禾谷镰孢原生质体的形成与再生     

徐敬友  胡广淦  童蕴慧  李清铣 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1997,(2)

研究报道了制备禾谷镰孢（ＦｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍＳｃｈｗ．）原生质体的方法及影响原生质体再生的条件。ＰＤＳ培养液中培养的菌丝和５％绿豆汁中产生的分生孢子，在２８℃下通过蜗牛酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％＋１．５％）酶解，２ｈ开始有原生质体释放，５ｈ左右达释放高峰，后趋于稳定。而以纤维素酶（３％）、溶菌酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）、纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）处理，原生质体形成效果较差。原生质体在ＰＤＡＳ高渗培养基上再生频率较高（２０％～３０％），在ＭＭＳ上再生频率较低，而在ＮＭＳ上原生质体则不能再生。在ＰＤＡＳ中加入ＫＣｌＯ３和ＭＮＮＧ对原生质体再生有一定影响  相似文献   

地衣芽孢杆菌WIO发酵产生抗茵蛋白的研究     

纪兆林  宋浩  徐敬友  张清霞  陈夕军  童蕴慧 《中国生物防治》2013,(4):579-585

地衣芽孢杆菌BacilluslicheniformisW10是1株生防细菌,其能产生抗菌蛋白,对多种植物病原菌有较好的抑制效果。本试验研究了菌株W10产生抗菌蛋白的发酵条件,为工厂化生产工艺提供技术支持。试验结果表明,接种菌龄12h,2％接种量,发酵液pH7．0,发酵培养60h是菌株W10产生抗菌蛋白的适宜发酵条件。控制发酵温度有利于抗菌蛋白积累,第一段温度为30℃培养20h,第二段温度为28℃至发酵结束。最佳溶氧量为20％。2次补料发酵效果要高于分批发酵,补料为500mL含10g．L-1葡萄糖和5g·L-1蛋白胨的培养基;选用200mg·L-1聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚（GPE消泡剂,泡敌）为消泡剂。利用优化的控制条件发酵培养菌株W10,与优化前相比,对目标病菌的抑菌率增加了34．6％。  相似文献   

恶疫霉实时定量RT-PCR分析中内参基因的选择   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈孝仁张博月  邢玉平童蕴慧 徐敬友 《中国农学通报》2012,28(30):201-207

为选择合适的内参基因用于分析植物病原卵菌恶疫霉(Phytophthora cactorum)的基因表达情况,本研究利用实时定量RT-PCR分析持家基因Ubc、Tub-b、WS21和WS41在恶疫霉生长发育阶段和侵染草莓阶段的表达差异,并利用软件geNorm、NormFinder和BestKeeper比较其表达稳定性。结果表明：基于公共数据库序列和其他疫霉菌同源序列设计的持家基因引物在恶疫霉中具有良好的扩增效率、反应有效性和特异性。通过分析,发现在恶疫霉的不同生长发育阶段（菌丝生长、游动孢子囊、游动孢子和休止孢萌发）和侵染草莓阶段（接种后3、5、7天）,表现最为稳定的是Ubc基因。当使用多个内参基因时,Ubc和WS41是最适合校正恶疫霉基因表达数据的内参基因组合。本研究结果为利用实时定量RT-PCR准确分析恶疫霉基因相对表达量提供了重要的内参基因,也为其他疫霉菌的基因表达研究提供了有价值的参考。  相似文献   

棉花枯萎病拮抗放线菌K5的分离与鉴定     

张清霞  陈洁  童蕴慧  徐敬友 《中国生物防治》2008,24(4):325-329

从扬州地区土壤中分离到207株放线菌,以棉花枯萎病菌为目标菌,采用抑菌带法测定,筛选到9株有拮抗活性菌株,占所分离总数的4.3%.其中K5对棉花枯萎病菌的拮抗作用最强,抑茜带宽为8mm,同时对其它病菌也有一定的拮抗作用.盆栽试验结果表明菌株K5对棉花枯萎病防治效果达46.5%,与多菌灵相当.通过对菌株K5的形态观察、培养特征、生理生化反应和16S rDNA测定,将其鉴定为玫瑰产色链霉菌Streptomyces roseochromogenus.  相似文献   

水稻内生枯草芽孢杆菌对稻瘟病菌和稻恶苗病菌的抑制作用   总被引：2，自引：0，他引：2  

陈夕军  胡长松  童蕴慧  纪兆林  徐敬友 《中国生物防治》2008,24(4):339-344

自水稻茎和根内分离获得的枯草芽孢杆菌J215和G87菌株培养菌液和滤液对稻瘟病菌和稻恶苗病菌具有较强的抑制作用.其培养菌液(109cfu/ml)稀释2～100倍时,对稻瘟病菌和稻恶苗病菌菌丝生长抑制分别为83.6%～91.0%和60%左右;培养滤液稀释2倍时抑制率达52.4%～75.4%.细菌培养滤液处理能破坏病菌菌丝形态,使稻瘟病菌菌丝细胞膨大、细胞壁破损、原生质外渗、菌体崩溃;但对稻恶苗病菌菌丝损坏较轻,主要使菌丝细胞膨大、生长缓慢.另外,细菌培养滤液稀释10倍时对稻瘟病菌分生孢子形成和萌发的抑制分别达85%和95%以上;对稻恶苗病菌分生孢子形成和萌发的抑制率分别为90%和60%以上.  相似文献   

枯草芽孢杆菌Z-2重组甘露聚糖酶分泌条件优化及酶学性质的研究     

张清霞  黄姗姗  童蕴慧  徐敬友 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2009,30(2)

以pET22b(+)为载体、Escherichia coli BL21(DE3)为宿主菌,对培养基、诱导温度、IPTG浓度、诱导时菌体浓度、诱导时间等参数进行优化,以提高甘露聚糖酶的产量.结果表明:当采用TB培养基、37℃下D600nm为0.6～0.7时加入IPTG(终浓度0.01 mmol·L-1),诱导8 h后发酵液中酶的活力最高.酶件质研究表明,霞组甘露聚糖酶与野生菌产生的酶性质相似,当温度为55～60℃、pH为7.5时活力最高,低于55℃、pH 6.5～7.5时酶性质稳定,供试的大部分金属离子对酶活力影响较小,只有DTT有明显的促进作用.  相似文献   

油菜菌核病菌对腐霉利的抗性诱变及抗药菌株的生物学特性   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈夕军  曹敏娟  王艳  童蕴慧  徐敬友 《中国油料作物学报》2009,31(4):503-508

从江苏省镇江市和扬州市采集菌核病植株的茎,从中分离获得油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）单菌核菌株。32个野生型菌株药剂敏感性（EC50）频率分布数据显示,病菌对腐霉利的敏感基线EC50值为0.1981 ± 0.0220 µg/mL,MIC（最小抑菌浓度）值为 1.1 ± 0.1595µg/mL。实验未发现田间抗腐霉利菌株。通过室内紫外线和药剂诱导,获得多株高抗腐霉利突变体（EC50>1000µg/mL）。这些抗性突变株经转管培养5~20代后抗药性稳定。它们对同类药剂异菌脲和有机磷类甲基立枯磷也表现高抗,但对苯并咪唑类多菌灵敏感。与野生型敏感菌株相比,抗腐霉利突变株菌丝生长较慢,对油菜茎杆和叶片的致病力均较弱。  相似文献   

桃褐腐病生防细菌FD6硝吡咯菌素合成基因簇的克隆及prnA功能分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

张清霞  何玲玲  单海焕  童蕴慧  陈夕军  纪兆林  刘凤权 《园艺学报》2016,43(8):1473-1481

荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）FD6分离自福建闽侯青口青菜根围土壤,采用凹玻片法和离体果实接种法测定菌株FD6对桃褐腐病菌（Monilinia fructicola）的抑制能力。PCR法克隆硝吡咯菌素合成基因簇结构基因（prn）,利用同源重组构建prnA缺失突变体并分析其功能。结果表明,菌株FD6处理桃后可完全抑制桃褐腐病发生;细菌悬浮液对褐腐病菌分生孢子的萌发抑制率达93.18%,细菌培养滤液的抑制率为69.36%;细菌悬浮液对黄瓜根结线虫也具有较强的致死作用。序列分析表明荧光假单胞菌FD6硝吡咯菌素合成基因簇全长为5 868 bp,内含4个开放阅读框prnA、prnB、prnC和prnD,这4个基因组成1个共转录单元。系统发育进化树显示菌株FD6与P. protegens CHA0、Pf-5的prn基因相似性达94%。利用遗传学方法证实prnA基因是硝吡咯菌素合成的必需因子,此外该基因还影响2,4–二乙酰基间苯三酚和藤黄绿脓菌素的合成。  相似文献   

不同杀菌剂对桃流胶病的毒力测定   总被引：3，自引：0，他引：3  

纪兆林  刘娟  童蕴慧  陈孝仁  徐敬友 《中国南方果树》2012,41(4):39-41,46

桃流胶病是桃树上的一种常见病害。本文测定了9类16种杀菌剂对桃流胶病菌葡萄座腔菌Botryosphaeriaspp.的毒力效果。结果表明,毒力作用最强的杀菌剂是丙环唑,其次是多菌灵和咪鲜胺,对病菌B.dothidea LHKB-331的EC50值分别为0.041 6μg·mL-1、0.113 1μg·mL-1和0.154 8μg·mL-1;对病菌B.obtusa GA-422的EC50值分别为0.018 7μg·mL-1、0.036 2μg·mL-1和0.071 7μg·mL-1。在保护性杀菌剂中,代森锰锌要优于福美双。而三唑类中的三唑酮和新型杀菌剂嘧菌酯对2种病菌的抑菌作用都较差,对LHKB-331的EC50值分别为5.624 7μg·mL-1和6.796 8μg·mL-1,对GA-422的EC50值分别为11.315 3μg·mL-1和96.920 3μg·mL-1。  相似文献   

油菜菌核病菌抗腐霉利菌株的生理生化特性及抗药机制初步分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

陈夕军  曹敏娟  孔维文  王艳  童蕴慧  徐敬友 《中国油料作物学报》2010,32(4):534-539

通过室内紫外线和药剂诱导,获得多株高抗腐霉利油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)突变体。与野生亲本菌株相比,抗性突变株(EC50800μg/mL)在高糖(40g/L蔗糖)和高盐(5g/LNaCl)培养基上生长缓慢,表明对高渗透压比较敏感;菌丝相对电导率较高,显示细胞膜透性增大,胞内电解质渗出较多。试验还发现,在含药培养液中,亲本菌株菌丝内甘油大量合成和积累,增加462.45%,而抗药突变株甘油含量仅稍有增加或有所下降,说明抗腐霉利突变株对外界渗透压的调节能力较低。根据已报道组氨酸激酶(HK)基因序列设计特异引物,经PCR扩增和测序,获得油菜菌核病菌HK基因保守区域序列1605bp。抗、感腐霉利菌株HK基因保守区域在第45位、第81位和第625位碱基不同,但编码的氨基酸一致。因此,油菜菌核病菌对腐霉利的抗性及抗药菌株的高渗敏感性与HK基因保守区域碱基突变无关。  相似文献