番茄黄化曲叶病毒V 2基因原核表达及多克隆抗体制备     

季英华  周晓伟  蔡振东  程兆榜  周益军 《植物病理学报》2013,43(2):143-148

 通过PCR的方法,从番茄黄化曲叶病毒江苏分离物DNA中扩增到V2基因,并克隆到pMD18-T载体,序列测定结果显示其与报道的XH2分离物序列完全一致,核苷酸序列全长351 bp,编码115个氨基酸,推测分子量约13 kD。将该V2基因亚克隆到原核表达载体PET32a中获得重组表达载体PET32a-V2,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG可诱导1个分子量约为32 kDa的融合蛋白（含His标签）表达,经Ni⁺ NTA亲和柱纯化,获得纯化的重组蛋白,免疫家兔制备TYLCV-V2蛋白的多克隆抗体Anti-V2,间接ELISA测定Anti-V2的效价达1∶655 360,Western blot及DIBA分析结果表明Anti-V2可与V2蛋白发生特异血清反应,可为进一步研究V2蛋白的功能提供参考。  相似文献   

一种快速同步检测水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的方法   总被引：4，自引：0，他引：4  

季英华  高瑞珍  张野  程兆榜  周彤  范永坚  周益军 《中国水稻科学》2011,25(1):91-94

 水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒是近年来在水稻上危害日益严重的两种病毒,由于两者同属于呼肠孤病毒科斐济病毒属,在症状、粒体形状、传播介体及寄主等方面非常相似,由此也给诊断及鉴定造成了困难。针对这一问题,通过设计简并引物,并优化体系,建立了一种快速、简便、灵敏、特异的方法,为这两种病毒的检测及鉴别提供了方便。  相似文献   

灰飞虱从冷冻病叶获得水稻黑条矮缩病毒方法的研究初报   总被引：2，自引：0，他引：2  

周彤  吴丽娟  王英  程兆榜  季英华  范永坚  周益军 《中国水稻科学》2010,24(4):425-428

  研究出一种利用灰飞虱从冷冻病叶中获得水稻黑条矮缩病毒（rice black streaked dwarf virus, RBSDV）的方法。以-70℃条件下冷冻保存的RBSDV罹病植株叶片对灰飞虱饲毒,随后接种感病水稻品种,结果发现灰飞虱可从冷冻病叶上获得RBSDV,并传播RBSDV,且获毒能力和传毒能力与新鲜病叶没有差异。这表明从冷冻病叶上获得RBSDV的灰飞虱可以应用于品种抗性鉴定,此法可望加快RBSDV抗病品种的选育进程。  相似文献   

江苏省葫芦科作物西瓜花叶病毒的分子鉴定和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

任春梅  程兆榜  缪倩  魏利辉  周益军  范永坚 《广西农业科学》2013,(9):1464-1470

[目的]对江苏各地具典型褪绿花叶症状的多种葫芦科作物是否为西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus,WMV）侵染进行分子鉴定,明确该病毒在江苏的遗传分化.[方法]提取样品总RNA,利用西瓜花叶病毒的cp基因特异性引物进行RT-PCR扩增,克隆测序,应用DNASTAR和Clustal X软件进行序列分析.[结果]来自南瓜、瓠瓜、西瓜和西葫芦的11个分离物的RNA模板中均检测到1200 bp左右的片段;序列测定表明该片段含1154个核苷酸,包含完整的编码281个氨基酸的WMV-cp基因.序列比对结果表明,11个分离物和来自不同地区的17个分离物WMV-cp基因核苷酸和推导的编码CP蛋白氨基酸序列同源性分别为90.5％～100.0％和92.9％～100.0％.[结论]WMV的遗传变异与地缘相关性较强而与寄主相关性较弱.江苏分离物WMV-CP氨基酸均具有蚜传株系的特征结构域DAG,暗示其田间流行与蚜虫有关.  相似文献   

3种麦类土传花叶病毒的多抗制备及检测应用     

任春梅  程兆榜  朱慧  邰丽娟  陆凤霞  鲍传华  范永坚  周益军 《江苏农业科学》2014,(11)

采用PEG二次沉淀和蔗糖硫酸铯密度梯度离心,得到提纯的3种麦类土传花叶病毒(小麦黄花叶病毒、大麦黄花叶病毒、中国小麦花叶病毒)。透射电镜观察分别可见线状、直杆状病毒粒子,测定浓度分别达5.44、8.08、4.09 mg/m L。提纯病毒免疫新西兰大白兔制备抗血清,得到的3株抗血清经酶联免疫吸附法测定效价分别达1∶12 800、1∶25 600、1∶6 400。应用样品和多抗稀释的方阵试验,建立3种多抗的双抗夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA),并对采自江苏省、安徽省、河南省、山东省的麦子病样进行检测,结果显示,阳性检出率较高,说明这3种病毒仍是我国麦子流行的主要病毒。  相似文献   

江苏地区黄瓜绿斑驳花叶病毒病的发生概况与防控技术     

褚姝频  龚伟荣  胡婕  丁志宽  程兆榜  田子华 《江苏农业科学》2014,(12)

黄瓜绿斑驳花叶病毒是近年新传入江苏的一种全国农业植物检疫性有害生物。通过调查查明该病在江苏的发生情况、主要症状及发生特点,通过开展疫情监测预警,并施予种子检疫和种子处理为主、农业防治和化学防治为辅的科学防控,可有效控制该病的发生危害。  相似文献   

江苏玉米矮花叶病病原鉴定     

缪倩  任春梅  吴丽莉  周益军  范永坚  程兆榜 《江苏农业科学》2013,41(2)

可以感染玉米引起花叶症状的病毒有玉米矮花叶病毒(MDMV)、甘蔗花叶病毒(SCMV)、约翰逊草花叶病毒(JGMV)和高粱花叶病毒(SrMV)等4种,目前国内主要认为是SCMV.为明确江苏发生的玉米矮花叶病的病原,2011年从姜堰田间采集自然发生的呈现玉米矮花叶病典型症状的玉米病叶,初提纯物电镜观察可见750 nm×13 nm线状病毒粒子.根据已经发布的SCMV设计特异性引物,通过RT-PCR扩增获得预期的CP、HC-Pro、NIb和Vpg基因片段,而用MDMV、JGMV和SrMV特异性引物未扩增到预期目的片段.序列测定和同源性分析表明,扩增到的基因片段序列与SCMV对应基因片段序列的同源性在90％以上,与SCMV亚组中另外3个株系MDMV、SrMV和JGMV相应基因片段序列的同源性在80％以下.由此判断姜堰玉米矮花叶病的病原为SCMV.  相似文献   

江苏和云南地区水稻条纹叶枯病流行差异分析     

陈思宏  程兆榜  马学文  周益军  范永坚 《江苏农业科学》2013,41(3)

水稻条纹病毒由灰飞虱传播,主要危害水稻引起水稻条纹叶枯病,我国江苏和云南是其适宜流行区之一.2002年来水稻条纹叶枯病在江苏等地严重发生且病害逐年加重,与此同时云南水稻条纹叶枯病一直呈低水平存在状态.为明确这种流行差异的原因,进一步为病害的生态学治理提供依据,本试验从植物病毒病害流行生态系统的角度对江苏和云南两地的水稻条纹叶枯病流行特点进行了比较研究.试验结果表明,灰飞虱发生量低、带毒率低、水稻品种抗性水平高和多样性程度高是云南地区水稻条纹叶枯病轻发的主要原因,其中灰飞虱发生量和带毒率上的显著差异是引起江苏和云南水稻条纹叶枯病流行程度迥异的表观原因,水稻品种抗性差异是决定两地病害流行差异的本质原因.  相似文献   

一种快速同步检测小麦黄花叶病毒和中国小麦花叶病毒的方法     

缪倩  季英华  任春梅  魏利辉  周益军  程兆榜 《麦类作物学报》2013,33(3):595-599

针对小麦黄花叶病毒(WYMV)和中国小麦花叶病毒(CWMV)在症状、传播途径、发生规律等方面高度相似、难以用常规手段鉴定的问题,根据两种病毒基因序列的异同点设计了三条引物CWWY-R2、CW1-F2和WY1-F2,以植物总RNA为模板、CWWY-R2为引物反转录合成cDNA.通过优化建立了一种同步检测两种病毒的反应体系:cDNA1.6 μL,引物(10 μmol·L-1)各0.4 μL,10×PCR Buffer(不合Mg2+)2μL,dNTPs(10 mmol·L-1 each)0.4 μL,Taq DNA聚合酶(5U·μL-1)0.8μL,MgCl2(25 mmol·L-1)0.8μL,ddH2O 13.2 μL,合计20 μL; PCR反应条件:94 ℃预变性5 min,94℃ 50 s,50℃50 s,72℃90 s,共30个循环,72℃延伸10 min.WYMV和CWMV的PCR扩增预期目的片段分别为508和918 bp.利用该方法对江苏高邮、扬州和大丰的样本进行检测,它们分别为WYMV、WYMV、CWMV单一侵染,证明该方法准确性较高,可用于两种病害同步检测.  相似文献   

江苏盐城地区玉米粗缩病暴发原因分析   总被引：9，自引：0，他引：9  

程兆榜; 周益军; 范永坚; 张文荟; 吴淑华  成长庚; 赵阳 《玉米科学》2000,8(1):083-085

通过对盐城地区8个县(市)的调查研究发现,玉米粗缩病发生的轻重与当地灰飞虱发生数量、玉米播期、品种和播种方式、种植结构、耕作习惯及当年的气候条件等因素有关,其中灰飞虱的数量和玉米的播期是决定玉米粗缩病发生轻重的主要因子,其它方面都通过影响这两个因子而间接影响病害发生的轻重。近年来由于气候条件的变化、耕作方式的多样化等因素有利于灰飞虱的发生,玉米感病品种的连片种植及播期的不规范等有利于灰飞虱传毒危害是导致玉米粗缩病大发生的主要因素。  相似文献