烟草花叶病毒及其弱毒株基因组的cDNA克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

邵碧英  吴祖建  林奇英  谢联辉 《植物病理学报》2003,33(4):296-301

 利用RT-PCR技术获得了覆盖整个烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)强毒株TMV-W、2个弱毒株TMV-017和TMV-152基因组(RNA)的cDNA克隆。序列测定结果表明,强、弱毒株全长均为6 395个核苷酸,具有4个开放阅读框(open readingframe,ORF),分别编码126、183、30、17.6 kDa蛋白。TMV-W和普通株系TMV-U1的基因组同源率达到98%,TMV-W为普通株系。TMV-017、TMV-152基因组发生变异的部位主要在126/183 kDa ORF中。和TMV-W相比,TMV-017仅在126 kDa蛋白ORF中有18个碱基发生变异,其中10个碱基引起氨基酸的改变;而TMV-152在183 kDa ORF中有16个碱基发生变异,其中有11个引起氨基酸的改变。TMV-017和TMV-152有11个共同变异的碱基,其中有8个引起氨基酸的变异。TMV-152在30 kDa ORF中有1个碱基发生变异而引起氨基酸的改变。其它区域,三者完全相同。  相似文献   

用分子生物学方法检测孵化前后鳖受精卵中的霍乱弧菌     

吴谦  黄晓蓉  郑晶  邵碧英  陈彬  黄建忠 《江苏农业科学》2011,39(6)

精选15批进境鳖受精卵,在30℃孵化前后对霍乱弧菌进行检测,采用PCR方法鉴定可疑菌并应用实时荧光PCR鉴定其O1、O139群,以比较鳖受精卵在孵化前后霍乱弧菌检出情况,并对鳖受精卵孵化后废弃物处理以及鳖幼苗消毒等生物安全问题提出建议.结果:孵化前检出1批,检出率为6.7％,孵化后检出8批,检出率为55.3％,实时荧光PCR检测结果显示检出的霍乱弧菌均不属于O1、O139群.表明经过孵化的鳖受精卵的霍乱弧菌检出率明显大于未孵化的,所以孵化后的鳖卵废弃物和鳖幼苗应进行消毒处理.  相似文献   

烟草花叶病毒弱毒株的筛选及其交互保护作用   总被引：4，自引：0，他引：4  

邵碧英  吴祖建等 《福建农业大学学报(自然科学版)》2001,30(3):297-303

采用高温、亚硝酸及两者的复合处理对烟草花叶病毒（TMV）强毒株进行诱变，均可有效提高突变频率，而且复合处理还有较好的协同效应，经生物学接种鉴定及血清学方法筛选，从中获得了TMV-017和TMV-1522个弱毒株，用正交设计法考察病毒接种浓度，接种间隔时间，接种部位以及普通烟生育期等因素对弱毒株交互保护作用的影响，发现以烟株生育期和接种间隔时间两因素影响最大，本试验结果表明，在烟草团棵期，弱毒株和强毒株接种间隔时间为17d时，交互保护作用效果最好。  相似文献   

转基因大豆中外源基因的二重PCR检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

邵碧英  陈文炳  江树勋  李寿崧 《福建农林大学学报(自然科学版)》2005,34(4):483-487

用CTAB法提取转基因大豆(Roundup Ready品系)的总DNA.根据行业标准SN/T 1195-2003,合成用于扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflowerm osaic viru,s CaMV)35S启动子的引物S1和S2、根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)CP4菌株EPSPS基因的引物Ea、ER和Eb.应用这5条(2组)引物对转基因大豆进行二重PCR检测时,扩增得到2个新片段,分别与片段S1ER、S1Eb大小一致.将片段S1ER、S1Eb进行克隆并测序,序列已在GenBank上登录,接受号分别为AY592954和AY596948.序列分析结果表明,片段S1ER含有CaMV 35S启动子和矮牵牛叶绿体转运肽序列(CTP)的部分序列,片段S1Eb含有CaMV 35S启动子部分序列、CTP和CP4 EPSPS基因的部分序列,原用于扩增CP4 EPSPS基因的引物中,仅引物Eb位于CP4 EPSPS基因中.重新合成扩增CP4 EPSPS基因的引物E1和E2,建立的二重PCR方法不仅适合于转基因RoundupReady大豆,还适合于其它植物中的CaMV 35S启动子和CP4 EPSPS基因的同时检测.  相似文献   

烟草花叶病毒弱毒株的筛选及其交互保护作用     

邵碧英  吴祖建  林奇英  谢联辉 《福建农林大学学报(自然科学版)》2001,30(3):297-303

采用高温、亚硝酸及两者的复合处理对烟草花叶病毒 (TMV)强毒株进行诱变 ,均可有效提高突变频率 ,而且复合处理还有较好的协同效应 .经生物学接种鉴定及血清学方法筛选 ,从中获得了 TMV- 0 17和TMV- 15 2 2个弱毒株 .用正交设计法考察病毒接种浓度、接种间隔时间、接种部位以及普通烟生育期等因素对弱毒株交互保护作用的影响 ,发现以烟株生育期和接种间隔时间两因素影响最大 .本试验结果表明 ,在烟草团棵期 ,弱毒株和强毒株接种间隔时间为 17d时 ,交互保护作用效果最好  相似文献   

大豆及腐竹中转基因成分的多重PCR分析   总被引：15，自引：2，他引：15  

邵碧英  陈文炳  江树勋  李寿崧 《福建农林大学学报(自然科学版)》2004,33(1):117-121

采用CTAB法提取大豆干样、新鲜毛豆及腐竹中的总DNA,内源LECTIN基因扩增结果均为阳性,表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质.应用花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(NOS)终止子的二重PCR分析,筛选到7个含转基因成分的样品.半嵌套式PCR检测结果表明阳性样品中的外源目的基因为来自根癌农杆菌CP4菌株的EPSPS基因.最后成功进行了扩增内源LECTIN基因、CaMV35S启动子和NOS终止子的三重PCR分析,以及内源LECTIN基因和EPSPS基因的二重PCR分析,得到预期结果.多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,在植物产品的转基因成分检测上具有重要的应用价值.  相似文献