进境大丽花种子携带大丽花花叶病毒的分子检测     

陈青  黄峰  廖富荣  林石明  陈红运 《植物检疫》2012,(2):20-22

通过生长性试验、症状观察、PCR扩增及序列测定,从一批进境的大丽花种子上发现大丽花花叶病毒(Dahlia mosaic virus,DMV)。序列比对结果表明,发现的DMV分离物与DMV-D10存在较近的亲缘关系。根据已报道引物P3/P4的测序结果,并将其与已有的DMV序列进行比对,设计1对预期扩增片段为750 bp的检测引物P5/P6。实验结果证实,P5/P6的扩增效率优于已报道的引物P1/P2和P3/P4,适用于DMV的分子检测。  相似文献   

杂交诱捕实时荧光PCR检测番茄环斑病毒   总被引：2，自引：0，他引：2  

赵文军  陈红运  朱水芳  谭天伟 《植物病理学报》2007,37(6):666-669

 番茄环斑病毒(Tomato ringspot nepovirus,ToRSV)广泛分布于欧美及大洋洲,能侵染葡萄、桃、苹果、樱桃、番茄及烟草等150多种植物,引起多种病害,严重时导致绝产^[1]。  相似文献   

黄瓜绿斑驳花叶病毒cp基因的原核表达及抗血清制备     

陈红运  赵文军  白静  李桂芬  朱水芳 《植物病理学报》2007,37(5):467-471

 采用RT-PCR方法克隆了黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁分离物(Cucumber green mottle mosaic virus Liaoning isolate, CGMMV-LN)的cp基因并连接到原核表达载体pGEX-4T-3和pET-22b (+)上, 将获得的重组子pGEX-4T-3-CGMMV CP和pET-22b (+)-CGMMV CP转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和W estern blot分析表明, cp基因在大肠杆菌中获得了高效表达, 融合蛋白分子量分别为43.8 kDa和17.3 kDa。将17.3 kDa融合蛋白纯化后免疫家兔, 制备了CGMMV特异性抗血清, 抗原包被间接ELISA法(ACP-ELISA)测定抗血清的效价为1/20 000。  相似文献   

苜蓿萎蔫病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立   总被引：15，自引：1，他引：15  

漆艳香  赵文军  朱水芳  肖启明  廖晓兰  陈红运 《植物检疫》2003,17(5):260-264

苜蓿萎蔫病菌是我国对外检疫性二类有害生物，目前国内尚无发生6在出入境捡验检疫中主要是采用生物学和血清学方法进行检测，劳动强度大，耗费时间长。根据苜蓿萎蔫病菌与其它细菌菌株16SrDNA序列差异，设计出对苜蓿萎蔫病菌具有稳定点突交特异性探针，利用该探针对棒形杆菌属4个种及其它属细菌进行了实时荧光PCR检测实验。结果表明，只有苜蓿萎蔫病菌能检测到荧光信号，其它细菌没有荧光产生。该方法特异性强，灵敏度高，能检测到21．4fg质粒DNA，比常规PCR灵敏100倍，而且整个过程只需要2～3h。该方法可有效地应用于进出境病原菌检测之中。  相似文献   

玉米矮花叶病毒北京分离物复制酶基因的克隆及序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

陈红运  范在丰  邓丛良  李怀方 《植物病理学报》2002,32(1):33-36

 以MDMV北京分离物RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增了含复制酶(NIb)基因的DNA片段,将其克隆到p UC18载体上并进行序列分析。结果表明:NIb基因由1563个碱基组成,编码521个氨基酸并含有高度保守基序GDD。NIa/NIb和NIb/CP交界处的蛋白酶切割位点分别为Q/C和Q/S-NIb基因(北京分离物)在碱基数目上与保加利亚分离物完全一致,二者的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为70.6%和76.6%,而与SCMV-SC的核苷酸及氨基酸序列同源性则高达81.3%和92.1%。  相似文献   

兰花褐斑病菌实时荧光PCR检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

丁翠珍  赵文军  寸东义  陈红运  朱水芳 《植物病理学报》2010,40(3):235-241

兰花褐斑病菌(Acidovorax avenaesubsp.cattleyae)是兰花上一种重要进境检疫性有害生物,可通过植株和种子远距离传播,其传染性强,对兰花危害性大。根据核糖体ITS序列设计了TaqMan-MGB探针并建立了实时荧光PCR检测方法。该方法能够特异性检测兰花褐斑病菌,所有供试的目标菌株检测结果均为阳性,而其它28个对照菌株(含同属内其它种及avenae种下其它亚种)均为阴性。利用该方法从发病兰花植株总DNA中检测到该病菌。本方法灵敏度高,检测极限达9×10-9μg DNA,操作方便快速,结果可靠,适合于口岸兰花的进出境检疫及兰花种苗健康质量控制。  相似文献   

实时荧光RT-PCR一步法检测南方菜豆花叶病毒          下载免费PDF全文

白静  陈红运  傅俊范  李桂芬  朱水芳 《植物保护学报》2007,34(1):78-82

南方菜豆花叶病毒（Southem bean mosaic virus，SBMV）是我国二类检疫性有害生物，以南方菜豆花叶病毒日本分离物（SBMV-J）总RNA为模板，采用RT-PCR方法扩增病毒外壳蛋白基因及其上游基因的cDNA片断并将其克隆到pMD18．T载体上。序列分析结果表明：SBMV-J cp基因由801个核苷酸组成，编码266个氨基酸，SBMV．J与其它分离物及株系印基因的核苷酸序列同源性为83％-97％，氨基酸序列同源性为86％-97％。由于SBMV各分离物及株系印基因的同源性较低，难于设计出较长的普通PCR引物。通过较短引物设计和TaqMan-MGB探针技术，建立了SBMV的实时荧光RT-PCR一步检测方法。该方法的检测低限是0．16pg，最佳检测总RNA的量是0．16ng。  相似文献   

南瓜果实中黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-PCR检测及cp基因序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

李红霞  白静  陈红运  朱水芳  谭天伟 《植物检疫》2007,21(5):268-270

以来自甘肃的南瓜果实样品中提取的总RNA为模板进行RT-PCR扩增，序列测定和分析结果表明：扩增片段包含CGMMV的外壳蛋白基因和3’非编码区，证明南瓜果实中存在黄瓜绿斑驳花叶病毒，将其印基因序列与来自国内不同地区的其他CGMMV分离物进行序列比对，发现国内各分离物间的同源率高，有很近的亲缘关系。  相似文献   

玉米矮花叶病毒原北京分离物的分子鉴定   总被引：4，自引：0，他引：4  

范在丰  陈红运  李怀方 《农业生物技术学报》2001,9(1):12-12

玉米矮花叶病自1968年在河南新乡等地发生以来，在全国各玉米产区相继有不同程度的发生。该病近年在华北各地流行，导致玉米大面积减产、品质降低，造成了严重的经济损失。近20年有关病原生物学及血清学的研究结果表明，我国至少存在着3种相关的病原可导致玉米矮花叶病：玉米矮花叶病毒（MDMV）B株系（MDMV-B），MDMV-G（或白草花叶病毒）以及甘蔗花叶病毒（SCMV）。它们均属于马铃属Y病毒属（Potyvirus）中侵染禾本科植物的甘蔗花叶病毒亚组（SCMV Subgroup）。虽然MDMV-B并不侵染甘蔗，但是由于其外壳蛋白基因的核苷酸序列与SCMV的同源性高于MDMV的其它株系，已被重新归类为SCMV-MDB株系。为了明确我国曾鉴定为MDMV-B的玉米矮花叶病毒原的分类地位及其分子生物学特征，以利于探索针对该病毒的有效控制措施，测定其基因组RNA全序列是很必要的。  相似文献