HEK-293T细胞敲除TRIM25基因促进脑心肌炎病毒复制的研究     

刘文文  吕林  朱慧欣  延君芳  姜平  白娟 《畜牧与兽医》2022,(6):78-84

为了探究三方基序蛋白25(TRIM25)对脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)增殖的影响，在HEK-293T细胞上使用簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除TRIM25基因，并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果，然后观察敲除细胞形态并利用试剂盒测定TRIM25缺失后细胞增殖速度的变化，确认敲除细胞与野生细胞无明显差异，用EMCV感染敲除细胞后，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、病毒滴定测定和Western blot等方法测定病毒基因转录水平、蛋白表达情况。结果显示：感染EMCV后，敲除细胞与野生细胞相比，显著促进了病毒的转录水平、病毒蛋白的翻译水平和子代病毒的毒力(P<0.05)。综上，在HEK-293T细胞上，成功构建TRIM25缺失细胞系，且试验表明TRIM25的缺失有助于EMCV的复制。研究结果为后续TRIM25抗病毒机制研究提供了理论依据。  相似文献   

云杉育苗栽培及育苗管理技术     

白娟 《河南农业》2023,(11):10-12

云杉具有良好的耐寒性,对水分没有太高的需求,且生命力较为顽强,在我国拥有广阔的种植面积,且成年之后大多都拥有粗壮挺拔的主干,在很多领域被广泛应用。因此,为了给云杉产业发展带来一定的促进作用,充分发挥出其经济价值,应充分重视云杉育苗栽培及育苗管理技术的深入探究。  相似文献   

杏李新品种“红粉佳人”的选育     

顾维  成映云  李纯凡  刘婷  韦洁敏  曾祥美  白娟  曾荣  祁美成 《中国南方果树》2023,(3):109-111

“红粉佳人”是从恐龙蛋中选育出来的新品种，果实椭圆形，成熟后果皮淡紫红色伴红色斑点，表面有白色蜡质果粉。果实纵径5.23 cm、横径5.70 cm,果形指数0.92,单果质量91.1 g,最大单果质量139.4 g。可溶性固形物含量14.9%,果肉粉红色，质脆、黏核，可食率98.04%,粗纤维少，果汁多，具有杏的香味、李的甜味。果实生育期约120 d,在重庆海拔300 m地区7月中旬成熟。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定     

王梦婕  张杰  孙杨杨  白娟  刘星  姜平 《畜牧与兽医》2022,(6):91-96

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白单克隆抗体，将PRRSV类NADC30毒株FJ1402的M蛋白胞外区基因与TAT穿膜肽基因融合，密码子按大肠杆菌偏嗜性优化，构建了大肠杆菌表达质粒，制备获得重组M蛋白。取6周龄雌性BALB/c小鼠免疫重组蛋白，将脾脏淋巴细胞和SP2/0细胞融合，用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株，获得4株分泌M蛋白抗体的杂交瘤细胞株。其中1E7、2F7、3A12的细胞上清液抗体效价为1∶3 200,3G7的细胞上清液抗体效价为1∶800,传至第15代均能稳定分泌抗体。单抗经亚型鉴定可知1E7、2F7、3A12的重链类型为Ig2a, 3G7的重链类型为IgG1,轻链类型都为κ型。经间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定，4株单克隆抗体均可与PRRSV产生特异性反应，鉴定出2个抗原表位，为PRRSV诊断和疫苗研制奠定了基础。  相似文献