灵芝漆酶在黑曲霉中的重组表达及发酵条件优化     

孙英霞  张铁鹰  安静  郑梦莉 《中国畜牧兽医》2022,49(11):4218-4227

【目的】 在黑曲霉（A.niger）中重组表达灵芝L菌漆酶基因，并对其发酵条件进行优化，旨在获得一株高产灵芝漆酶的黑曲霉基因工程菌。【方法】 从灵芝L菌克隆漆酶基因Lac-L，并根据黑曲霉密码子偏好性进行优化。选用黑曲霉糖化酶启动子（PglaA）、信号肽及终止子为表达原件，以米曲霉pyrG基因为筛选标记，构建漆酶表达盒，采用聚乙二醇-CaCl₂法将其转化至黑曲霉X1（ΔpyrG）原生质体中。对转化子进行PCR验证及固态发酵酶活测定，筛选高产漆酶重组菌株，并对阳性转化子固态发酵培养基碳源、无机与有机氮源比例、Cu²⁺浓度及发酵时间进行优化。【结果】 经尿嘧啶缺陷及含2，2'-联氮-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2，2'-azinobis （3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ammonium salt），ABTS）培养基筛选获得25株重组漆酶转化子，酶活复筛获得灵芝漆酶异源表达6号重组菌株，发酵72 h酶活可达3 532.6 U/kg，宿主菌株的酶活仅为58.37 U/kg。重组6号菌优化后的最适固态发酵条件为：以麸皮为基础培养基，添加2%麦芽糖、2%（NH₄）₂SO₄、0.25 g/L CuSO₄，发酵60 h时重组菌株产漆酶活力最高，达到6 255.47 U/kg。【结论】 在黑曲霉中成功实现灵芝L菌漆酶基因Lac-L的异源表达。  相似文献   

黑曲霉发酵对咖啡碱代谢的影响     

《江西农业学报》2022,(5)

普洱茶固态发酵过程的实质是微生物代谢作用,而黑曲霉在代谢中为优势菌,对咖啡碱代谢产生巨大影响。以黑曲霉为单一菌种,分别接种到茶叶、茶汤和含咖啡碱的液态培养基,并测定不同发酵阶段嘌呤碱的含量。结果表明,黑曲霉对茶叶碱的影响大于可可碱,对可可碱的影响大于咖啡碱,在咖啡碱液态培养基发酵中,茶叶碱增加幅度最大,且与咖啡碱浓度存在正相关性。  相似文献   

2株源于红树林具有黑曲霉抗性细菌的筛选及发酵条件优化     

阮羽萱  郑添鹏  魏宝阳  刘博宇  阮颖  黄勇 《江苏农业科学》2022,50(8):133-140

黑曲霉（Aspergillus niger）是一种常见的病原微生物，极易造成粮食霉变、果实腐烂等问题，产生的毒素严重危害人体健康。红树林作为一种特殊的生态系统，具有重要的微生物学资源与经济价值。首先采用常规细菌筛选方法分离菌株，通过观察形态特征以及16S rRNA基因序列进行鉴定。然后通过单因素试验并结合正交试验确定菌株Z-2001、R-2008生长的最佳培养条件，并通过拮抗试验确定Z-2001、R-2008菌株对黑曲霉的抑制效果。发现Z-2001、R-2008菌株最佳基础培养基为营养琼脂培养基（NA）。Z-2001菌株最佳培养基配方为葡萄糖（2.0%）+蛋白胨（0.8%）+MgSO₄·7H₂O（0.30%）+牛肉膏（0.3%）+NaCl（0.5%）,最佳pH值、温度、转速分别为8、37℃、210 r/min,黑曲霉抑菌率为76.80%。R-2008菌株最佳培养基配方为葡萄糖（2.0%）+酵母粉（2.4%）+MgSO₄·7H₂O（0.20%）+牛肉膏（0.3%）+NaCl（0.5%）,最佳pH值、温...  相似文献   

测定微生物中黄曲霉素含量的一种新的快速萤光法     

卢大用  刘冬玮 《上海海洋大学学报》1998,(3):265-267

黄曲霉素是由微生物分泌的具有高度致癌性的物质[CAST1989，Pestka和Casale1990]，检测能产生黄曲霉素的食品和粮食中黄曲霉素含量是十分必要的，它是现代食品分析的重要内容之一。由于黄曲霉素的含量甚微，又易于与其它物质混淆，因此其测定方法比老复杂。以往常用的测定黄曲霉素的方法是先经层析后，再测定其光吸收值或荧光值。本法利用碱能使黄曲霉素分解的原理（图1），无需进行层桥分离而测其荧光值，这是一种新的快速测定方法。1材料与方法图1碱处理后黄因毒素BI的结构Fig．IThestructureofaflatoxlnBIafteralkalitreatment1．1…  相似文献