双抗TMV＋CMV辣椒转基因工程植株的再生及抗病毒鉴定   总被引：13，自引：1，他引：13  

毕玉平  周钟信 《华北农学报》1999,14(3):103-108

在构建的ＴＭＶｃｐ和ＣＭＶｃｐ双价表达载体和建立辣椒高效转化体系的基础上上农杆菌介导法转化辣椒栽培品种农大４０和湘研一号，对５２个抗卡那霉素再生植株进行杂交鉴定，结果１６株为ＴＭＶｃｐ和ＣＭＶｃｐ阳性，而ＰＣＲ检测发现其中２株为假阳性株，进一步温室攻毒试验表明有７个阳性转基因植株对ＴＭＶ和ＣＭＶ同时表现为免疫。  相似文献   

花生△12脂肪酸脱氢酶基因AhFAD2B在酿酒酵母中的表达及功能分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

张洪涛  单雷  全先庆  毕玉平  杨家森  王秀丽 《花生学报》2006,35(1):1-7

花生油中亚油酸(LA,C18:2Δ9,12)含量很高,为了研究花生Δ12脂肪酸脱氢酶(Δ12 FAD)的功能,用RT-PCR方法从花生未成熟种子中扩增出AhFAD2B的cDNA,连接到酵母表达载体p416中,并转化酿酒酵母K601,得到工程菌Kp4AFAD2B。气相色谱分析脂肪酸成分,结果表明该基因能在酵母K601中表达,并使菌株产生了两种新的脂肪酸即棕榈二烯酸(C16∶2Δ9,12)和亚油酸(C18∶2Δ9,12),含量分别占总脂肪酸的2.1%和9.2%,棕榈油酸(C16∶1Δ9)和油酸(C18∶1Δ9)含量与对照相比相应地下降,证明该基因编码的Δ12脂肪酸脱氢酶除能作用于C18∶1Δ9,还具有催化16碳的C16∶1Δ9底物在Δ12位脱氢生成C16∶2Δ9,12的功能,但在两种底物之间可能更偏爱C18∶1Δ9。  相似文献   

花生条纹病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

李广存  毕玉平  王秀丽  单雷  徐平丽  柳展基  路艳辉 《花生学报》1999,(Z1)

用内切酶Ｂａｍ ＨＩ和ＥｃｏＲＩ将ｐＧＥＭ－ ＳｔＶ 含有的约１１Ｋｂ 大小的ＰＳｔＶ－ ｃｐ 基因切下定向插入到表达质粒ｐＢＶ２２０ 的启动子ＰＲ、ＰＬ的下游,构建了该基因的原核表达载体ｐＢＶ－ ＳｔＶ。ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ凝胶电泳结果表明：ＰＳｔＶ－ ｃｐ 基因在大肠杆菌ＤＨ５α中经温度（４０℃）诱导后,可特异地表达３３ｋＤ蛋白。  相似文献   

番茄乙烯形成酶基因的克隆及其反义基因的表达载体构建     

李广存  毕玉平 《山东农业科学》1999,(3):8-11

从成熟的番茄果实中提取总ＲＮＡ,进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增合成乙烯形成酶ｃＤＮＡ,并将其克隆至载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ的ＥｃｏＲＶ位点,经限制酶谱分析,构建亚克隆进行全序列测定和序列分析。将所克隆基因以反义基因的形式定向重组到载体ｐＳＰＲＯＫ上,同时将带有完整启动子和终止子的标记基因ＢＡＲ基因引入ｐＳＰＲＯＫ中,最终获得表达乙烯形成酶反义基因和ＢＡＲ基因的植物表达载体ｐＢＡＲ－ＥＦＥ。  相似文献   

大豆种子发育中球蛋白各组分积累进程的研究     

郭静成  毕玉平  魏芝玲  张国珍  周睿 《中国农业大学学报》1989,(3):280-284

本文对栽培大豆(Glycine max)丰收3号种子发育过程中球蛋白2s、7s、11s 各组分进行了分离纯化,并进行了 SDS-PAGE 电泳(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析,确定了各组分在种子发育过程中出现的时间和先后顺序,为提取大豆球蛋白 polyA~+ mRNA提供了必要信息。  相似文献   

利用嫁接提高花生离体再生或转基因苗成活率的研究     

李长生  夏晗  卢金东  李爱芹  赵传志  毕玉平  王兴军 《中国农学通报》2009,25(20):63-67

花生（Arachis hypogaea L.）是世界上重要的油料作物。近年来,花生分子生物学发展迅速,但低效的再生和遗传转化系统严重制约着利用基因工程改良花生品种的研究。利用嫁接技术将组培苗或转基因苗嫁接到实生苗砧木上,不同嫁接方法成活率达到70-100%,远远高于转基因幼苗直接诱导生根移栽的成活率。  相似文献   

农杆菌介导轮状病毒抗原蛋白VP4基因遗传转化花生的研究     

刘峰  万书波  毕玉平  闫彩霞  李春娟  赵晋平  单世华 《作物学报》2008,34(7):1285-1289

选用鲁花14与花育23花生品种, 通过农杆菌介导开展了轮状病毒抗原蛋白VP4基因遗传转化研究, 从转化植株中随机选取26株表现Kan抗性植株进行npt II基因的PCR检测, 结果有22株能扩增出620 bp左右的npt II基因条带, 阳性率约为84.62%。提取npt II基因显示为阳性的植株叶片DNA作模板, 用VP4基因特异引物进行PCR扩增, 经琼脂糖凝胶电泳分析, 所有npt II基因阳性的植株均扩增出了约2 350 bp的特异性条带, 而野生型没有。对部分转基因植株进一步进行PCR-Southern杂交和Southern杂交分析, 发现转基因植株中出现了阳性杂交信号, 表明VP4基因的确已经整合到花生的基因组中, 并且是1~2个拷贝。用RT-PCR分析了11株转G1VP4基因的植株, 证明插入鲁花14中的VP4基因已经正常转录, 利用Western blot方法检测筛选到的4株转基因花生, 分别提取其蛋白, 在30 kD处出现特异性蛋白条带, 这为获得转基因创新种质材料奠定了基础。  相似文献   

农杆菌介导轮状病毒抗原蛋白VP4基因遗传转化花生的研究     

刘峰  万书波  毕玉平  闫彩霞  李春娟  赵晋平  单世华 《作物学报》2008,34(7):1285-1289

选用鲁花14与花育23花生品种, 通过农杆菌介导开展了轮状病毒抗原蛋白VP4基因遗传转化研究, 从转化植株中随机选取26株表现Kan抗性植株进行npt II基因的PCR检测, 结果有22株能扩增出620 bp左右的npt II基因条带, 阳性率约为84.62%。提取npt II基因显示为阳性的植株叶片DNA作模板, 用VP4基因特异引物进行PCR扩增, 经琼脂糖凝胶电泳分析, 所有npt II基因阳性的植株均扩增出了约2 350 bp的特异性条带, 而野生型没有。对部分转基因植株进一步进行PCR-Southern杂交和Southern杂交分析, 发现转基因植株中出现了阳性杂交信号, 表明VP4基因的确已经整合到花生的基因组中, 并且是1~2个拷贝。用RT-PCR分析了11株转G1VP4基因的植株, 证明插入鲁花14中的VP4基因已经正常转录, 利用Western blot方法检测筛选到的4株转基因花生, 分别提取其蛋白, 在30 kD处出现特异性蛋白条带, 这为获得转基因创新种质材料奠定了基础。  相似文献   

拟南芥室内繁种技术的改进     

赵术珍  毕玉平 《山东农业科学》2011,(3):50-51

在室内简易条件下,采用营养土、蛭石、珍珠岩按不同比例混合介质和直播方式培养拟南芥。并依据其生物学特性在温度、空气湿度和土壤水分等方面给予适当管理,能培养出生长更健壮、更好地满足实验要求的拟南芥植株。营养土、蛭石、珍珠岩的比例为3∶1∶1时拟南芥生长最好,果荚饱满,种子数最多。  相似文献   

小麦铝胁迫相关基因的研究进展   总被引：1，自引：1，他引：0  

纪鸿飞彭振英  毕玉平单雷 《中国农学通报》2010,26(24):10-19

铝胁迫是世界范围内酸性土壤中抑制作物生长的主要因素。铝胁迫能够抑制细胞伸长和细胞分裂,导致根部发育迟缓并伴随着水分和营养吸收的降低。目前,铝胁迫对谷物尤其是小麦、黑麦等的影响进行了一系列遗传分析研究。在铝胁迫处理的Warigal小麦（Al敏感品种）中发现了7个wali基因,分别为wali1,wali2,wali3,wali4,wali5,wali6和wali7。wali1编码植物类金属硫蛋白,与拟南芥、大豆、豌豆、野生猴面花、玉米和大麦等植物金属硫蛋白同源;wali2编码的蛋白与数据库中的其他序列没有明显的同源性;wali3,wali5和wali6编码的蛋白是丝氨酸蛋白酶抑制剂Bowman-Birk家族的成员,具有该家族的保守结构域;wali4编码的蛋白与苯丙氨酸解氨酶（PAL）同源;wali7与玉米、水稻的茎部特异性基因具有较高同源性,编码的蛋白是Gn_AT_II家族的一个成员。随后,在Victory小麦（Al敏感品种）分离出β-1,3-葡聚糖酶和fimbrin-like细胞骨架蛋白基因;在Atlas 66小麦（Al敏感品种）筛选出4个铝调控基因war4.2、war5.2、war7.2和war13.2,序列比对显示四个基因分别与过氧化物酶、半胱氨酸酶、苯丙氨酸解氨酶和草酸氧化酶同源。铝胁迫影响了植物生命活动的方方面面,植物也进化出了许多措施来对抗铝胁迫。此文主要就小麦铝胁迫相关蛋白的基本结构特征、生物学功能、表达调控以及最新研究进展进行综述。  相似文献