色正常,与10%苯磺隆WP 150 m L/hm2混用处理区前期叶片有轻微褪绿性黄斑,20 d后黄斑消失,效果显著,对青稞安全,收获期测产均较空白对照区增产12%以上。  相似文献