广东省烟草主栽品种病毒病抗性评价     

孙丽霞  杨雷亮  吴颖儿  李华平  管维  邱德义  陈定虎  王章根 《广东农业科学》2016,43(7):18-24

为测定广东省7个烟草主栽品种对TMV和CMV的抗性情况,采用TMV侵染的普通烟叶系列稀释液(CK、1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000、1∶100000)作浓度梯度,选用K326作中感品种对照,机械摩擦接种法接种7个烟草品种(K326、云烟87、RG17、9601、9032、MSK326、MS96-7)。同时,对不同烟草品种选用评价浓度1∶40稀释度进行CMV接种,对接种后20d的病情指数和9d的发病率进行分析。结果表明:从各项自然及接种TMV后的农艺产量性状来看,云烟87、RG17和9601表现相对较好。其中以1∶10000稀释度作为评价浓度进行攻毒接种,接种70d后的病情指数:MS96-7最低为81.06,9032最高为95.46;接种30d后统计发病率:MS96-7最低为71.21%,RG17最高为100.00%。其中MS96-7表现为中抗,云烟87、RG17、9601、9032、K326和MSK326表现为中感;云烟87抗CMV扩展特性最强,9601抗CMV扩展特性最弱;RG17为CMV高感品种,其余5个(含新育成的品种MS96-7、MSK326)为CMV中感至高感间的品种。总体上,没有一个品种表现对TMV免疫或高抗水平,同时,也没有一个品种表现对CMV免疫、高抗或中抗水平。  相似文献   

李痘病毒CP基因在大肠杆菌中的表达、纯化及其抗血清制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

邱德义  杨雷亮  岳巧云  管维  王章根  陈定虎 《植物检疫》2008,22(5)

用RT-PCR的方法克隆李痘病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到原核表达载体pET29(a)上,得到pET29a-PPV重组载体,将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达产物经过SDS-PAGE分析,结果表明PPV CP基因在大肠杆菌中得到了高效表达.分别用亲和柱法和切胶法回收特异性表达蛋白,再免疫家兔,获得PPV特异性抗血清,经过酶联免疫吸附法测定其效价分别为3.2×104和4×103,且具有较高的特异性.  相似文献   

应用AllGlo探针检测对虾白斑综合征病毒研究     

陈定虎  杨雷亮  冯云  张建威  潘星  徐守振 《中国动物检疫》2010,27(11):31-33

用AllGlo探针检测对虾白斑综合征病毒,阳性反应呈典型的S曲线,说明本检测探针和引物设计合理。经灵敏度测定,当样品DNA浓度低至100拷贝/μL时,仍可以有效扩增,但在103/μL之上时结果最佳。同时,经过与传统探针检测对比试验得出:用Taqman标记的探针检测相同量的样品时,AllGlo MAR标记的探针(FAM通道)CT值与FAM标记的探针的CT值没有明显区别,但是MAR标记的探针的荧光信号强度要比FAM标记的探针约高40%,更适合于对虾白斑综合征病毒的检测。  相似文献   

商陆抗病毒蛋白基因的克隆、序列分析及在原核中的表达     

陈定虎  王锡锋  李莉  周广和 《中国农业科学》2002,35(4)

 从美洲商陆 (Phytolaccaamericana)叶片中通过异硫氰酸胍法提取出了完整的总RNA ,经RT PCR扩增出缺失突变型PAP基因 ,将该基因与克隆载体pGEM(r) T相连接 ,从SP6和T7两端同时对其进行序列测定 ,共测得 711个碱基 ,与国外报道的PAP基因序列相比较 ,其同源性达 99.6 %。同时将该基因克隆至原核表达载体pET 5a上 ,转化大肠杆菌菌株BL2 1(DE3) plysS ,在 0 .4mmol/LIPTG的诱导下表达 ,经SDS PAGE分析表明 ,该基因在大肠杆菌中得到了特异性表达 ,表达蛋白大小为 2 6ku ,与预期值相符。Westernblotting分析发现该表达蛋白与法国PAP抗血清有特异反应。琼脂双扩散免疫沉淀法鉴定发现表达蛋白与其自己的抗血清及法国的PAP抗血清均能形成免疫沉淀线 ,且这两条沉淀线在相交处呈融合状态 ,说明原核表达的该蛋白与法国从商陆叶片中提取出的PAP具有高度的同源性 ,也说明本试验准确克隆到了PAP基因且在大肠杆菌中得到了表达  相似文献   

李痘病毒及其2个主要流行株系的分子鉴定   总被引：2，自引：0，他引：2  

杨雷亮  王章根  管维  周灼标  陈定虎 《植物检疫》2008,22(1):15-17

通过分析李痘病毒及其2个不同株系核酸的保守序列,设计出3对引物,即1对通用引物和2对株系特异性引物对李痘病毒进行RT-PCR检测,结果显示通用引物可以同时检测该病毒的2个最主要的流行株系,即D株系和M株系,而D株系引物只能检测出D株系病毒,M株系只能检测出M株系病毒,为口岸对进境种子、苗木及果实等中的李痘病毒准确快速的检测提供了一个有效的方法。  相似文献   

中山口岸从法国木质包装上截获散大蜗牛     

王章根  管维  陈定虎  张建威 《植物检疫》2008,22(2):72

2007年9月19日,中山检验检疫局在从法国进口的蓝湿牛皮的木质包装中截获1头活体蜗牛,经中山检验检疫技术中心植检实验室鉴定,并经广东检验检疫技术中心复核,确认为我国进境植物检疫有害生物--散大蜗牛(Helixaspersa Müller 1774).  相似文献   

用二重PCR方法检测李痘病毒和李坏死环斑病毒   总被引：4，自引：0，他引：4  

周灼标  郑雷青  管维  王章根  姜开明  陈定虎 《植物保护》2006,32(4):107-109

以我国两种重要的检疫性木本植物病毒李痘病毒和李坏死环斑病毒为对象,研究了二重PCR的检测方法,为我国口岸对这两种病毒的检疫提供了一条更为灵敏有效的新方法。  相似文献   

中山地区发现三叶草斑潜蝇初报   总被引：4，自引：0，他引：4  

王章根  管维  陈定虎 《植物检疫》2007,21(1):19-20,F0004

2005年10月到11月间，中山出入境检验检疫局检疫人员在对辖区内出口蔬菜基地病虫害普查时，发现芹菜、番茄、白菜、菜豆、生菜等多种农作物遭到潜叶蝇的严重为害，于是采集受害叶片样品，带回实验室培养，并对羽化的成虫进行了鉴定，同时将部分羽化的成虫标本分别送给中国检验检疫科学院动植物检疫研究所、中国农业科学院植物保护研究所及中国科学研究院动物所的专家进行鉴定。鉴定结果一致确认送检昆虫标本为国内未分布的三叶草斑潜蝇Liriomyza trifolii（Burgess）。  相似文献   

中山口岸从非洲进口原木中截获棕异翅长蠹     

管维  王章根  陈定虎 《植物检疫》2007,21(1):56-56

2006年4月24日，中山检验检疫局中山港办事处检验检疫人员在对来自莫桑比克的斯图崖豆木进行检疫时，现场发现原木虫孔众多，解刨木材后共抓获102头活体成虫，通过形态学及解剖学鉴定并经专家复核，确定为国内尚未分布的棕异翅长蠹[Hetrobostrychus brunneus（Murray）]。  相似文献   

李属坏死环斑病毒怀柔分离物CP基因的克隆、原核表达及其抗血清制备     

李明福  陈洪俊  陈定虎  邱德义  杨雷亮  赵世恒 《植物保护》2009,35(4):29-33

本研究通过RT-PCR技术获得了包含李属坏死环斑病毒怀柔分离物CP蛋白基因的DNA片段,构建了针对pET29a载体的两种表达质粒;〖JP2〗转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达了带不同融合肽段的PNRSV1（25 ku）〖JP〗和PNRSV2（29 ku）融合蛋白。经过Ni NTA亲和柱与SDS PAGE分离纯化,获得大量表达融合蛋白,并免疫家兔制备了融合表达蛋白的特异性抗体。间接ELISA测定其效价分别为8×103和3.2×104。  相似文献