反义技术及其在植物基因工程中的应用     

柴晓杰  王丕武  关淑艳  徐雅维 《吉林农业大学学报》2004,26(5):515-518

反义技术是根据核酸杂交原理设计反义核酸来人为控制基因表达的方法,现已成为基因工程中的常用技术。文中就反义技术的作用机制、在植物基因工程中的应用及其前景作简要综述。  相似文献   

HrpZpsta基因植物表达载体的构建及其在大豆中的转化     

李勃  付永平  王丕武  王鹏  张云月  马建 《大豆科学》2011,30(3):393-396

利用PCR技术扩增含有hrpZpsta基因的克隆载体pMD18-T-hrpZpsta,以植物表达载体pBI121为基础,将PCR产物插入到此植物表达载体中.利用农杆菌介导的大豆子叶节转化法将构建好的表达载体导入大豆品种吉农28中,选用筛选条件为100mg·L-1的卡那霉素选择培养基培养,对获得的转基因植株进行PCR检测...  相似文献   

脯氨酸、硝酸银对农杆菌转化大豆的影响   总被引：10，自引：1，他引：10  

刘金华  王丕武  武丽敏  于彦春  张君  郝文媛  姚丹 《大豆科学》2003,22(1):36-39

农杆菌介导的遗传转化技术是植物遗传转化中广泛采用的一种技术。如何提高转化率是植物遗传转化中的一个关键问题，已发现有许多物质能够促进农杆菌介导的遗传转化。如乙酰丁香酮（AS）等许多酚类化合物都有助于农杆菌T-DNA的转移从而提高转化率，本实验在农杆菌转化大豆的过程中辅加化合物脯氨酸，硝酸银，通过对GUS基因表达的分析。结果表明这两种化合物均能明显地提高大豆的转化率，其中2mg/L浓度的脯氨酸及2mg/L的AgNO3具有最佳效果。较适合用于大豆的转化。  相似文献   

植物C_2H_2型锌指蛋白的研究进展     

宋冰  洪洋  王丕武  王贺  付永平  丁孝营 《广西农业生物科学》2010,(6):1133-1141

锌指蛋白是转录因子的一种,对真核生物的生长发育及逆境胁迫的耐受能力都有着重要关系,而植物C2H2型锌指蛋白是研究较多、较为明确的一种锌指蛋白,该蛋白大部分锌指结构具有一段高度保守的氨基酸序列QALGGH,这是植物中独有的特征,且据报道该C2H2型锌指蛋白与逆境胁迫是相关的。本文主要综述了植物C2H2型锌指蛋白的分类、结构和功能,植物C2H2型锌指蛋白与DNA、RNA和蛋白质的相互作用,以及概述了与盐胁迫、低温胁迫、干旱胁迫、氧胁迫和光胁迫等逆境胁迫相关的植物C2H2型锌指蛋白,最后还对其进一步的深入研究进行了展望,这就为日后利用基因工程技术改良作物品质、提高作物的抗逆性提供了有利条件。  相似文献   

大白菜组织培养与植株再生研究   总被引：10，自引：0，他引：10  

于占东  何启伟  牟晋华  康静  王丕武 《吉林农业大学学报》2005,27(4):391-395

以大白菜3个结球类型的不同品种（自交系）为试材,研究了不同基因型、不同外植体及不同培养基附加成分对植株再生的影响。结果表明：大白菜不同基因型间不定芽分化率有明显差异,以叠抱类型的“秋白19号”和合抱类型的“福山包头”再生率较高,直筒类型大白菜不定芽分化率低;带柄子叶是离体培养较理想的外植体,分化培养的最佳培养基为Ms＋6-BA2mg／L＋NAA0．5mg／L＋AgNO3 4mg／L＋ABA0．3mg／L＋蔗糖3．0％＋琼脂1．0％。建立了大白菜带柄子叶的高频再生系统,从接种到获得再生植株只需55—60d。  相似文献   

农杆菌介导法将bFGF基因转入木立芦荟的初步研究     

刘思言  姚丹  关淑艳  王丕武 《河南农业科学》2011,40(7):109-112

利用农杆菌介导法将bFGF基因导入木立芦荟中,通过对农杆菌介导芦荟遗传转化影响因素的分析,建立了优化的芦荟转化体系.用继代培养获得的粗壮的芦荟单株茎段作为转化外植体,以OD=0.55～0.68的EHA105农杆菌工程菌液侵染25min,在MS+蔗糖10g/L+100～mol/L乙酰丁香酮的共体培养基上培养3d,在MS+...  相似文献   

大豆TAIL-PCR反应体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘婷婷  王丕武  张卓  赵翠兰  关淑艳  曲静 《吉林农业大学学报》2018,(2)

热不对称交错PCR(TAIL-PCR)是检测转基因作物目的基因插入位点的主要技术。为探索适宜大豆的TAIL-PCR反应体系,采用单因素试验和L16(45)正交试验对影响转基因大豆TAIL-PCR的主要参数进行分析,以期建立成熟的大豆TAIL-PCR技术体系。试验设计3个嵌套特异性引物和5种兼并引物进行了3次巢式的热不对称PCR反应。结果表明:退火温度、酶用量、模板浓度、兼并引物和较低温特异性循环在不同水平对TAIL-PCR反应结果均有影响,优化的TAIL-PCR反应体系,即第2次反应为退火温度61℃,1.0 U/30 m L Taq酶,模板浓度30 ng/μL;第3次反应为退火温度62℃,0.5 U/50m L Taq酶,模板浓度40 ng/μL,反应过程中采用降低5个较低温特异性循环,兼并引物采用AD3,在此条件下扩增的条带清晰、稳定、特异性好,适合大豆TAIL-PCR反应体系。  相似文献   

高产优质玉米新品种“吉农玉309”选育报告     

关淑艳  马义勇  曲静  姚丹  付玉芹  王丕武 《吉林农业大学学报》2010,32(6):603-605

玉米新品种"吉农玉309"是以自选系"GS04"为母本、"WH8"为父本杂交育成的玉米单交种。2年区域试验结果:平均产量10403.2kg/hm2,比对照"吉单261"增产7.9%;生产试验结果:平均产量9927.7kg/hm2,比对照"吉单261"增产8.8%。该品种于2009年1月通过吉林省农作物品种审定委员会审定,其主要特点是稳产、高产、抗病、抗旱、品质好。该品种属中熟品种,适于吉林省的长春、吉林、通化、松原、白城等地区及黑龙江省部分地区种植。  相似文献   

玉米淀粉分支酶sbe Ⅱ b基因启动子的克隆与特异表达     

徐亚维  王丕武  柴晓杰 《安徽农业科学》2010,38(36):20538-20541

[目的]构建玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。[方法]LA-PCR扩增了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子序列,并克隆到pMD18-TVector上。再将启动子克隆到pBI121载体上,构建植物表达载体pBI121-sbeⅡb。把GUS基因连到pBI121-sbeⅡb上构建pSBE-GUS后利用农杆菌介导法转化烟草。分别进行PCR和Southern杂交检测,并对经基因枪轰击和农杆菌介导的烟草种子、根、茎及叶进行GUS组织化学分析和荧光检测。[结果]测序结果与GenBank中发表的玉米sbeⅡb基因启动子同源性达98.52%。共培养和筛选培养后获得4株转pSBE-GUS植株,叶片仅有少量蓝斑出现,而根和茎部未见蓝斑,但烟草种子有大量蓝斑显出,初步推断sbeⅡb基因启动子能启动GUS在种子中特异表达。[结论]成功构建了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。  相似文献   

大豆胰蛋白酶抑制剂和脂肪氧化酶基因双价RNAi表达载体的改造及转化   总被引：1，自引：0，他引：1  

王丹  付永平  王丕武 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2012,40(12):85-89

【目的】应用RNA干扰技术同时抑制大豆脂肪氧化酶(Lox)和胰蛋白酶抑制剂(KTi)基因的表达,改良大豆品质,培育缺失Lox和KTi的大豆新材料。【方法】应用RNAi原理,以双价RNAi植物表达载体pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi为基础,以植物表达载体pCAMBIA3301的质粒DNA为模板,利用CaMV35S启动子的上游引物和CaMV35S终止子的下游引物,PCR扩增含有除草剂抗性基因bar的整个表达原件,然后将其插入到pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi中,构建以除草剂为筛选标记的双价RNAi表达载体,并通过花粉管通道法转化至大豆吉农18、吉农28和吉农27 3个品种中,对转基因植株进行PCR、Southern杂交、RT-PCR分子水平检测和除草剂抗性检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定以及测序结果表明,双价RNAi植物表达载体pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar构建成功。将其转入到大豆中,分别获得吉农18、吉农28、吉农27T1代籽粒47,25和86粒,以及T2代转基因植株50株。RT-PCR结果表明,转基因株系中脂肪氧化酶和胰蛋白酶抑制剂mRNA积累受到明显抑制。【结论】获得了转pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar的T2代转基因大豆。  相似文献